狂犬病病毒rSRV9减毒株与亲本SRV9毒株的病毒毒力比较

通过半数荧光灶形成量(FFD50)试验、小鼠半数致死量(LD50)试验、免疫组织化学试验,对10个培养代次的狂犬病病毒SRV9亲本毒株和rSRV9减毒株的病毒滴度、毒力及其致病性等病毒生物学特性进行检测,以鉴定拯救狂犬病rSRV9减毒株与亲本SRV9毒株病毒滴度及毒力的差异性。试验结果显示,10个培养代次的狂犬病病毒rSRV9减毒株FFD50值为5.44～7.46logFFD50/0.1mL,LD50值为2.47～2.68logLD50/0.03mL;亲本SRV9毒株FFD50值为6.36～6.79logFFD50/0.1mL;LD50值为5.56～5.79logLD50/0.03mL,通过免疫组织化学试验,检测出脑内注射SRV9毒株和rSRV9减毒株死亡小鼠脑神经细胞内的狂犬病病毒。     

猪PPARs基因在胚胎附植期子宫内膜表达特性研究

过氧化物酶体增殖物活化受体(PPARs)的表达及其功能的调控,可能在维持妊娠或诱发分娩的机制中产生作用。本研究利用免疫组化法,对PPARα、β/δ和γ基因在妊娠第12天、18天及第25天母猪的子宫内膜组织表达特点进行研究。结果表明:在胚胎附植早期,PPARβ在多数细胞中均有表达,且以绒毛膜滋养层细胞表达最强;而PPARα和γ则主要表达于腔上皮和腺上皮及子宫内膜外层组织细胞,但表达不强且多数无分布规律性。在附植中期,3种亚型的表达强弱差别不大,且主要呈无规律性分布;但在附植晚期,PPARβ的表达明显减弱且在绒毛膜细胞滋养层、合胞体滋养层、基质以及子宫腔上皮细胞中无表达,然而PPARβ和γ却仍表达于多种细胞中。可见,PPARβ与胚胎附植的初期、PPARα和γ与胚胎附植的中后期很可能密切相关。     

ALV-J诱发鸡成红细胞白血病的临床病例分析

2010—2011年检测3批病例,分别来自泰安新泰的110日龄麻鸡、济宁泗水的90日龄麻鸡和济南20日龄蛋雏鸡。病鸡均表现消瘦、精神萎靡、嗜睡、鸡冠稍苍白或发绀等,死亡率分别为20%、12%和18%。剖检,3批病鸡均可见肝脏、脾脏及肾脏严重肿大,胸腺、肌肉、腺胃等组织器官出血。新泰病鸡肝脏和肺脏表面有明显的白色肿瘤结节。血液涂片与骨髓涂片观察发现大量红细胞转变为体积较大,胞质丰富蓝染,胞核大呈圆形、核内有很纤细的染色质、核周围有空泡的成红细胞,以晚幼成红细胞为主;组织学检查发现,在所有组织脏器血管及间质内均可观察到大量聚集的与血涂片中形态相一致的成红细胞,并且可观察到核分裂相,但未见淋巴细胞聚集。通过血液学和组织学观察不仅排除马立克氏病和网状内皮组织增生症,而且排除中毒及代谢性疾病的可能。以肝脏组织DNA为模板,在3批病鸡中利用PCR检测均扩增出J亚群禽白血病病毒(ALV-J)gp85基因924bp的特异性片段,而A亚群禽白血病病毒(ALV-A)、B亚群禽白血病病毒(ALV-B)阴性。免疫组织化学检测结果表明,发病鸡肺脏和脾脏等含血量丰富的组织内发现组织细胞及成红细胞胞质呈ALV-J抗原阳性。根据以上检测结果确定此3批患有成红细胞白血病病鸡均由ALV-J感染引起。ALV-J引起单纯鸡成红细胞白血病在国内为首次发现。ALV-J在我国鸡群中的多潜能致瘤机制需要进一步的研究。     

绒山羊肥大细胞类胰蛋白酶的免疫组化及图像分析研究

[目的]探讨绒山羊肥大细胞中是否存在类胰蛋白酶及不同固定液对其常规染色和免疫组化染色结果的影响。[方法]采用兔抗羊肥大细胞类胰蛋白酶多克隆抗体间接免疫过氧化物酶技术检测由Carnoy液和中性福尔马林液(NBF)固定的绒山羊空肠、瓣胃和肺等组织肥大细胞中是否存在类胰蛋白酶。同时采用Image-ProPlus图像分析软件和人工计数法对结果进行分析,比较经常规染色和免疫组化染色后不同固定液固定组织中肥大细胞的形态及数量,进而判断Carnoy液和中性福尔马林液(NBF)对该检测技术的影响。[结果]兔抗羊多克隆抗体与绒山羊肥大细胞中的类胰蛋白酶具有良好的交叉反应,证实绒山羊肥大细胞胞浆颗粒中存在类胰蛋白酶。同时,与Carnoy液相比较,NBF液固定组织能较好地反映肥大细胞在组织中的数量和形态变化。[结论]绒山羊肥大细胞中存在类胰蛋白酶,且与Carnoy液相比较,NBF液是一种更为适合绒山羊肥大细胞常规染色和免疫组化染色的固定剂。     

葛根开花习性观察及不同花期花粉活力的相关分析

[目的]了解葛根的开花习性和花粉可育性,为葛根杂交育种提供理论依据.[方法]在广西龙州县,于葛根花序形成后每天观察其花蕾的发育进程,在盛花期标记即将开放的花序,连续观察其开花进程、记录花朵盛开的时间和天气状况;采用氯化三苯四氮唑(TTC)染色法和I2-KI染色法检测葛根不同花蕾期(半伸期、始开期、半开期和盛开期)的花粉...     

