The Comet assay for detection of DNA damage in canine sperm

Sperm DNA integrity is a fundamental prerequisite in fertilization and embryo development. Among DNA integrity tests, the Comet assay is an accurate and sensitive test for the detection of sperm oxidative damage. The aim of this work was to evaluate sperm oxidative damage using the Comet assay and to study the correlation between Comet and routine assays for the evaluation of semen quality. Dogs were divided in two groups: group A (n = 6), comprising dogs with abnormal spermiogram, that is astheno‐, terato‐ or oligoasthenoteratozoospermic (OAT); and group B (n = 8), comprising normospermic dogs. The distribution of sperm oxidative damage was significantly different between the two groups (p = .001): group A—median: 31.55%, interquartile range (IQR): 30.18–38.01; group B—median: 0.90%, IQR: 0.65–1.96. The correlation between oxidative damage and abnormal morphology was high (r = .846; p < .001). There was a negative correlation between progressive motility and oxidative damage (r = ?.792; p = .001). Basal and oxidative DNA damage of spermatozoa are increased in dogs with non‐normospermic semen. In conclusion, and considering the elevated correlation with classical tests of sperm quality, the Comet assay has ample potential for clinical and research purposes in dogs.     

猪圆环病毒2型核酸疫苗的小鼠免疫保护试验

为了研究猪圆环病毒2型(PCV2)核酸疫苗在小鼠攻毒试验中的免疫保护效果,以PCV-2 GXWZ-1株为模板,扩增出ORF2基因及其截短基因8个片段(A(ORF2)、B(51-100aa)、C(101-150aa)、D(181-235aa)、E(151-200aa)、F(51-150aa)、G(101-235aa)、H(51-235aa)),将其插入到pcDNA3.0载体中,构建出真核表达质粒,并将其转染至PK-15细胞,用间接免疫荧光试验检测其瞬时表达情况。将试验小鼠随机分成9组,其中免疫组7组,阴阳性对照各1组,将纯化的真核表达质粒对小鼠进行组合免疫;二免后,用经处理过的PCV-2 GXWZ-2株阳性病料悬液腹腔注射免疫组和非免疫对照组小鼠,阴性对照组用生理盐水腹腔注射;其后进行体重记录、病理切片制作及PCR检测。结果表明:共有6个真核表达质粒成功在PK-15细胞中表达。在攻毒后的3周内,阳性对照组小鼠PCR诊断均为阳性;免疫组中,部分组小鼠在攻毒后第1周或在第2周为阳性,到第3周时各免疫组小鼠全部为阴性;阴性对照组始终为阴性。免疫组在病理保护学方面明显优于非免疫对照组,非免疫对照组的体重增长速率略低于免疫组和阴性对照组。由此可见猪圆环病毒2型核酸疫苗在小鼠攻毒试验中有明显的保护作用。     

溴氰菊酯酶联免疫吸附分析方法研究

建立了定量测定溴氰菊酯间接竞争酶联免疫吸附分析方法(ic-ELISA)。合成了半抗原1-羧基-(3'-苯氧基苯基)甲基-3-(2',2'-二溴乙烯基)-2,2-二甲基环丙基羧酸酯(Med)和N-2-(羧基丙基)氨基甲酰基-(3'-苯氧基苯基)甲基-3-(2',2'-二溴乙烯基)-2,2-二甲基环丙基羧酸酯(Di)。分别采用碳二亚胺法和混合酸酐法将半抗原与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联制备了免疫原Di-BSA和包被原Di-OVA、Med-OVA。将制得的溴氰菊酯免疫原免疫动物获得多克隆抗体,经间接非竞争ELISA法测得其效价为2.5×105。通过对甲醇含量、离子强度、pH值等影响因素进行异源分析条件的优化,确立了溴氰菊酯间接竞争酶联免疫分析方法的最佳检测条件(30%甲醇、氯化钠0.4 mol/L、pH 7.5),并建立了标准竞争曲线。该方法的IC50值为0.55±0.05 mg/L,检测限(IC10)为3.76±0.35 μg/L,对大多数拟除虫菊酯无交叉反应。分别在自来水、河水和土壤样品中添加0.05 ~5.0 mg/L(或mg/kg)的溴氰菊酯,回收率分别为89.7% ~106.8%、82.4% ~101.7%、75.6% ~97.8%。     

近红外光谱技术与常规方法检测紫花苜蓿品质的对比研究

从黑龙江省国家牧草产业技术体系绥化综合试验站的试验田中采集的10 种（每种取7 个样品）紫花苜蓿样品分别采用近红外光谱技术和常规化学测定法,对其含有的粗蛋白（CP）、中性洗涤纤维（NDF）、酸性洗涤纤维（ADF）、脂肪（FAT）、灰分（ASH）、干物质（DM）成分进行了测定,并将测试结果用SPSS 软件进行配对T值分析比较,结果表明：两种方法的X ± S 相近,|t|<0.05,P>0.05,差异不显著。分别计算两种方法的标准偏差（S）和相对标准偏差（RSD）,发现近红外分析方法的值均小于常规化学分析方法。试验结果表明：基于与常规化学方法的比较,近红外方法可以作为一种新的检测方法被使用,值得广泛应用于各种牧草饲养品质的测定与推广。     

A combined application of molecular docking technology and indirect ELISA for the serodiagnosis of bovine tuberculosis

