溶藻弧菌Ⅲ型分泌系统vscC基因缺失株的构建

[目的]构建未引入任何遗传标记物的溶藻弧菌vscC基因框内缺失突变株。[方法]首先以溶藻弧菌ZJ51-O基因组DNA为模板,用重叠延伸PCR(gene splicing by overlap extension PCR,SOE-PCR)扩增法构建体外vscC基因缺失片段;扩增产物经酶切后连接至自杀质粒pDM4,再转化入大肠杆菌SY327进行克隆,筛选阳性克隆子并进行PCR分析鉴定;提取阳性克隆子的自杀重组质粒pDM4-△vscC,用热休克法将其转入到大肠杆菌S17-1中,再经接合生殖的方式将自杀重组质粒导入溶藻弧菌ZJ51-O菌株中,利用抗生素筛选策略与蔗糖反向筛选系统,挑选疑似目的突变菌株,最后利用PCR鉴定与测序分析进行确证。[结果]溶藻弧菌ZJ51-O的vscC基因框内缺失突变株构建成功。[结论]该研究为进一步研究vscC基因的功能和T3SS在溶藻弧菌致病过程中所起的作用奠定基础,同时也为溶藻弧菌的其他基因突变株的构建和研究提供了参考和试验经验。     

废弃农药厂污染场地浅层地下水生态毒性诊断研究

选择大型溞、斜生栅藻、发光菌为试验生物,对某废弃农药厂污染场地4个不同区域土壤剖面浅层地下水编号为CP01、CP02、CP03、CP04的4种水样进行了急性毒性试验,同时对水样进行了化学分析。结果表明,4种水样对大型溞的24h-EC50分别为0.29%、5.12%、0.83%、1.99%;对斜生栅藻的96h-EC50分别为11.04%、50.44%、12.21%、41.66%;对费舍尔弧菌的发光抑制率分别为95%、66%、88%、75%。化学检测结果表明,CP01中的主要污染物为苯系物与少量烷烃、烯烃类多种物质,CP02中的污染物质只有少量二氯甲烷与1,2-二氯乙烷两种物质,CP03、CP04中的主要污染物为苯系物与烷烃多种物质。毒性试验结果与化学检测结果具有较好的相关性,3种试验生物的毒性效应结果相一致。该研究方法简单快速,可以用于污染场地水样污染毒性诊断,快速筛选出敏感区域,同时提供污染物质的联合毒性基础数据,为场地进一步危害识别与风险评估提供依据。     

嗜水气单胞菌感染对美洲鳗鲡血液和生化指标的影响

为研究自发病美洲鳗鲡分离的嗜水气单胞菌对该鱼的致病性,试验将60尾美洲鳗鲡平均分为对照组、浸泡组和注射组3组,3组鳗鲡分别注射PBS、以1．0×10^8cfu／mL的嗜水气单胞菌浸泡和1．0×10^8efu／mL嗜水气单胞菌注射感染．各组鳗鲡分别于处理后6h和30h断尾采血并分离抗凝血和血清,抗凝血由血常规检测分析仪检测7项血液指标,血清由全自动生化分析仪检测13项与免疫相关的生化指标,数据用SAS软件进行统计学分析．结果表明,鳗鲡注射感染后6h,与浸泡组相比,血清谷草转氨酶（fiST）与谷丙转氨酶（ALT）的比值显著（P〈0．05）升高,其他指标在三组间均无显著（P〉0．05）差异．鳗鲡注射感染后30h,同对照组和浸泡组相比,血清总蛋白和血糖极显著（P〈0．01）下降,Na^＋和Cl^-浓度显著（P〈o．05）下降,而AST和ALT则均极显著（P〈0．01）上升．     

金黄色葡萄球菌攻击下小鼠泌乳期乳腺炎症病理机制分析

通过观察不同剂量(E1:10 CFU/μl;E2:20 CFU/μl;E3:100 CFU/μl;E4:200 CFU/μl;E5:2000CFU/μl)金黄色葡萄球菌攻击下的小鼠泌乳期乳腺炎症病理变化,选择最佳剂量建立小鼠乳腺内感染模型.结果表明:试验组乳腺组织中分离的细菌数呈先升高后下降的趋势,E3达到最高.组织形...     

虹彩病毒和柱状黄杆菌混合感染大鲵的诊治

2012年7月,贵州省某大鲵养殖场发生了以大鲵体表和四肢多处溃烂、内脏器官出现充血、出血为特征的疾病,经过临床症状观察、病理剖检及实验室诊断,诊断为虹彩病毒(Iridovirus)和柱状黄杆菌(Flabobacterium columnare)的混合感染.通过采取综合有效的防治措施,大鲵疫情得到有效控制.     

