猪体脂肪形成的细胞学和形态学研究

通过对初生～１８０日龄的关中黑猪和长白猪背部皮下脂肪的组织形态学观察和细胞学参数的测定及其变化模式的综合分析，证明猪体脂肪形成主要是脂肪细胞的肥大作用。脂肪细胞的生长机制在不同经济类型猪种间有明显差异：①无论是脂肪细胞的肥大作用，还是脂肪细胞的增殖能力，关中黑猪都强于长白猪；②关中黑猪脂肪细胞的生长在１２０日龄以后明显加快，而长白猪则较稳定；③关中黑猪的细胞学参数表现为二相分布，而非一般的正态分布或高斯分布。     

miR-33a靶向Lipin1和IRS2调节绵羊前体脂肪细胞分化的研究

旨在揭示miR-33a在绵羊前体脂肪细胞分化中的生物学功能。本研究以15日龄雄性绵羊背部皮下前体脂肪细胞为试验材料,所有的试验均设立3个重复;利用生物信息学软件预测miR-33a的靶基因,并通过双荧光素酶报告试验对预测的潜在靶基因进行验证;用qPCR和Western blotting分别检测miR-33a、Lipin1和IRS2及其编码蛋白的表达,以揭示miR-33a与其靶基因在绵羊前体脂肪细胞分化中的表达规律;慢病毒介导实现miR-33a的过表达和干扰后,检测Lipin1、IRS2和成脂标志基因的表达,并用油红O染色检测脂滴沉积能力,以解析miR-33a对其靶基因的调节机制。生物信息学分析发现,miR-33a与Lipin1和IRS2 3'-UTR都存在结合位点,miR-33a显著下调Lipin1和IRS2野生型双荧光质粒的相对荧光活性（P<0.05）;在绵羊前体脂肪细胞分化中,miR-33a与Lipin1和IRS2的表达趋势相反;过表达miR-33a后,显著下调了Lipin1（P<0.01）和IRS2（P<0.05）及其编码蛋白以及成脂标志基因的表达;干扰miR-33a后,这些基因和蛋白的表达则显著上调;过表达miR-33a减少了脂滴沉积,干扰miR-33a促进了脂滴沉积。在绵羊前体脂肪细胞分化中,miR-33a与Lipin1和IRS2的表达呈负相关。miR-33a靶向Lipin1和IRS2的3'-UTR抑制绵羊前体脂肪细胞分化和脂滴沉积。     

胰岛素对原代培养猪脂肪细胞生脂和脂解相关基因转录表达及脂代谢的影响

为了研究体外胰岛素对猪脂肪组织脂肪代谢及相关基因表达的影响,对取自于7日龄大白×长白杂种仔猪皮下脂肪组织的脂肪细胞,经原代培养,用0!400nmol/L胰岛素处理48h,采用油红O染色提取、甘油试剂盒和半微量RT-PCR分别测定了脂肪细胞生脂和脂解的累计变化,以及转录因子固醇调控元件结合蛋白(SREBP)-1c和碳水化合物反应元件结合蛋白(ChREBP)、脂肪酸合成酶(FAS)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC1)和激素敏感脂酶(HSL)基因mRNA水平的变化。结果表明,低糖条件下(5mmol/L)下,胰岛素不影响原代培养猪脂肪细胞ChREBP和ACC1转录表达;胰岛素(200nmol/L例外)明显促进FAS转录表达,100!300nmol/L也显著增强SREBP-1c表达。但二者表达变化不一致,在原代猪脂肪细胞胰岛素是否是通过SREBP-1c途径调控FAS转录尚待进一步研究;高浓度胰岛素(300!400nmol/L)显著促进脂肪细胞HSL表达和脂解活性。     

大鼠脂肪细胞分化过程中脂代谢相关基因转录表达时序的研究

对大鼠附睾和肾周脂肪组织分离的前体脂肪细胞原代培养，采用RT—PCR法分析脂代谢重要酶和转录因子基因在不同分化阶段转录表达的时序变化。结果显示，在前体脂肪细胞阶段，固醇调控元件结合蛋白（SREBP）-1c、碳水化合物反应元件结合蛋白（ChREBP）以及脂肪酸合成酶（FAS）、乙酰辅酶A羧化酶α（ACC1）、硬酯酰辅酶A去饱和酶（SCD）和激素敏感脂酶（HSL）基因均不转录表达；HSL mRNA在分化初期表达，中期表达水平最高，分化末期降低；SCD mRNA在分化中期表达，末期表达水平显著提高；分化初期FAS mRNA水平明显高于中期和末期；ACC1 mRNA仅在末期表达；分化初期SREBP-1c mRNA水平较高，中期和末期显著下降；ChREBP mRNA表达水平在分化末期稍高于中期，但差异不显著。表明，SREBP-1c mRNA的表达与脂肪细胞早期分化调控有关，分化成熟脂肪细胞的ChREBP mRNA表达可能与生脂基因的转录激活有关。     

The effects of concentrations of lysine in media on differentiation of 3T3‐L1 preadipocytes

