成年小鼠雄性生殖细胞的冷冻保存

在含10％小牛血清（NBS）的DMEM培养基中，分别各添加5％，10％，15％，20％和25％的二甲基亚砜（DMSO）,丙二醇（PG），乙二醇（EG）和甘油（G），对成年小鼠睾丸生殖细胞冷冻保存；复苏后台盼蓝染色测定细胞复苏率。结果显示，5％－25％DMSO冻存液组的细胞复苏率分别为88.5%,88.0%,65.6%及51.3%;5%-25%PG冻存液组的细胞复苏率分别为87.2%,86.4%,79.0%,73.4%及40.1%.;5%-25%EG冻存液组的细胞复苏率分别为6.6%,80.9%,60.8%,51.3%及30.0%;5%-25%G冻存液组的细胞复苏率分别为86．5％，86．3％，65．3％，36．0％及31．4％。其中各抗冻剂5％和10％组的细胞复苏率最高，与15％组相比均存在显著或极显著差异。4种抗冻剂的最高细胞复苏率之间无显著差异。DMSO，PG，EG和G分别冷冻保存成年小鼠睾丸生殖细胞对的最小损失率分别为4．8％，6．1％，6．7％，6．8％。结果表明，采用慢速冷冻时，DMSO，PG，EG及G均适宜用作成年小鼠睾丸生殖细胞的抗冷冻剂，最佳使用含量均为5％－10％。成年小鼠睾丸生殖细胞分别在含5％－10％的DMSO，PG，EG和G的DMEM（含10％NBS）冻存液中，2步慢速降温，液氮储存，37℃水浴复苏，是一种具有较高复苏率的冷冻保存方法。     

乳铁蛋白对牛精液冷冻效果的影响

[目的]探索乳铁蛋白在牛精液冷冻中的应用效果,为乳铁蛋白在家畜精液保存中的研究与应用提供初步的参考数据。[方法]在常用稀释液(果糖-柠檬酸钠-卵黄-甘油液)的基础上,分别添加不同浓度(250、500、1000mg/L)的乳铁蛋白,观察乳铁蛋白对牛精液冷冻效果的影响。[结果]3种浓度的乳铁蛋白对精子的冻后活力、复苏率、VAP、VSL、VCL、畸形率、顶体完整率及低渗肿胀率均没有显著影响。[结论]在该试验条件下,乳铁蛋白未能显著提高牛精液的冻后质量。     

计算机辅助分析冷冻前后褐牙鲆精子运动特征

观察了褐牙鲆(Paralichthys olivaceus)精子在室温和低温下的活力与寿命,并应用计算机辅助精子分析系统(CASA)对超低温冷冻前后褐牙鲆精子的运动特征进行了分析,结果表明:褐牙鲆精子在室温(25℃)下,可存活4 d,在低温(4℃)下可存活7 d;鲜精的活力为(87. 74±5. 47)%,解冻后,精子的最高活性为(84. 00±3. 67)%;激活0. 5 min时,冻精与鲜精的运动精子占总精子数的百分率(MOT)无显著性差异(P>0. 05),但精子平均曲线运动速度(VCL)、平均直线运动速度(VSL)、平均路径运动速度(VAP)和精子运动路线的曲折程度(LIN)都有显著性差异(P <0. 05);激活4min和10min时,冻精与鲜精的MOT、VCL、VSL、VAP和LIN间都有显著性差异(P <0. 05)。鲜精激活0. 5 min后,直线运动、曲线运动、左右摆动和不运动的精子数目占总精子数的百分比分别为(24. 49±3. 87)%、(48. 53±4. 55)%、(24. 72±2. 86)%和(2. 27±1. 22)%;冻精激活0. 5min后,直线运动、曲线运动、左右摆动和不运动的精子数目占总精子数的百分比分别为(18. 58±1. 33)%、(35. 67±3. 00)%、(35. 24±2. 67)%和(10. 51±1. 33)%。随着激活时间的延长,褐牙鲆鲜精和冻精的运动状态均发生了改变,直线运动和曲线运动的精子数目逐渐减少,而不运动和左右摆动的精子数目逐渐增加。     

扁桃休眠茎尖包埋玻璃化超低温保存的初探

[目的]研究包埋玻璃化法对扁桃休眠茎尖超低温保存的影响,为扁桃资源的超低温保存提供理论依据.[方法]采用不同预培养蔗糖浓度和预培养时间、不同装载液处理时间、不同玻璃化液处理时间及不同化冻方式对莎车14号扁桃休眠茎尖包埋玻璃化超低温保存存活率进行比较.[结果]将低温贮藏的扁桃休眠茎尖剥成1～2 mm,用3;的海藻酸钠包埋,在含0.4 mol/L蔗糖的0.1 mol/L CaCl2溶液中固定30 min后形成包埋丸,用含有0.5 mg/L蔗糖的MS培养基预培养3d,放入装载液(MS+2 mol/L甘油+0.4 mol/L蔗糖)中处理20 min,0℃下用PVS2处理30 min后迅速投入液氮,超低温保存24 h后取出,放入40℃水浴锅中化冻1～2 min,用1.2 mg/L蔗糖的MS洗涤液洗涤20 min,转入含0.3 mg/L 6-BA和0.3 mg/L IAA的MS培养基中培养,存活率达45;.[结论]包埋玻璃化法能够提高莎车14号扁桃休眠茎尖超低温保存的存活率.     