BackgroundThere is an urgent need to find reliable and rapid bovine tuberculosis (bTB) diagnostics in response to the rising prevalence of bTB worldwide. Toll-like receptor 2 (TLR2) recognizes components of bTB and initiates antigen-presenting cells to mediate humoral immunity. Evaluating the affinity of antigens with TLR2 can form the basis of a new method for the diagnosis of bTB based on humoral immunity.ObjectivesTo develop a reliable and rapid strategy to improve diagnostic tools for bTB.MethodsIn this study, we expressed and purified the sixteen bTB-specific recombinant proteins in Escherichia coli. The two antigenic proteins, MPT70 and MPT83, which were most valuable for serological diagnosis of bTB were screened. Molecular docking technology was used to analyze the affinity of MPT70, MPT83, dominant epitope peptide of MPT70 (M1), and dominant epitope peptide MPT83 (M2) with TLR2, combined with the detection results of enzyme-linked immunosorbent assay to evaluate the molecular docking effect.ResultsThe results showed that interaction surface Cα-atom root mean square deviation of proteins (M1, M2, MPT70, MPT83)-TLR2 protein are less than 2.5 A, showing a high affinity. It is verified by clinical serum samples that MPT70, MPT83, MPT70-MPT83 showed good diagnostic potential for the detection of anti-bTB IgG and M1, M2 can replace the whole protein as the detection antigen.ConclusionsMolecular docking to evaluate the affinity of bTB protein and TLR2 combined with ELISA provides new insights for the diagnosis of bTB.     

水稻纹枯病菌毒素的初步研究

水稻纹枯病菌（Rhizoctonia solani)在改良的Richard培养基中培养能够产生毒素，培养滤液经离心，灭菌，活性炭粒吸附层析，甲醇洗脱获得粗提纯毒素结晶，生活活性测定表明：该粗毒素对水稻胚根，胚芽有明显的抑制作用，对水稻4叶期幼苗有致萎作用;用电导法测定，10^4ppm的粗毒素引进细胞膜的损伤率达60％左右，该毒素活性比较稳定，经1[^5Pa高压（121度）处理15分钟仍不失其活性，用毒素接种寄主要现出与病原菌侵染类似的症状。     

盐胁迫对盐生植物盐穗木生理特性的变化分析

[目的]探究盐穗木在盐胁迫下的生理特性变化.[方法]以新疆极端耐盐植物盐穗木为研究材料,测量盐穗木植株在不同NaCl浓度胁迫30 d后相关的生理指标(水势、O2-、SOD、CAT、MDA、电导率、叶绿素含量等).[结果]盐穗木植株经300 mM盐浓度处理,超氧阴离子(O2-)含量、SOD活性及电导率呈现最低值;丙二醛(MDA)含量在300、500 mM盐胁迫下值较低,叶绿素含量较高,而且盐穗木植株在该浓度范围内生长良好,生物量高.而随着盐浓度增加脯氨酸(Pro)含量增高,水势呈现逐渐降低趋势.[结论]新疆盐生植物盐穗木的生长是需盐的,并具有较高的耐盐能力.     

抗丝状支原体丝状亚种单克隆抗体的制备及初步应用

旨在制备抗丝状支原体丝状亚种(Mmm)的特异性单克隆抗体(MAb),为牛传染性胸膜肺炎(CBPP)病原诊断的免疫学方法提供特异性抗体。本研究利用生物信息学技术分析了Mmm国内分离株Ben-1不同传代株的全基因组序列,选取M0071蛋白作为研究对象。将原核表达的可溶性重组蛋白M0071(rM0071)作为免疫原免疫BALB/c小鼠,通过有限稀释法和间接ELISA方法筛选得到能稳定分泌抗rM0071蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株。进一步制备单抗腹水并纯化,利用Western blot方法对该单抗进行特异性鉴定,同时测定其抗体效价和抗体亚类。随后利用间接免疫荧光试验(IFA)评价该单抗对细胞感染Mmm的检测能力。结果表明成功获得1株单克隆细胞株3C4A1,将其分泌抗体命名为MAb 3C4A1。特异性结果表明,MAb 3C4A1能与Mmm的分离株和标准株发生特异性反应,而不与山羊支原体山羊肺炎亚种、丝状支原体山羊亚种、牛鼻支原体、无乳支原体、牛支原体、leachii支原体和牛A型巴氏杆菌等发生反应。抗体亚类鉴定MAb 3C4A1属于IgG1亚类、轻链为κ链。经间接ELISA测定其抗体效价为1∶256 000。IFA试验结果表明,MAb 3C4A1仅与感染EBL细胞的Mmm发生绿色荧光反应,而与牛鼻支原体、无乳支原体、牛支原体感染的细胞不发生荧光反应,特异性良好。本研究制备的MAb 3C4A1具有良好的特异性和免疫反应性,可作为CBPP病原免疫学诊断的工具,为进一步研制CBPP病原鉴别诊断试剂盒提供了基础材料。     

检测水貂出血性肺炎绿脓杆菌的比色LAMP法的建立与应用

为了快速有效检测水貂出血性肺炎病原绿脓杆菌,本研究结合金属指示剂HNB特性建立了快速检测绿脓杆菌比色LAMP法。根据绿脓杆菌外毒素A基因设计引物,建立了检测LAMP法;并且对该方法进行了特异性、灵敏性分析;同时进行了初步应用。结果显示,该方法特异性强,灵敏性好,可检测167CFU/mL的菌体,对病貂肺脏检出率高。结果表明,该比色LAMP法可以有效地检测水貂出血性肺炎绿脓杆菌。