罗非鱼活性肽分离及抗氧化能力研究

利用正交试验L9(34),以清除超氧自由基能力为指标,分别对木瓜蛋白酶、中性蛋白酶水解罗非鱼肉的水解条件进行优化,并对最佳清除率下的两种酶解物进行Sephadex G-50凝胶柱分离,检测了各组分对超氧自由基清除率及活性肽分子量分布情况.结果表明:中性蛋白酶在45 ℃、酶的质量分数2.0%、水解105 min及肉水比1∶3的水解条件下对超氧自由基有较好清除作用;木瓜蛋白酶在60 ℃、酶的质量分数2.0%、时间150 min及肉水比1∶2的水解条件下对超氧自由基有较好清除效果.木瓜蛋白酶酶解物在分子量为660 Da的多肽洗脱峰具有最大超氧自由基清除率,中性蛋白酶酶产物在分子量为1320 Da多肽洗脱峰具有最大超氧自由基清除率.     

枯草芽孢杆菌A30菌株产生的拮抗肽的分离纯化与理化性质研究

平皿测试表明Bacillus subtilis A30菌株对多种植物病原真菌,例如水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani)、稻瘟病菌（Magnaporthe grisea）等有强烈抑制作用。在小区试验中A30菌液对水稻纹枯病也表现出了较好的防治效果。A30菌株培养液经硫酸铵沉淀、FPLC疏水色谱、HPLC反相色谱后,纯化得到一种拮抗活性物质,命名为P1。P1对热稳定,对蛋白酶不敏感;茚三酮反应呈阴性,用酸水解后茚三酮反应和双缩脲反应呈阳性。经LC-ESI-MS分析初步判断P1的分子量为1476.7 Da。     

抗菌脂肽对肉鸡抗氧化能力及血清生化指标的影响

为研究不同水平抗菌脂肽对肉鸡抗氧化能力及血清生化指标的影响,将1日龄健康AA肉鸡600只,随机分为5组:对照组(不含抗菌脂肽及抗生素)、抗生素对照组及在基础日粮中分别添加4 000、8 000和12 000 U/kg抗菌脂肽组,试验期为42 d。结果发现:4 000 U/kg抗菌脂肽能显著提高血清T-AOC及肝脏SOD水平,8 000 U/kg抗菌脂肽能显著提高血清SOD水平,同时能显著降低肝脏MDA水平。4 000 U/kg抗菌脂肽能显著提高血清TP及GLOB水平,而12 000 U/kg抗菌脂肽能提高血清GOT及GPT水平,但差异不显著。抗菌脂肽对血清UN及TC含量无明显影响。结果表明适宜的抗菌脂肽添加量(4 000 U/kg)能提高肉鸡抗氧化机能,且能促进蛋白质的代谢。     

紫花地丁抑菌活性成分的研究初报

采用活性跟踪法从紫花地丁的氯仿萃取物中分离得到1个抗菌活性成分(化合物1),并以停乳链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、无乳链球菌、乳房链球菌和沙门氏菌为供试菌,对紫花地丁的抑菌活性及其活性成分进行了初步研究。结果表明,化合物1初步鉴定为黄酮类化合物;紫花地丁的主要活性成分位于甲醇-水(V(甲醇)∶V(蒸馏水)=1∶1)萃取物和氯仿萃取物中;化合物1对以上6种供试菌的最小抑菌浓度依次为0.039,0.078,0.156,0.313,0.625和1.25mg/mL;对金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和乳房链球菌的最小杀菌浓度≤2.5mg/mL,对停乳链球菌、沙门氏菌和大肠杆菌的最小杀菌浓度>2.5mg/mL。     

