抗速灭威单链抗体基因在巴斯德毕赤酵母中的表达及性质研究

选用巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）系统表达特异性抗速灭威单链抗体（scFv）基因,以为速灭威特异性抗体的大量制备奠定基础。设计引物扩增阳性克隆scFv基因,亚克隆至表达载体pPICZαC,获得重组酵母表达质粒pPICZαC-scFv,线性化pPICZαC-scFv并高效电转P.pastoris（X-33）,对转化子进行抗性梯度筛选得到一株高效表达的X-33-Pp-SMW-12-6菌株。对获得的菌株先后进行表达条件的优化、优化条件下的诱导表达及单链抗体性质研究。结果表明：P.pastoris-scFv的质量接近其亲本E.coli-scFv的质量,X-33-Pp-SMW12-6在优化条件下的表达产量达28mg/L,比未优化前的产量提高了约8mg/L,经纯化后抗体纯度可达85%以上。因此,利用P.pastoris表达系统制备抗速灭威单链抗体比细菌表达系统更有效、更经济。     

猪CD8B表达谱、基因多态性及其与血液免疫性状的关联分析

白细胞分化抗原8(cluster of differentiation 8,CD8)是主要表达在CD8+T细胞表面的共受体和信号转导分子.CD8B基因编码CD8蛋白的β链,在免疫应答中起着潜在的调节作用.为分析CD8B基因在猪(Sus scrofa)不同组织中的表达特征,并探究CD8B基因多态性对血液免疫性状的遗传效应,本研究利用qRT-PCR测定CD8B基因在大白猪7个组织中的表达量,并用PCR产物测序与限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)方法对382头大白猪、84头长白猪和90头松辽黑猪CD8B基因编码区进行SNPs检测,以及分析CD8B基因突变对大白猪外周血T淋巴细胞亚群和血常规指标的影响.结果表明,CD8B基因在脾脏中的mRNA表达量最高,然后依次是肺脏、胃、肝脏、肾脏、心脏和肌肉.CD8B基因外显子5处检测到1个错义突变(c.602G＞A),在大白猪、长白猪和松辽黑猪群中均存在3种基因型(AA、AG和GG型),且3个猪种都是GG为优势基因型.统计分析显示,CD8B基因多态性与大白猪血液中的CD4+CD8-、CD4 CD8+、CD4 +/CD8+、血红蛋白含量(hemoglobin,HGB)和红细胞压积(hematocrit,HCT)指标显著相关(P＜0.05).最小二乘分析表明,3种CD8B基因型个体具有不同的血液参数,其中GG型的CD4+CD8-指标显著高于AG型,AG型的CD4-CD8+指标显著高于GG和AA型,GG和AA型的CD4+/CD8+、HGB和HCT指标显著高于AG型(P＜0.05).因此,CD8B基因可能参与血液生理指标的调控,可作为影响猪免疫性状的重要功能候选基因.本研究为进一步揭示CD8B基因的生物学功能提供依据,也为猪的标记辅助抗病育种提供了基础资料.     

嗜水气单胞菌外膜蛋白（OMP）的原核表达及其对BALB/c小鼠的免疫保护研究

为确定嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,Ah)AS1.927株外膜蛋白(OMP)的原核表达产物是否具有抗原性及其对小鼠的免疫保护力.本研究根据GenBank上嗜水气单胞菌外膜蛋白ompA基因序列(GenBank登录号:AF146597)设计1对引物,克隆出ompA全长基因1020 bp(GenBank登录号:EU309491),经Sal Ⅰ和Xhol Ⅰ双酶切后连接pET-30a(+),转化大肠杆菌(Escherichia cDli)BL21,IPTG诱导表达,并进行SDS-PAGE及Westernblot分析鉴定.结果显示重组基因工程菌E.coli[pET-30a-ompA]表达的融合蛋白分子量约为40.7kD,可以被鼠抗嗜水气单胞菌外膜蛋白抗血清识别.将重组基因工程菌Ecoli[pET-30a-om-pA]口服免疫BALB/c小鼠(Mus mussulus);末次免疫1周后用放射免疫分析小鼠肠粘膜分泌型免疫球蛋白A(sIgA)水平,检测结果揭示,该重组基因工程菌能提高sIgA的分泌(P<0.05);同时在小鼠血清中测出特异性抗体IgG(P<0.05).末次免疫2周后用100 LD50的Ah AS1.927(3.3×105> cfu/mL)腹腔注射攻击小鼠,口服重组菌对小鼠的相对免疫保护力(relative percent survival,RPS)为75%,表明重组基因工程菌可诱导小鼠对AhAS1.927产生一定的免疫保护作用.     

