蟹源拟态弧菌最佳产毒条件的筛选

通过体外试验，探讨了培养条件的改变对蟹源拟态弧菌(HX-4)产毒量的影响。结果表明，培养基种类、氯化钠浓度、初始pH、溶解氧、培养温度和时间的不同均可影响细菌产毒量，HX-4菌株的最佳产毒条件为细菌接种于起始pH为8．0，含0．5％NaCl-BHI培养基，28℃振荡培养36h或静置培养48h。同时，通过动物实验测定了外毒素的致病性，结果显示，外毒素粗提液对小鼠及河蟹均有致病性。粗提液的溶血活性越高，对动物的致死率也越高。具有蛋白酶活性而无溶血素活性的粗提液，对动物只有致病性，而无致死性。     

病毒感染后杂色鲍部分血清免疫因子的变化

对杂色鲍(HaliotisdiversicolorReeve)进行病毒悬液和PBS(对照)注射感染,研究其血清免疫因子SOD、ACP、AKP、MPO活性的变化,并对实验结果进行统计学分析。结果表明,(1)注射病毒悬液组SOD活性变化为逐渐上升,至8h后达到最高点,然后逐渐下降;对照组SOD活力呈下降趋势,8h后上升,12h后恢复至初始水平,二者结果差异均为显著或极显著(P<0 05或P<0 01)。(2)注射病毒悬液组ACP与AKP活性的变化为:36h前变化不大,48h后明显上升;对照组ACP和AKP活性变化不大,二者结果除了第48小时外,差异均不显著(P>0 05)。(3)注射病毒悬液组MPO活性在第1小时内上升,然后逐渐下降,第8小时下降到最低点,随后逐渐上升;对照组在第1小时内下降,然后逐渐上升,第12小时升至最高点,然后逐渐下降,48h后与正常鲍活性基本一致。t检验显示,这两组结果在第1、4、8、24、36、48h差异显著或极显著(P<0 05或P<0 01),在第2、12小时差异不显著。结果显示,在人工感染病毒48h内,杂色鲍体内的免疫因子发生了明显的变化,血清中SOD活性降低,ACP及AKP活性显著升高,MPO活性显著升高。     

牙鲆经注射和浸泡免疫鳗弧菌灭活疫苗后7种免疫相关基因表达的变化

  制备鳗弧菌(Vibrio anguillarum)全菌灭活疫苗, 采用腹腔注射和浸泡两种方式分别免疫牙鲆(Paralichthys olivaceus), 于免疫后0 h、4 h、8 h、12 h、24 h、48 h、72 h、96 h、7 d、14 d分别取牙鲆脾、头肾、鳃3种组织, 提取mRNA, 应用实时荧光定量PCR法检测3种组织中白介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)α、主要组织相容性复合体(MHC)MCHⅠ、MHCⅡ、T细胞表面受体CD4、T细胞表面受体CD8、 免疫球蛋白(Ig)M 7种免疫相关基因的表达。结果显示, 两种方式免疫后各基因表达量均出现显著上调。注射组3种组织中, IL-1β、TNFα基因的表达高峰出现时间在12~24 h, MHCⅠ、MHCⅡ、CD4、CD8的表达高峰出现在48~72 h, IgM的表达高峰出现在免疫后7 d, 各基因表达量最高值是对照组的2~70倍; 浸泡组3种组织中, IL-1β、TNFα基因的表达高峰出现在免疫后12~48 h, MHCⅠ、MHCⅡ、CD8表达高峰出现在48~96 h, 但CD4在头肾和鳃中表达高峰出现在72 h, 在脾中表达高峰出现在7 d, IgM在鳃中表达高峰出现在96 h, 在脾和头肾中表达量在14 d内逐渐上升, 各基因表达最高值是对照组的2~20倍。结果表明, 注射组各组织基因的转录水平均高于浸泡组, 且脾、头肾中表达量最高值出现时间早于浸泡组, 但鳃中各基因峰值出现时间晚于浸泡组。研究结果为疫苗的免疫途径及免疫效果评价提供了基础数据。

     

矛尾复鰕虎鱼病原哈氏弧菌的鉴定及特异性检测方法的建立

取体表出血、肌肉溃疡的虾蟹养殖塘混养大量死亡的矛尾复鰕虎鱼的深层溃烂组织及肝脏进行细菌分离,2种被检组织中均分离到2种优势生长菌落;人工感染试验表明,其中的一株分离菌(S090801)浓度为106～108 cfu/ml可引起矛尾复鰕虎鱼全部死亡,该菌的形态特征、生理生化特性及基于16SrRNA和gyrB 2种基因的系统发育学分析确定为弧菌属的哈氏弧菌。同时基于gyrB基因序列设计1对特异性引物,建立了一种哈氏弧菌快速、敏感的PCR检测方法,扩增目的片段大小为363bp,该方法检测哈氏弧菌模板DNA最低质量浓度为0.046875ng/μl,可用于哈氏弧菌引起的水产动物疾病的快速诊断及分子流行病学的调查研究。     