暗黑赤眼蜂低温贮存技术研究

旨在对暗黑赤眼蜂低温贮存技术进行研究,以期为规模化繁殖的暗黑赤眼蜂低温贮存提供依据。利用清水、0.5%盐水、1.0%盐水、1.5%盐水和直接冷藏等方式处理被暗黑赤眼蜂寄生的麦蛾卵,研究其低温贮藏技术。结果表明：与对照相比较,0.5%、1.0%和1.5%盐水处理后能够显著提高暗黑赤眼蜂的羽化率、降低其羽化畸形率;45 天以内,各浓度盐水处理的暗黑赤眼蜂单雌产卵量与对照之间差异不显著,表明在此时间内利用盐水处理可显著保持暗黑赤眼蜂的单雌产卵量;冷藏90 天后,暗黑赤眼蜂雌雄比例开始增大,75 天后,暗黑赤眼蜂的雌雄比例失调较为严重。研究表明：冷藏时间的增加不利于暗黑赤眼蜂各项指标的发育,但0.5%、1.0%和1.5%盐水处理后能在一定程度上减少负面影响,是羽化率、羽化畸形率、雌虫寿命、单雌产卵量和雌雄比例等指标的有利因素。     

3种长江珍稀鱼类精子超低温冷冻保存的初步研究

试验对西伯利亚鲟、美洲鲥鱼和暗纹东方鲀3种长江珍稀鱼类的精液进行超低温冷冻保存技术研究。以解冻后精子的活力为参数,探讨了稀释液、不同种类不同体积分数的保护剂、以及不同的精液稀释比例对实验鱼类精液进行超低温冷冻保存的保护效果。结果显示,3种长江珍稀鱼类以配方2和体积分数为10%甲醇组成抗冻保护剂,西伯利亚鲟精液按1:2稀释倍数,保存10天后检查精子活力,存活率可达(45±5.00)%。暗纹东方鲀精液按1:2稀释倍数,保存20天后检查精子活力,存活率可达(60.5±2.69)%。美洲鲥鱼精液按1:3稀释倍数,保存60天后检查精子活力,存活率可达(80.3±2.58)%。3种珍稀鱼类的精子保存以美洲鲥鱼效果最好。保存方法均采用三步法,在液氮面上方6 cm处平衡10 min,接着在液氮面上平衡5 min,最后投入液氮中冷冻保存。研究结果为保护长江珍稀鱼类的种质资源提供了理论基础。     

Cryopreservation of silver barb Puntius gonionotus (Bleeker) spermatozoa: effect of extender composition,cryoprotective agents and freezing rate on their postthawing fertilization ability

The effects of extender composition, cryoprotectant concentration and freezing and thawing on the fertilization efficiency of cryopreserved spermatozoa of Puntius gonionotus were evaluated. Computer‐aided motility analysis of semen was conducted to check the suitability of spermatozoa for cryopreservation after mixing with different extenders and cryoprotective agents (CPAs). Extender‐4 with an osmolality 260 mOsmol kg⁻¹and pH 7.6 was used for the cryopreservation study. Among the CPAs, dimethyl sulphoxide (DMSO) was least toxic and more than 60% fertilization was achieved when used at 1.4 M at 0 °C for 10 and 30 min, whereas the toxicity of all CPAs to spermatozoa was evident when tested at 30 °C. Semen frozen at −16 °C min⁻¹ with 1.4 M DMSO showed 70% fertilization, which was significantly higher (P<0.05) than other freezing rates. Samples thawed at 35 °C water showed a fertilization rate comparable with that of fresh semen. Computer‐assisted semen analysis of fresh and frozen semen after thawing showed variations in different types of motility in spermatozoa and in their class. There was no significant difference in motility before or after cryopreservation; however, significant differences could be observed in the average path velocity (VAP), straight line velocity (VSL) and curve linear velocity (VCL). Semen of silver barb could be cryopreserved with extender‐4 by addition of 1.4 M DMSO to a final cryopreservation medium (MED 2) cooled at a rate of −16 °C min⁻¹, stored in liquid nitrogen (−196 °C) and utilized after thawing at 35±2 °C.     

怀地黄玻璃化和包埋玻璃化法超低温保存

比较了玻璃化与包埋玻璃化超低温保存怀地黄（Rehmannia glutinosa(Gaertn.) Libosch）‘85-5’带芽茎段的效果。结果表明：4 ℃低温锻炼5 d,在添加二甲基亚砜（DMSO）和乙酰胺的预培养基中预培养3 d,60 % PVS₂室温装载25 min,PVS₂ 0 ℃脱水30 min时,玻璃化和包埋玻璃化两种保存方法均达到本试验条件下最佳结果;两种方法相比,玻璃化法的存活率和再生率均较包埋玻璃化法高,前者的存活率（88.92 %）和再生率（64.29 %）分别是后者的1.38倍和2.41倍。可见,采用超低温保存怀地黄种质资源是可行的,且玻璃化法优于包埋玻璃化法。     

牛胚胎冷冻保存的研究进展

目前,牛的胚胎冷冻保存巳成为一种较成熟的常规技术,广泛应用于牛的繁殖科研与生产。本文回顾了牛胚冷冻保存技术的发展概况,对牛胚胎的常规冷冻技术、直接冷冻法及玻璃化冷冻技术的进展作了简要论述。     

黄皮花粉的超低温(LN2,-196℃)保存研究初报

以甜叶黄皮和鸡心黄皮的成熟花粉为试材,采用"培养基发芽法"结合显微镜镜检,对不同干燥处理的黄皮花粉进行了超低温(LN2,-196℃)保存研究。结果表明:新鲜花粉经28℃干燥处理5～6h,含水量为14.6%～19.4%,超低温保存后的生活力最高;花粉在液氮中贮藏14d和180d,其发芽率无明显差异;超低温保存后的花粉发芽时间比对照迟。初步认为黄皮花粉可以在液氮(-196℃)中长期贮存而不显著失去其生活力。