Detection of the floR Gene in a Diversity of Florfenicol Resistant Gram‐Negative Bacilli from Freshwater Salmon Farms in Chile

Florfenicol is an important antibiotic in veterinary medicine that is used extensively in aquaculture, including salmon farming in Chile. We analysed a set of 119 florfenicol‐resistant Gram‐negative bacilli from seven freshwater Chilean salmon farms for the molecular determinants involved in the florfenicol resistance. Ninety‐seven of these strains were glucose non‐fermenting bacilli, mainly belonging to the Pseudomonas genus, whereas 22 strains were glucose‐fermenters. The floR gene was detected in 26 strains (21.8%) that had been isolated from three of the seven salmon farms. Most of the floR‐carrying strains were glucose fermenters (21 strains), and most of the floR‐carrying strains were also resistant to streptomycin, chloramphenicol and oxytetracycline. The minimum inhibitory concentrations against florfenicol were assessed in the presence and absence of the efflux pump inhibitor Phe‐Arg‐β‐naphthylamide (MC‐207,110). There was evidence that in the majority of non‐fermenting bacteria (82 strains), florfenicol resistance was at least partially mediated by non‐specific efflux pump systems. Given the diversity of antibiotic resistance patterns observed in this study in the floR‐positive isolates, a single antibiotic has the potential to co‐select for a diversity of resistances. For this reason, human health as well as animal health can potentially be impacted by the use of antibiotics in aquaculture. To assess this potential risk, future studies should focus on the ability of different antibiotics used in aquatic environments to co‐select for multiple resistances, the molecular basis of this diversity of resistance, and whether the genes conferring resistance can be transferred to other bacteria, including those of human health concern.     

菊苣质体同源片段的克隆及非抗生素标记的质体定点整合表达载体构建

依据烟草、玉米、拟南芥和大豆质体基因组rps7基因和16S rDNA基因的保守序列设计引物,以菊苣质体基因组DNA为模板,PCR扩增到1段4.8 kb的片段。序列分析表明,该片段全长4 751 bp(GenBank登录号为GQ199478),包括449 bp的 rps7基因5′端序列、793 bp的rps12基因、72 bp的trnV基因、1 315 bp的16S rDNA基因5′端以及大部分的基因间隔区,该序列与烟草对应区段的相似性为92%,与莴苣对应区段的相似性为97%。以此片段作为定点整合外源基因的同源重组片段,构建了非抗生素标记的菊苣质体定点整合表达载体pJBADH-GFP,酶切分析及PCR检测证明构建的载体符合预期设计。该载体的构建为建立高效、稳定的菊苣质体转化和无抗生素筛选体系奠定基础,为进一步通过质体基因工程手段将更多感兴趣的基因导入菊苣进行遗传改良,或以菊苣质体作生物反应器生产动物口服疫苗等搭建技术平台。     

苦皮藤内生真菌Hd3菌株抑菌活性成分分离及结构鉴定

根据活性追踪原理,采用硅胶柱层析以及高效液相色谱等技术对苦皮藤内生真菌Hd3菌株发酵液中的抑菌活性成分进行了分离纯化,得到5个具有抑菌活性的化合物,经质谱和核磁共振波谱技术分别鉴定为3'-氯代杀锥曲菌素、曲地酸、曲地酸甲酯、4',6'-二氯代曲地酸甲酯和 4'-氯代曲地酸甲酯。它们在500 mg/L的浓度下对玉米弯孢菌Curvularia lunata的孢子萌发抑制率分别为100%、67.6%、17.3%、29.1%和 30.4%,其中化合物3'-氯代杀锥曲菌素和曲地酸还对枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis具有强烈的抑制作用。     

泰乐菌素的超声波降解效果及机制

为研究超声波对水体中大环内酯类抗生素的去除效果,以典型的专用兽药抗生素泰乐菌素(TYL)为研究对象,考察初始浓度、溶液pH值、超声波功率、超声波处理时间对超声波降解效果的影响。在此基础上进一步考察H_2O_2和蒙脱石分别与超声波联合降解TYL的效果,并对TYL的超声波降解机制进行了探讨。结果表明:超声波对TYL有一定的降解效果,在初始浓度10 mg·L~(-1)、pH值11、超声波功率280 W、超声波处理时间90 min的条件下,TYL的降解率为72%。自由基清除剂正丁醇的添加显著抑制了TYL的降解,而且不同超声波功率、超声波处理时间和不同初始浓度及pH值条件下羟基自由基的浓度变化与TYL降解率呈正相关,表明TYL超声波的降解机制可能主要是羟基自由基的氧化。溶液中添加H_2O_2或蒙脱石均对TYL超声波降解产生协同作用,TYL的去除率可分别提高至80.9%和93.9%。H_2O_2可直接氧化TYL、促进·OH生成;蒙脱石的吸附性能及其中少量的铁均可影响溶液中·OH含量。H_2O_2或蒙脱石联合超声波降解TYL的降解效果和降解机制与添加物质的性质密切相关,不能简单归因于羟基自由基的氧化。研究表明,合适的超声波处理方法对大环内酯类抗生素有很好的去除效果,可以考虑将超声波法用于含抗生素废水处理的工艺中。     