圈养大熊猫戊型肝炎病毒感染调查

采用ELISA、巢式RT—PCR、免疫组织化学等多种方法对北京动物园保存的大熊猫组织材料和部分现存活个体的粪便、血清等样品进行戊型肝炎病毒抗原调查。调查发现在死亡大熊猫肝脏组织中戊肝病毒抗原阳性检出率为88．9％（8／9）,肾脏的阳性检出率为85．7％（6／7）。现活体动物的粪便、血清抗原检查没有出现阳性结果。结果说明死亡大熊猫曾感染过戊型肝炎病毒,现有个体中没有戊肝病毒感染。     

布莱凯特黑牛CRTC1、CRTC3基因克隆测序及表达分析

为研究布莱凯特黑牛CRTC1、CRTC3基因序列和表达情况及其与生长发育的关系,本实验运用克隆测序方法检测CRTC1、CRTC3基因CDS区,并进行生物信息学分析;运用qRT-PCR技术检测不同组织和不同月龄的mRNA相对表达量;并用免疫组化技术对蛋白进行定位分析。结果显示:克隆测序获得的布莱凯特黑牛CRTC1、CRTC3基因CDS区分别为1773 bp和1725 bp,分别编码590、575个氨基酸;运用生物信息学分析后发现CRTC1、CRTC3结构稳定性差,为亲水性、偏酸性蛋白;进化树显示与牛、瘤牛、山羊和绵羊的同源性高(>80%),蛋白互作网络图显示CRTC1、CRTC3蛋白与FoxO基因家族、AMPK家族等基因相互作用强。qRT-PCR结果显示CRTC1、CRTC3基因分别在睾丸和脂肪中mRNA相对表达量最高(P<0.01),在肌肉组织中亦有表达。在肌肉组织中,CRTC1、CRTC3基因mRNA相对表达量随着年龄的增加逐渐降低;免疫组化显示CRTC1、CRTC3蛋白主要在肌肉组织的肌原纤维中表达。以上结果表明,CRTC1、CRTC3基因调控肌纤维生长发育,进而参与肌肉生长发育相关调节。     

雄性食蟹猴生殖系统中Ghrelin的分布定位

本文采用免疫组织化学染色方法,探讨ghrelin在雄性食蟹猴生殖系统内的分布定位。通过对ghrelin免疫阳性细胞在生殖系统中分布部位、含量及细胞形态等方面的研究,为今后ghrelin在食蟹猴体内的功能研究奠定形态学基础。免疫组化染色发现,ghrelin阳性细胞在食蟹猴的生殖系统中有分布。Ghrelin免疫阳性细胞被染为棕色到棕黑色,主要分布于睾丸、附睾及输精管中,精囊腺中无ghrelin阳性细胞分布。Ghrelin阳性细胞在组织中多呈散在分布。细胞大小不一、形态各异,多呈圆形、卵圆形、锥体形、长柱形及其他不规则形。     

不同温度、空气湿度及保存方式对番茄花粉活力的影响

研究不同温度、空气湿度及不同保存方式对番茄花粉活力的影响,以番茄钱江金珠的父本花粉为材料,采用TTC染色法进行番茄花粉活力的测定。结果表明,4个温度梯度上,15~25 ℃是较好的制种环境,特别是20~25 ℃效果最好,当温度超过30 ℃时,由于父本花粉活力的下降,制种产量将受到影响;在4个空气湿度梯度上,花粉活力都普遍在83.9%及以上,基本能满足实际制种的需要;在5个保存方式上,室内常温及冷藏柜保存方式只能保持5 d左右的花粉活力,冷冻柜、常温除湿柜、玻璃器皿+干燥剂保存方式在20 d时还能保存93.9%~97.2%的活力,特别是冷冻柜储存能保持60 d,此保存方式最有利于保存番茄花粉活力。     

水鬼蕉生物碱对人肝癌HepG-2细胞凋亡的影响

为揭示水鬼蕉生物碱(AHL)对HepG-2细胞作用,采用FITC-Annexin V/PI双染色法检测AHL对HepG-2细胞凋亡的影响,并检测了AHL对HepG-2细胞内Ca~(2+)浓度、活性氧(ROS)、pH的影响。结果表明:AHL可以通过细胞内ROS、Ca~(2+)、pH三者间相互作用而诱导细胞凋亡。