长春地区宠物犬贾第虫感染的分子流行病学调查与感染虫株的TPI基因分型

贾第虫是一种人兽共患性寄生原虫,可在全世界范围内传播,并且有人—人,人—动物,以及动物特异性的传播循环,且其流行率与地理环境以及不同的区域有关。采用分子生物学分析方法,确定长春地区的宠物犬患有贾第虫的患病率以及基因型来评估犬贾第虫向人传播的危险。调查结果显示:宠物犬的贾第虫流行率为10.46%(25/239)。通过磷酸丙糖异构酶(TPI)基因的多态性对所分离虫株的基因型进行鉴定,结果显示所有贾第虫的基因型均为犬特异性的C型,未发现人兽共患的A型和B型。基因亚型结果显示在所有的样本中以CⅠ为主要亚型,占全部样本的76.00%(19/25)。此结果显示出贾第虫由犬传播给人的风险很低,这与以往来自中国南方的调查结果明显不同。     

黄金鲫内脏类结节病的病原鉴定与药物敏感性试验分析

淡水养殖鱼类结节病是近年来时常爆发的疾病之一,为了有效预防和防治该病,从合肥郊区某养殖场濒死的黄金鲫(鲤鱼♀×鲫鱼♂)体内分离优势致病菌(命名为AH菌株),对其进行了鉴定。采用传统细菌分类方法,测定该菌株的形态特征、生理生化特性和常见药物的敏感性;应用分子生物学方法,对病原菌16S rRNA特异片段进行克隆、序列测定分析。AH菌株与对照鮰爱德华氏菌在形态特征和生理生化特性基本一致。序列分析结果显示分离的AH菌株与鮰爱德华氏菌(AB050826,NR_024769)菌株间基因序列同源性为99.9%以上,在系统发育树上与鮰爱德华氏菌聚为一族。人工回归复感染健康黄金鲫鱼,出现与原发性相似的内脏类结节病症状。药敏实验结果显示:AH菌株对氧氟沙星等11种药物敏感,对四环素等4种抗生素耐药,对磺胺类药物复方新诺明中度敏感。综合分析认为鮰爱德华氏菌是黄金鲫内脏类结节病的重要致病菌,该结果为黄金鲫内脏类结节病有效防控提供有益参考。     

一株海绵放线菌的分离培养、发酵条件优化及其抑制弧菌效果

为研究放线菌对海水养殖病原弧菌(哈维弧菌Vibrio harveyi和灿烂弧菌Vibrio splendidus)的抑制效果,从繁茂膜海绵Hymeniacidon perlevis中分离筛选出了一株具有抑菌活性的放线菌(FH),并采用16S r DNA基因序列进行分析,初步鉴定为球孢链霉菌Streptomyces globisporus;以抑菌活性为导向对放线菌FH菌株的发酵条件进行优化,并通过测量发酵沉淀菌丝体干质量,获得了FH菌株生长曲线,同时研究了发酵产物保存温度及时间对抑菌效果的影响,以及FH发酵产物在灭菌海水中对弧菌的抑制作用。结果表明:对FH菌株生长曲线测定结果显示,0~15 h为适应期,15~72 h为指数生长期,72~120 h为稳定期,120 h后为衰亡期;抑制弧菌效果试验显示,FH菌株发酵正交试验的最优条件为温度25℃、p H 7.5、装液量30m L(250 m L三角瓶);在正交试验最优条件下,FH菌株发酵培养72 h获得的粗提物抑制哈维弧菌和灿烂弧菌的效果最好;FH菌株发酵粗提物在4℃和-20℃下保存60 d和在室温保存7 d,其抑菌效果无显著性差异(P0.05);在100 m L灭菌海水中,FH菌株发酵产物2 m L可有效抑制哈维弧菌和灿烂弧菌的繁殖。研究表明,海绵放线菌及其发酵产物在海水养殖领域具有潜在应用价值。     

哈维氏弧菌的血清型与菌苗抗原性的关系

采用不同血清型哈维氏弧菌Vibrio hanwyi624、809和106等3个菌株，制备成福尔马林灭活菌苗，注射接种大黄鱼4周后，通过血清中凝集、交叉凝集抗体效价测定以及活菌攻毒试验，证明了3个菌株制备的菌苗抗原性存在差异。     

监利县山羊消化道线虫感染情况调查及驱虫试验

湖北省监利县种羊场放牧的马头山羊消化道线虫感染率为１００％，成羊和小羊粪中平均虫卵强度分别为７６．５个和９４．９个／ｇ粪；线虫种类包括血矛线虫、毛圆线虫、食道口线虫、仰口线虫、奥斯特线虫、类圆线虫６种，以前３种为优势种类，一般多为混合感染，用５％磷酸左旋咪唑按０．２ｍＬ／ｋｇ体重作皮下注射，驱虫效果显著，驱虫后３ｄ，各种类线虫虫卵转阴率和虫卵减少率均为１００％，４个月后追踪粪检，总的虫卵减少率仍有５０．１％。