Intramuscular fat content is increased by feeding of low lysine diets in pigs. Reduction in dietary lysine intake results in low plasma lysine concentration and low cytosolic lysine concentration in skeletal muscles. From these observations, we hypothesized that low plasma lysine concentration in pigs fed on low lysine diets reduced supply of lysine from blood circulation to preadipocytes, and this limited supply of lysine might promote adipocyte differentiation in porcine muscles. In order to verify the hypothesis, we investigated the effects of low concentrations of lysine in culture medium on differentiation of 3T3‐L1 preadipocytes. Low concentration of lysine suppressed lipid accumulation and messenger RNA (mRNA) expression and enzyme activity of fatty acid synthase. mRNA expressions of peroxisome proliferator‐activated receptor γ (PPARγ) and CCAAT/enhancer binding protein α (C/EBPα) were lower in cells cultured in low lysine medium. On the other hand, mRNA and protein expressions of C/EBPβ and C/EBPδ were not inhibited by low concentrations of lysine in culture medium. These results indicate that low lysine concentrations in culture medium inhibit differentiation of 3T3‐L1 preadipocytes through inhibiting the mRNA expressions of PPARγ and C/EBPα.     

ADD1基因PCR-SSCPs标记与猪肌内脂肪含量及背膘厚的关系

采用PCR SSCPs方法在苏太猪脂肪细胞定向分化因子 1(ADD1)基因第 347和 374位点发现单核苷酸多态性(SNP) ,分别为ADD1第 90和 99位氨基酸密码子的第 3位碱基 ,但这两个位点碱基的替换均没有引起氨基酸序列的变化。通过对 10 0头苏太猪肥育猪背最长肌中肌内脂肪含量的相关分析 ,发现杂合子AB肌内脂肪含量最高 ,极显著地高于AA纯合子 (P <0 0 1) ,BB纯合子肌内脂肪含量介于AB和AA之间 ,并有高于AA纯合子的趋势 (P =0 11)。各基因型间背膘厚没有显著差异。提示ADD1基因该位点上的PCR SSCPs可能作为选择肌内脂肪含量 ,而不影响背膘厚的一个辅助选择标记     

抗脂肪细胞膜蛋白抗体对试验性肥胖大鼠5种激素水平的影响

为了验证抗脂肪细胞膜蛋白抗体减少动物脂肪沉积的作用效果,并对该抗体用于人类肥胖的治疗提供理论依据和试验资料,本试验分别对4组试验性肥胖大鼠注射0、0.1、0.5、1.0mg/mL剂量的抗脂肪细胞膜蛋白抗体,并检测4周内大鼠血清中5种激素含量及变化。结果显示,试验组血清中胰岛素(INS)含量低于对照组,Ⅰ组与Ⅳ组4周内均差异显著(P0.05);试验组与对照组、胰岛素样生长因子1(IGF-1)含量无显著差异(P0.05);注射抗体后,试验组生长激素(GH)含量显著增高,且Ⅰ、Ⅲ组4周内均差异显著(P0.05);第1周内,试验组三碘甲状腺原氨酸(T3)含量与对照组无显著差异(P0.05),后3周内Ⅰ组和Ⅳ组差异显著(P0.05);第1、3、4周内,Ⅰ组和Ⅳ组四碘甲状腺原氨酸(T4)含量差异显著(P0.05),第2周内无显著差异,Ⅱ组和Ⅲ组差异均不显著(P0.05)。此外,不同组间的差异显著性随注射剂量不同而不同。     

MAPK信号通路对脂肪细胞分化的调控

促分裂原活化的蛋白激酶(MAPK)通路主要包括胞外信号调控激酶(ERK)、p38MAPK和氨基末端蛋白激酶(JNK)三条途径,参与调节细胞增殖、分化、凋亡及细胞间的功能同步等过程,是细胞信号转导方面最为活跃的研究领域之一。研究显示MAPK也参与脂肪细胞的分化调节并发挥重要作用。ERK和p38MAPK信号通路对脂肪细胞分化的调节在不同的实验模型中表现为正调控和负调控两种不同形式;而另一成员JNK能使胰岛素受体底物1的丝氨酸发生磷酸化,进而干扰胰岛素信号,从而抑制骨髓间充质干细胞(BMSCs)的成脂分化,即对脂肪细胞分化发挥负调控作用。论文就MAPK信号通路在脂肪细胞分化中的功能进行综述,为脂类代谢性疾病的诊断和治疗提供参考。     

半定量RT-PCR法检测原代培养脂肪细胞生脂基因mRNA转录表达

在原代培养脂肪细胞生脂机制研究中,为了检测生脂基因ACCl和FAS mRNA表达水平变化,细胞总RNA经反转录合成cDNA,以β-actin为内参照,分别与ACCl和FAS等基因同管扩增.通过探讨和优化PCR体系中引物设计、退火温度、MgCl2浓度和循环次数等参数,以及引物对间的扩增竞争,建立了检测脂肪细胞生脂相关基因mRNA表达的半定量多重RT-PCR体系.结果显示,RT-PCR产物经电泳后,β-actin及生脂基因电泳带清晰,与预期产物大小一致,引物对间无扩增竞争,其扩增效率和特异性与单重RT-PCR体系相同,实验重复性好.因此,该方法和体系可用于快速、灵敏、可靠地检测特异基因mRNA的表达.