牦牛乳中沃氏葡萄球菌的分离鉴定与耐药性分析

在利用Baird-Parker(BP)琼脂平板培养基分离牦牛乳中金黄色葡萄球菌的过程中分离得到经基质解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight-mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)鉴定为沃氏葡萄球菌的微生物,对其进行生化鉴定和抗生素药敏及抑菌实验,同时对牦牛乳样品中的抗生素残留进行测定。结果表明:该菌具有沃氏葡萄球菌的生化特征,对大部分抗生素极敏感,仅复方新诺明对其没有抑制作用;牦牛乳样品均为抗生素残留阴性。虽然在牦牛乳中检测出了条件致病菌沃氏葡萄球菌,但因乳样品来源的环境纯净使其对大部分抗生素敏感。     

磁性固相萃取在牛乳抗生素残留检测中的应用

前处理过程一直是样品分析的关键步骤,直接影响检测结果。作为一种新兴的样品前处理技术,磁性固相萃取(magnetic solid phase extraction,MSPE)以其操作简便、成本低廉、用时较短、环境污染小等特点成为分析检测领域的研究热点。牛乳中抗生素的残留问题由来已久,抗生素滥用可以引起机体过敏、耐药和二度感染等毒、副作用,近年来将MSPE应用于牛乳中抗生素残留检测的研究大量涌现。本文综述了牛乳中抗生素的来源与危害以及近5年来MSPE在牛乳抗生素残留检测分析中的应用情况。     

抗生素对仔猪肠道微生物的影响

本研究旨在从肠道微生物的角度探究抗生素的作用机制,为今后绿色抗生素替代品添加剂的研究提供理论基础和参考。试验选用6头30日龄的杜×长×大三元杂交去势公猪,随机分为2组,分别为基础饲粮组(不添加抗生素)和抗生素组(基础饲粮中添加0.12%复合抗生素),每组3个重复,每个重复1头猪。试验期为35 d。结果表明:抗生素组肠道微生物物种多样性较基础饲粮组更为丰富;抗生素组厚壁菌门(Firmicute)/拟杆菌门(Bacteroidetes)(F/B)比例较高,因此添加抗生素有利于仔猪体内脂肪的贮存;从肠道微生物的角度考虑,抗生素可能是通过促进L7A_E11、Flexispira、粪球菌属(Coprococcus)等菌属,抑制光岗菌属(Mitsuokella)、巨球菌属(Megasphaera)、柔嫩菌属(Faecalibacterium)等菌属从而发挥预防疾病、提高成活率和促进生长的作用;使用PICRUSt进行功能预测,抗生素在脂类生物合成蛋白质、甲烷代谢、转运蛋白、转录因子、转录机制、RNA转运和脂肪酸生物合成等通路中发挥了重要的作用。由此可见,抗生素可以通过调节仔猪肠道微生物,加速仔猪体内脂肪的贮存,加速断奶仔猪对粗纤维的降解作用,促进短链脂肪酸的生成,从而发挥预防疾病、提高成活率和促进生长等作用。     

中华鲟源维氏气单胞菌的分离鉴定及其药敏特性

以自然患细菌性败血症的子二代中华鲟(Acipenser sinensis)幼鱼为研究对象,无菌操作从濒死病鲟体内分离到1株致病菌(zhx20120301)。结合传统细菌学鉴定及分子生物学鉴定方法,对其形态、生理生化特性、16S r DNA序列及系统发育分析等方面进行研究,研究结果显示这株细菌为维氏气单胞菌(Aeromomas veronii)。回归感染试验证实分离菌株具有较强的致病性,能导致健康杂交鲟(西伯利亚鲟Acipenser baerii♂×施氏鲟Acipenser schrenckii♀)死亡,并呈现与自然条件下相似的临床症状,且再分离菌株各种生理生化特性与原分离菌株相同。药敏试验结果表明该菌株对头孢氨苄、头孢唑啉、庆大霉素、四环素、强力霉素、氟苯尼考、多粘霉素B、恩诺沙星、氟哌酸和左氧氟沙星敏感。     

患体表出血症的泥鳅病原菌的鉴定与生物特性分析

从体表具有明显出血症状的患病泥鳅内脏组织中分离到2株优势菌,对这2种菌进行了鉴定和特性分析。利用形态学观察、生理生化特性分析和16SrDNA序列测定法对细菌类别进行初步判定,并采用人工感染试验和药敏试验对细菌的致病性与耐药性进行分析。分析表明这2种菌分别为霍乱弧菌(Vibrio cholerae)和希瓦氏菌(Shewanella putrefaciens),人工感染试验表明它们对泥鳅具有较强的致病性;用含有抗生素的20种药敏纸片进行药敏试验,发现这2种分离菌同时对氯霉素、环丙沙星、复方新诺明、头孢西丁、四环素、诺氟沙星和头孢他啶等7种抗生素高敏,对其他抗生素具有一定抗性。首次报道了泥鳅一种新的病原即希瓦氏菌,试验表明希瓦氏菌作为一种潜在的病原菌,可能与泥鳅霍乱弧菌协同作用,对泥鳅的养殖造成危害,同时也为泥鳅常见体表出血症病原的确定和防治提供参考依据。     

Antibacterial and Antifungal Compounds from Marine Fungi

This paper reviews 116 new compounds with antifungal or antibacterial activities as well as 169 other known antimicrobial compounds, with a specific focus on January 2010 through March 2015. Furthermore, the phylogeny of the fungi producing these antibacterial or antifungal compounds was analyzed. The new methods used to isolate marine fungi that possess antibacterial or antifungal activities as well as the relationship between structure and activity are shown in this review.