应用PCR对来源于AA肉种鸡的鸡胚、雏鸡进行CAV和ALV检测

应用PCR方法,对来源于山东省3个不同AA肉种鸡场的鸡胚、1日龄雏鸡中的CAV和ALV进行检测,从而了解CAV和ALV在此阶段对肉鸡的感染情况。试验直接采集样品的肝脏、胸腺、骨髓、脾脏、肾脏、法氏囊等组织提取DNA,进行PCR扩增及PCR产物的克隆和序列测定。结果显示,被检的3个肉种鸡场均有这两种病毒的阳性检出,其中CAV的阳性率是20.18%;ALV的阳性率13.49%,二者共感染的阳性率是6.24%。而且感染鸡各组织含量也有所差异,其中CAV以脾脏的最多,ALV以肾脏最多。同时对肝脏进行细菌分离培养时发现存在大肠杆菌、沙门氏菌和霉形体的混合感染。由此可见,在鸡胚和雏鸡体内存在CAV、ALV的感染以及与细菌性疾病的共感染。     

鸡传染性贫血病毒衣壳蛋白的原核表达及鉴定

[目的]用大肠杆菌表达出CIAV的衣壳蛋白(VP1)作为免疫抗原,以建立鸡传染性贫血病毒(CIAV)的血清学诊断方法.[方法]根据已发表的CIAV的衣壳蛋白(VP1)序列,结合Protean软件预测出抗原富集区域,设计并合成1对引物,利用PCR扩增该区域基因,将扩增成功的VP1基因片段经T4连接酶连接至PGEX-6P-1表达载体.连接成功的重组质粒转化不同的大肠杆菌表达菌株,通过IPTG诱导进行原核表达,筛选出表达量最高的菌株及最佳诱导时间和1PTG诱导浓度.以感染CIAV的鸡阳性血清为一抗,对重组蛋白GST-VP1进行Western-blot分析.[结果]成功获得了重组质粒PGEX-VP1,诱导表达后经SDS-PAGE和Western-blot分析,分子量约71kD的融合蛋白GST-VP1在大肠杆菌Rosseta中以包涵体形式大量表达,并能与鸡传染性贫血病毒阳性血清发生反应.[结论]该研究可为抗CIAV单克隆抗体的制备及血清学诊断方法的建立等研究奠定基础.     

马A3Z3V1抑制马传染性贫血病毒早晚期反转录的鉴定

马A3Z3V1是宿主细胞内的一种APOBEC3免疫因子,它可以有效抑制马传染性贫血病毒(EIAV)在马宿主细胞内的复制.为鉴定马A3Z3V1分子对EIAV早晚期反转录的抑制作用,本实验根据EIAV的R/U5和gag基因序列分别设计了检测EIAV早晚期反转录产物的引物并建立了SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法,利用该方法评价免疫因子A3Z3V1对EIAV逆转录过程的影响.结果显示,在早期反转录过程中,A3Z3V1可以使EIAV的反转录产物最高减少7倍;在晚期反转录过程中,A3Z3V1可以使EIAV的反转录产物最高减少3倍.本实验结果将有助于进一步研究APOBEC3分子的抗病毒作用机制.     

鸡传染性贫血病毒与马立克氏病病毒共感染SPF鸡群免疫抑制协同作用的研究

将鸡传染性贫血病毒（Chicken infectious anemia virus,CIAV or CAV）和马立克氏病病毒（Marek s dis-ease virus,MDV）人工单一和共同感染1日龄的SPF鸡,感染后分别于14、21、28、35日龄检测鸡体红细胞压积的变化,并检测鸡群疫苗免疫3周后的抗体反应,以探讨CAV与MDV共感染对鸡体的免疫抑制是否有协同作用。结果表明,在血液分析方面,CAV与MDV共感染组较病毒单一感染组与对照组差异极显著,共感染不仅加重了鸡群贫血现象,而且延长了贫血的病理症状;而在禽流感病毒（Avian influenza virus,AIV）H5/H9疫苗、新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）疫苗和传染性法氏囊病毒（Infectious bursal disease virus,IBDV）疫苗免疫后3周的抗体检测中,CAV与MDV共感染组较其它各实验组差异极显著,抗体滴度大大低于其它实验组;此外,CAV与MDV共感染组,鸡体生长状况明显差于实验各组,有6只鸡只死亡（6/25）,比病毒单一感染时的死亡率大大增加。综上研究证明,CAV与MDV共感染在免疫抑制作用上有协同作用。     

鸡传染性贫血病毒诱导细胞凋亡的研究进展

鸡传染性贫血病毒是鸡传染性贫血病的病原体,能引起雏鸡贫血、淋巴组织萎缩、出血及免疫抑制,是导致许多疫苗免疫失败及雏鸡死亡的主要原因之一。该病毒在世界范围内广泛存在,是养鸡业潜在的巨大威胁。近年来的研究表明,鸡传染性贫血病毒主要是通过其编码的凋亡素诱导雏鸡胸腺和骨髓中的造血祖细胞凋亡而致病的,而凋亡素诱导细胞凋亡的能力与其在细胞中的核定位及半胱氨酸蛋白酶(caspase)等因素密切有关。文章就鸡传染性贫血病毒生物学特征、诱导细胞凋亡的现象及机制的研究进行了综述。     

免疫抑制鸡群鸡传染性贫血病毒和网状内皮增生症病毒共感染检测

分别用digoxigenin标记的鸡传染性贫血病毒（CAV)和禽网状内皮增生症病毒（REV）核酸探针以及PCR技术对某种鸡场进行检测，检测结果表明，在20个样品中，CAV和REV感染的阳性率分别为10％和5％，这一结果显示，CAV和REV感染是导致该鸡场发生免疫抑制的主要病因之一。     

鸡贫血病毒感染鸡细胞凋亡研究

用TUNEL法检测了1 日龄SPF雏鸡感染鸡贫血病毒(CAV)后胸腺和骨髓细胞的凋亡情况。结果,接种CAV 后6、10、20 d,骨髓细胞的凋亡率分别达51% 、52% 、57% ;接种后6 d,胸腺细胞凋亡率为53% ,比对照鸡胸腺和骨髓细胞的凋亡率明显升高( P< 0.01)。用流式细胞仪对胸腺细胞悬液所作的细胞凋亡分析结果与TUNEL法检测结果一致。