13种优良绿化攀缘植物对干旱胁迫的生理响应

为弥补国内在园林绿化攀援植物抗旱能力方面的研究空白,为园林绿化实践提供优良抗旱攀援植物品种,试验以叶片保水力、可溶性糖含量和游离脯氨酸含量等生理生态学指标,对项目组从资源圃中27科共54种攀援植物中筛选出的13种综合性状优良的攀援植物品种,在干旱胁迫下的生理响应进行了研究。研究结果表明,不同供试攀援植物品种在干旱胁迫下表现出来的反应差异比较明显,其中耐旱性最强和耐旱性最弱的材料在许多指标上的差异达到了1倍左右甚至更大,而且具有一定的规律。对13个供试攀援植物品种在抗旱性方面的综合表现进行了模糊评价,初步确定鸡蛋果、红萼龙吐珠、美丽赪桐、金银花、麻雀花、星果藤和清明花等7个品种为比较抗旱的品种,同时也具有较为优良的景观性状,可供将来生产实践中推广应用。     

ELISA法对禽蛋中氯霉素残留量检测

试样中残留的氯霉素与氯霉素酶标记物共同竞争氯霉素抗体,形成有酶标记或无酶标记的抗原抗体复合物而被吸附于微孔底板。用酶标仪在波长450 nm处测定吸光度,根据吸光度得出样品中氯霉素的残留量。对禽蛋中氯霉素残留量进行测定,并对其加标回收率、再现性、重复性进行了分析研究,均能够达到国际氯霉素残留量的检测要求。     

2ZZ-6A型机动式水稻插秧机

2ZZ-6A型机动式水稻插秧机采用曲柄 摇杆式栽植结构,单轮驱动,拖板仿形,结构 简单,操作维修方便,行走马力大,越埂能力 强,取秧量调整准确,作业质量稳定,可靠性 高。更换Ⅳ、V轴一对啮合齿轮,可实现100、 120、140、170mm等四种株距,能够满足不同 地区种植农艺需要,还可配置水稻侧深施肥 装置,实现节本增效。本机广泛适用于盘育带 土秧苗的插秧及侧深施肥作业。 主要技术参数:     

免疫亲和柱净化高效液相色谱荧光法测定调味品中赭曲霉毒素A

建立了免疫亲和柱净化高效液相色谱法测定调味品中赭曲霉毒素A。样品用甲醇与NaHCO3体积比为60:40的溶液提取,经免疫亲和色谱柱纯化,应用液相色谱法检测。结果表明,空白样品按照质量分数为1.0,20,50μg/kg添加赭曲霉毒素A,回收率为75.0%～102.0%,精密度小于15%,方法检测灵敏度为0.5μg/kg。免疫亲和柱净化高效液相色谱法测定调料中赭曲霉毒素A是一种简单、快速、准确的方法。     

飞毛腿XC系列拖拉机的正确使用与操作维修（二）

新车投入正常使用前的磨合与检查调整 新拖拉机在出厂前,虽然在制造厂经过严格的装配、检验并试运转,但一部分零部件的工作表面总是存在细微的不平。如立即投入全负荷使用,摩擦表面将会产生拉伤和划痕等损坏现象,降低拖拉机的使用寿命,甚至会引起零件的烧死或损坏。拖拉机磨合后,磨擦表面逐步研磨平滑。保养时更换润滑油磨屑将会带走。所以拖拉机必须经过磨合、清洗后才能正常使用。     

飞毛腿XC系列拖拉机的正确使用与操作维修（三）

液压系统是液压悬挂装置的重要组成部分。飞毛腿系列拖拉机采用的是分置式液压系统。 1．工作原理 液压系统是提升农具的动力装置。利用发动机动力．以液压油为介质．通过液压系统的机械装置,产生和传递液压能,使农具升起。它由液压泵、分配阀和液压缸等主要部件组成。     

飞毛腿XC系列拖拉机的正确使用与操作维修（四）

悬挂机构是把农具悬挂在拖拉机上的装置。它传递拖拉机对农机具的升降力和牵引力,并保证悬挂农具工作时保持正确的位置。它主要由提升油缸、左右提升臂、左右下拉杆、左右提升杆、左右限位拉杆、上拉杆、安全撑杆等组成。为保证强度和犁地时具有足够的牵引力,上提升杆通过固定底座固定在机架后横梁上,而悬挂机构的左右下拉杆的一端固定在后桥壳上,以充分保证农田作业的需要。