中性蛋白酶制备酪蛋白抗菌肽的研究

为了替代抗生素的广泛使用,防止病原菌耐药性大大提高,开发酪蛋白抗菌肽新型抗菌剂。本研究利用中性蛋白酶水解酪蛋白,以中性蛋白酶浓度、酶解时间、酶解温度、pH值为影响因子,在单因素试验结果的基础上,应用Centure-composite Design中心组合方法进行四因素三水平的实验设计,以酪蛋白水解液抑菌圈直径为响应值,运用响应面法对水解条件进行进一步的优化。结果表明：酶解温度、酶浓度、酶解时间、pH对酪蛋白水解液抑菌圈直径影响显著;酪蛋白抗菌肽制备的最佳工艺为：水解温度为50℃,酶浓度为3.73%,pH 7.9,酶解时间为130 min。回归方程预测酪蛋白水解液抑菌圈直径理论值可达到21.93 mm,3次验证实验的平均抑菌圈直径为21.91 mm,与理论最大值接近,可见该模型能较好地预测酪蛋白抗菌肽制备的最佳条件。     

五味子对禽源大肠杆菌临床分离株抗生素敏感性的影响

研究五味子水煎液的体外抗菌活性及与临床常用6种抗生素联合对临床分离6株耐药大肠杆菌(E.coil)的作用效果.采用微量肉汤稀释法测定南五味子水煎液(SRD)、北五味子水煎液(SCD)以及6种抗生素对临床分离禽源E coli的最低抑菌浓度(MICs);微量棋盘法测定SCD与6种抗生素联合对E.coil的分级抑菌浓度指数(FICI);平板计数法测定SCD以及SCD与CEF联合对E coli ATCC25922生长的影响.结果 显示:SCD对6株耐药菌的MIC均为64 mg·mL-1,SRD对其中5株的MIC为128mg.mL-1,对另一株的MIC＞ 128 mg·mL-1;SCD与头孢噻呋(CEF)联用时对5株菌的FIC≤0.5,呈协同作用;与恩诺沙星(ENR)联用时对6株菌的FIC＞2,呈拮抗作用;与卡那霉素(KAN)、链霉素(STR)、氨苄西林(AMP)和多西环素(DOX)联合时主要呈相加作用;SCD能抑制E.coli生长速度,使其生长量明显降低,且相较于单独处理.1/4MIC SCD与I/4MIC CEF联合处理的抑菌效果更明显.综上,SCD的抗菌活性强于SRD,且能明显增强禽源临床分离耐药Ecoli对CEF的敏感性而呈现协同抑菌作用.     

Periplaneta americana peptide decreases apoptosis of pig-ovary granulosa cells induced by H2O2 through FoxO1

Oxidative stress can induce apoptosis of granulosa cells and lead to follicular atresia, thereby reducing the number of pigs giving birth. The aim of this study was to investigate the protective effect of Periplaneta americana peptide (PAP) on the apoptosis of the granulosa cells of pig ovaries (PGCs) induced by hydrogen peroxide (H₂O₂) via FoxO1. PGCs were treated with H₂O₂ to establish a cell apoptosis model. Cell viability was measured using the cell counting kit-8 (CCK-8) assay, and cell apoptosis was detected using flow cytometry. The malondialdehyde (MDA) level and nitric oxide (NO) content were detected to reflect the oxidative stress. Western blotting, qRT-PCR and overexpression were undertaken to determine the expression of FoxO1 and caspase-3, and immunofluorescence was used to detect FoxO1 in the nucleus and cytoplasm. PGCs were treated with 100 μM H₂O₂ for 6 hr, which resulted in oxidative damage and apoptosis and an apoptosis rate for PGCs of 32.95%. Next, PGCs were treated with 400 μg/ml PAP for 24 hr to repair the apoptosis induced by H₂O₂. PAP improved cell viability in H₂O₂-stimulated PGCs, the increased MDA level and NO content caused by H₂O₂ stimulation were reversed and the apoptotic rate of PGCs was reduced. The qRT-PCR and Western blotting results indicated that PAP decreased the H₂O₂-induced apoptosis and the expression of FoxO1 and caspase-3 in PGCs. The effect of PAP was the same following FoxO1 overexpression. FoxO1 was expressed in the nucleus when stimulated by H₂O₂ or overexpression; however, it migrated to the cytoplasm following PAP treatment. PAP decreased the apoptosis of PGCs induced by H₂O₂ by regulating FoxO1 expression and nuclear translocation.     