人工感染的刺激隐核虫各期虫体的超微结构

从天然感染的卵圆鲳鲹（Trachiruotus blochii）分离到1株刺激隐核虫（Cryptocaryon irritans）,再经人工感染的方法收集各期虫体,制成电镜样品,对虫体进行超微结构研究。刺激隐核虫质膜的基本结构与淡水的多子小瓜虫的质膜相似,分为3层;外限制膜、外胞膜和内胞膜。刺激隐核虫的质膜小泡内充满大量电子致密物质（EDM）。幼虫、幼体和滋养体均具有复杂的口器,由胞咽、口肋、双动基体口纤毛和线带等组成,但不具备膜口类纤毛虫所具有的独特的细胞器：Lieberkuhn氏器。单动基体的体纤毛存在于幼虫、幼体和滋养体,但在包囊期,体纤毛和口器消失。各期虫体的胞质中具有线粒体、高尔基体和脂肪体等细胞器,有的阶段具有粘液囊、伸缩泡、食物泡、共生细菌等。粘液囊在大小、形态和分布上与多子小瓜虫的不同。文中分析了刺激隐核虫在形态上与多子小瓜虫的诸多差异,认为刺激隐核虫的分类更适合归于原口类（Promotome）,而不是膜口类（Ophryoglenina）。     

The first record of acute hepatopancreatic necrosis disease in the Philippines

A new and emerging disease is threatening the shrimp industry, a bacterial disease which contains a highly pathogenic plasmid, creating a deadly toxin that causes high mortality in shrimps. The disease has been identified as acute hepatopancreatic necrosis disease (AHPND) or commonly known as early mortality syndrome (EMS). To help the efforts of sustaining the shrimp industry, the study focused on detecting Vibrio parahaemolyticus causing AHPND/EMS affecting Penaeus vannamei (Boone, 1931) (Pacific white shrimp) and Penaeus monodon (Fabricius 1798) (Black Tiger shrimp) in different locations in the Philippines. The presence of the disease was determined by microbiological methods and polymerase chain reaction (PCR) and was confirmed by the histopathology of the hepatopancreas of infected shrimp. Results show that the prevalence of the pathogenic strain of V. parahaemolyticus from the shrimps collected were 33% in Luzon, 21% in Visayas and 5% in Mindanao. The study presents the first record of AHPND/EMS in the country. The detection of this newly emerging disease in the shrimp industry is very crucial as it is the first step in identifying affected sites towards strategizing ways to combat the disease.     

中国对虾红腿病致病菌的研究

本文对中国对虾(Penaeus orientalis Kishinouye)“红腿病”的病原菌分离、培养、菌种鉴定、人工感染、药敏试验等进行了试验研究,确认引起中国对虾“红腿病”不是单一的菌,不仅有海产弧菌(Vibrio marinus),而且还有产碱假单胞菌和类产碱假单胞菌(Pseudomonas pseudoalcaligenes)、反硝化产碱菌反硝化亚种(Alcaligenesdenitrificans Subsp·denitrifi—cans)、争论产碱菌(Alcaligenes Paradoxus)。     

5种海洋致病弧菌对34种中草药敏感性的测定

采用纸片扩散(K-B)法,测试了溶藻弧菌、哈氏弧菌、副溶血弧菌、河流弧菌、麦氏弧菌对34种中草药的敏感性,结果表明:试验菌株对中草药乌梅、黄连、木瓜、五味子、五倍子、马齿苋、白头翁、地榆、公丁香、大黄具有较高的敏感性。采用倍比稀释法,测定10种敏感性较好的中草药对5种海洋致病弧菌的抑菌试验,并测定了最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果表明:五倍子抑菌和杀菌能力最强,五倍子对溶藻弧菌、副溶血弧菌、河流弧菌、麦氏弧菌的MIC和MBC均为1.56 mg/ml,对哈氏弧菌的MIC和MBC为3.125 mg/ml;其次是黄连,对溶藻弧菌、河流弧菌、麦氏弧菌的MIC和MBC分别为3.125 mg/ml和6.25 mg/ml,对哈氏弧菌、副溶血弧菌的MIC和MBC分别为6.25 mg/ml和12.5 mg/ml;乌梅对5种弧菌有相同的抑菌和杀菌作用,其MIC和MBC均为12.5 mg/ml。最终确定五倍子和黄连可以作为防治水产养殖动物弧菌病的首选中草药药物。