黄芩苷酯化物缓解H2O2诱导的猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)氧化应激反应的研究

试验旨在探讨黄芩苷酯化物(BE)对H₂O₂诱导的IPEC-J2细胞氧化应激的缓解作用及其分子机制。采用CCK-8法检测细胞活性筛选出黄芩苷酯化物的适用浓度;采用ELISA法检测细胞中活性氧(ROS)水平、超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性、丙二醛(MDA)含量;采用qPCR法检测细胞中HO-1和NQO-1 mRNA的表达量;采用WB法检测胞浆Nrf2蛋白、胞核Nrf2蛋白和HO-1的蛋白表达水平;免疫荧光法检测Nrf2蛋白入核情况。结果显示,BE的适用浓度为10、20、40 mmol/L;与对照组相比,H₂O₂组中ROS、MDA含量显著升高(P<0.05);SOD、CAT活性显著下降(P<0.05);胞浆Nrf2蛋白与胞核Nrf2蛋白表达量显著升高(P<0.05);HO-1 mRNA的表达量显著升高(P<0.05);NQO-1 mRNA (P<0.05)表达量显著降低。与H₂O₂组相比,中、高剂量BE显著降...     

反刍动物瘤胃上皮细胞的培养方法及其在炎症反应中的应用

反刍动物主要通过瘤胃进行消化,由于瘤胃内存在一些微生物,因此其能够将动物采食的物质通过发酵转化为其他物质,瘤胃上皮细胞（Rumen Epithelial Cells,RECs）吸收这些物质后,能够为动物机体提供能量,所以动物RECs发育良好才能更好地进行一系列生理活动。体外培养RECs与活体试验相对比,前者的操作技术更简单、可控性更高、成本较低并且能够解决试验个体之间存在差异的问题,为体外研究瘤胃组织生长发育规律、营养机制、瘤胃疾病等提供良好的细胞模型。体外培养RECs时,炎症介质含量增加会使细胞炎症因子表达增强,诱导炎症反应,本综述通过介绍瘤胃上皮的结构功能以及RECs的体外分离培养、纯化、鉴定技术,及RECs在炎症反应中的应用进展,以期为RECs的研究及应用提供参考。     

自噬通量在小檗碱抑制奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡中的作用

为探究小檗碱对脂多糖诱导奶牛子宫内膜上皮细胞（BEECs）凋亡的调控机理,首先利用CCK8法确定添加药物的细胞毒性,然后将BEECs分为空白（C）组、脂多糖（LPS）组（1μg/mL）、小檗碱（BBR）组（BBR10μmol/L+LPS 1μg/mL）、氯喹（CQ）组（CQ 20μmol/L+BBR 10μmol/L+LPS 1μg/mL）,用流式细胞术检测细胞凋亡率,用Western blot检测BAX、BCL2、LC3II、P62蛋白表达量。结果显示：LPS组BEECs凋亡率和BAX/BCL2较空白组升高（P<0.01）;BBR组细胞凋亡率和BAX/BCL2低于LPS组（P<0.01）;CQ组细胞凋亡率高于其他3组（P<0.01）,而BAX/BCL2与空白组差异不显著。LPS组BEECs表达P62高于空白组（P<0.01）;BBR组与LPS组相比LC3II升高（P<0.05）、P62降低（P<0.01）;CQ组LC3II高于其他3组（P<0.01）,CQ组P62与空白组、BBR组差异显著而与LPS组差异不显著。说明LPS降低BEECs自噬通...     