虾肽肥料对酸性土壤的改良效果

[目的]针对热带地区土壤酸化和养分含量低的问题,探索一种适宜的土壤改良方法。[方法]研究了施用虾肽肥料对热带地区土壤p H与养分含量的影响。[结果]与单施虾肽土壤调理剂相比,虾肽土壤调理剂与虾肽根宝配合施用可提高土壤p H与土壤有机质、全氮、碱解氮、有效磷和速效钾等养分含量。[结论]虾肽土壤调理剂可以在热带地区用于土壤改良。     

羽毛肽粉对瓦氏黄颡鱼稚鱼生长、体成分和消化酶活性的影响

为研究羽毛肽粉替代鱼粉对瓦氏黄颡鱼Pelteobagrus vachelli幼鱼生长、体成分和消化酶活力的影响,以基础饲料为对照,分别在基础饲料中添加5%、10%、15%、20%羽毛肽粉,饲喂初始体重(25±2)g试验鱼60d。结果表明,试验黄颡鱼增重率、特定生长率随羽毛肽粉添加水平升高呈先升后降趋势,添加水平为10%时,增重率达到最大值117.48%。当添加水平为15%、20%时,增重率、特定生长率显著下降(P0.05);摄食总量随着羽毛肽粉的添加水平也呈先升后降趋势,在10%时,摄食总量达到最大值。饲料系数随着羽毛肽粉添加水平增加呈升高趋势,5%添加组与对照组无显著性差异(P0.05),其余各组均显著高于对照组(P0.05);羽毛肽粉在20%添加水平内对瓦氏黄颡鱼幼鱼体蛋白质、灰分、脂肪、水分无显著性影响(P0.05);试验黄颡鱼肝胰腺胰蛋白酶活力随羽毛肽粉添加水平的升高呈升高趋势,5%添加水平组与对照组无显著差异(P0.05),但显著低于其余各组(P0.05);试验黄颡鱼肠胰蛋白酶活力与肝胰腺蛋白酶活力呈相似的变化趋势,当添加水平达15%时,肠胰蛋白酶活力与胰胰蛋白酶活力比值显著下降(P0.05);不同添加水平羽毛肽粉对试验黄颡鱼淀粉酶活性无显著性影响(P0.05);5%羽毛肽粉添加组的肠、肝胰腺脂肪酶活力最低,显著低于其他羽毛肽粉添加组与对照组(P0.05);羽毛肽粉添加水平至10%时,肠脂肪酶活力与对照组无显著性差异(P0.05),至15%时,肝胰脏脂肪酶活力与对照组无显著差异(P0.05);羽毛肽粉添加组瓦氏黄颡鱼肠胃蛋白酶活性显著高于对照组(P0.05),15%、20%添加组5%、10%添加组对照组,各组间肝胰腺胃蛋白酶活性无显著性差异。在瓦氏黄颡鱼饲料中可以适量添加羽毛肽粉,添加水平在10%以内时,可以显著提高瓦氏黄颡鱼摄食量,促进其生长。     

猪轮状病毒VP7蛋白模拟表位的噬菌体展示技术筛选与鉴定

猪轮状病毒(Po RV)是引起仔猪腹泻的重要病原之一,其主要结构蛋白衣壳蛋白VP7可诱导机体产生中和抗体。文章以制备的抗Po RV VP7单克隆抗体(MAb)3B6作为靶分子,利用噬菌体十二肽库展示技术对其模拟表位进行筛选。四轮筛选后随机挑取阳性克隆扩增后进行ELISA鉴定,同时提取其基因组DNA测序,10个阳性噬菌体亲和肽拥有共同的外源肽序列"VPLGTDNGDIWV",而且与靶分子有很高亲和力。阳性噬菌体亲和肽与VP7蛋白进行序列比对,结果表明,十二肽中有4个氨基酸(第167位P、第178位T、第179位D和第184位W)与VP7蛋白167~184位氨基酸有一定的相似性。竞争抑制ELISA证明亲和多肽降低Po RV与抗VP7单克隆抗体之间的作用,病毒竞争抑制试验表明亲和多肽可以竞争性地抑制Po RV感染细胞。因此由这4个氨基酸构成的基序很有可能作为猪轮状病毒VP7蛋白的一个模拟表位。