农杆菌介导的马铃薯茎段遗传转化体系优化研究

以甘肃主栽品种的茎段为外植体,研究了不同转化条件(菌液浓度、感染时间、预培养及共培养时间)对转化效率的影响,以及选择压和培养基对抗性出芽的影响,初步建立了马铃薯品种“陇薯3号”和“台湾红皮”的遗传转化体系并获得了转化植株。卡那霉素生根筛选和PCR鉴定结果表明,再生的转化植株假阳性率比较高,要获得预期的转基因植株群体需加大遗传转化工作中转基因植株的数量。     

槟榔防治小瓜虫病初报

多子小瓜虫为纤毛虫纲,膜口亚目,凹口科,小瓜虫属。其幼虫钻入鱼体表上皮层或鳃组织间刺激周围的上皮细胞增生,剥食吸收上皮细胞及血球营养造成寄主烦躁不安最后死亡。由于其特殊生物学特性,容易形成胞囊,能抵御外界不利环境及一般药物作用,所以难以找到理想的药物进行治疗。治     

影响农杆菌介导甜瓜子叶遗传转化的因素

以甜瓜子叶作为根癌农杆菌介导转化的受体,通过GUS基因瞬时表达率的分析,研究此转化体系的最佳实验参数.实验结果表明,预培养时间、预培养后对外植体进行处理、感染时间、共培养时间、农杆菌工程菌的浓度等对转化效率都有一定的影响,但是根癌农杆菌诱导物AS并不能大幅度提高转化效果.对外植体进行重新处理,预培养2 d,用OD560为0.3的农杆菌工程菌感染15～25 min,共培养3～4 d的理想条件下,GUS瞬时表达率可达85%.     

轮状病毒感染肠上皮细胞激活宿主先天免疫研究进展

轮状病毒(RV)是引起婴幼儿、幼畜禽急性肠胃炎的人畜共患病原,常与其他病原体混合感染,多以呕吐,严重水样腹泻,脱水为临床症状,感染后具有较高病死率,对人类公共卫生以及养殖业造成极大危害.RV病原相关分子模式(PAMP)可被肠上皮细胞(IECs)中一组可遗传的模式识别受体(PRR)识别,通过IECs、先天免疫细胞与RV互...     

玉米农杆菌转化方法

玉米是世界上三大粮食作物之一,目前,玉米产量和品质的提高较大程度依靠基因工程技术.而玉米的农杆菌转化是对玉米基因组进行遗传修饰的有效手段.综述了玉米农杆菌转化的受体、影响农杆菌转化效率的因素,以有效地提高转化效率.     

黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因转化辣椒的研究

以辣椒品种'B162'为试材,探讨了通过根癌农杆菌介导法将黄瓜花叶病毒外壳蛋白(CMV-CP)基因转化辣椒的适宜条件.结果表明,将辣椒带柄子叶进行预培养2 d后,用D600 nm为0.3的根癌农杆菌菌液浸泡7 min,再经过共培养2 d后转移到筛选分化培养基中进行培养,有利于获得辣椒抗性不定芽.通过对获得的10株抗性不定芽进行PCR检测,其中有2株扩增出目的条带,初步证明CMV-CP基因已经转入辣椒不定芽中.     

豇豆胰蛋白酶抑制剂转基因棉花的获得

利用根癌农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）介导法将豇豆胰蛋白酶抑制剂（Ｃｏｗ－ｐｅａＴｒｙｐｓｉｎＩｎｈｉｂｉｔｏｒ,ＣｐＴＩ）基因转移进入棉花（ＧｏｓｙｐｉｕｍｈｉｒｓｕｔｕｍＬ．）。棉花幼苗的下胚轴与携带有ＣｐＴＩ基因和Ｎｐｔ－Ⅱ基因的根癌农杆菌共培养,在选择培养基上诱导出了卡那霉素抗性（Ｋｍｒ）愈伤组织。选择Ｎｐｔ－Ⅱ阳性的胚性愈伤组织在胚状体诱导培养基上进行胚状体诱导,继而在分化培养基上进行植株分化,最终获得了再生棉花植株。经Ｎｐｔ－Ⅱ分析、ＰＣＲ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ检测证明,外源ＣｐＴＩ基因和标记基因（Ｎｐｔ－Ⅱ基因）存在于转化棉株及其后代中。抗棉铃虫（Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓａｒｍｉｇｅｒａ）生物活性检测表明转基因植株后代具有明显的抗棉铃虫能力。