暗纹东方鲀几种组织中可培养细菌的组成分析

采用16S rDNA特征序列PCR-DGGE法,分析了不同饵料饲养的暗纹东方鲀的表皮、肠道和河鲀毒素累积组织(肝和卵巢)中可培养细菌的群落组成.根据分子系统发育分析,共鉴定出45种可培养细菌,在这些细菌中,以变形细菌的gamma亚群占多数,其它分别隶属于低GC含量革兰氏阳性菌和高GC含量革兰氏阳性菌.摄食不同饵料的暗纹东方鲀,其肠道、表皮或河鲀毒素累积组织中的细菌菌落组成是不同的,但不管是摄食人工配合饲料或天然饵料,在暗纹东方鲀的肠道、表皮或河鲀毒素累积组织中,均发现已有报道的可产河鲀毒素的细菌类群,表明饵料来源对暗纹东方鲀的河鲀毒素产生不是必需的.     

低温诱导红鳍东方鲀雄性化及性腺分化的组织学观察

为探索无需紫外线照射、无需投喂性激素、操作简单的低温诱导红鳍东方鲀Takifugu rubripes雄性化的新方法,分别在孵化后15、45、75d将鱼苗进行15℃和17℃低温处理65d,以正常培育温度21℃为对照组,设置平行试验组,并对其性比及性别分化的组织学进行了观察。结果表明:(1)在15℃条件下,试验组雄性率最高可达(74.70±2.79)%;在17℃条件下,试验组雄性率最高为(59.60±3.49)%;在21℃条件下,对照组雄性率为(51.57±0.06)%;温度与雄性率呈负相关(R=-0.827),与雌性率呈正相关(R=0.823)。(2)在21℃条件下,对照组孵化后48d时出现卵巢腔,标志着卵巢分化的开始,68d时生殖腺柄部出现裂缝状的输精管原基,标志着精巢开始分化;在17℃条件下,试验组孵化后63d时观察到明显的卵巢腔,83d时出现输精管原基性腺;而在15℃条件下,试验组孵化后73d时出现明显卵巢腔,93d时出现精小叶,标志组织学上的分化。研究表明,随着处理温度的升高,性腺中细胞分裂速度呈线性关系,在一定范围内升温有助于性腺的发育。     

红鳍东方鲀生长性状的遗传力估计及性状间相关关系的初步研究

为估计红鳍东方鲀Takifugu rubripes生长性状的遗传力及生长性状间的相关关系,构建了5个全同胞家系,测定了210日龄(504尾)和360日龄(500尾)红鳍东方鲀的体质量、体长和体全长等生长性状的表型值,构建固定模型,用全同胞法估计了210日龄和360日龄红鳍东方鲀的体质量、体长和体全长3个生长性状的遗传力。结果表明:红鳍东方鲀的体质量、体长和体全长3个生长性状的遗传力估计值在210日龄时分别为0.54、0.38、0.52,在360日龄时分别为0.46、0.37、0.44,这3个性状的遗传力属于中等和高等遗传力;体质量与体长,体质量与体全长,以及体长与体全长的遗传相关系数在210日龄时分别为0.99、0.99、0.98,在360日龄时分别为0.97、0.97、0.96,这3个性状之间的遗传相关呈高度正相关;测定了102日龄(296尾)红鳍东方鲀的体质量、体长和体高3个生长性状,利用回归模型建立了体质量(W)与体长(L)和体全高(H)的数学模型为W=e-8.513L2.046H0.742(R2=0.903)。本研究结果可为红鳍东方鲀的遗传育种研究提供参考。     

红鳍东方鲀FoxO1基因的原核表达及纯化

采集红鳍东方鲀脂肪组织提取其总RNA,采用RT–PCR方法扩增和克隆红鳍东方鲀FoxO1基因的ORF,并构建其原核表达载体p ET–32/FoxO1,在大肠杆菌Rosetta(DE3)进行表达,通过IPTG诱导表达,对重组FoxO1蛋白进行可溶性分析、纯化及鉴定,结果表明:重组质粒p ET32a/FoxO1被成功构建;用IPTG进行诱导表达,融合蛋白主要以可溶蛋白形式存在,能与抗His标签的兔多克隆抗体发生特异性反应;纯化出了融合表达蛋白,获得了相对分子质量约为110 000的重组蛋白。     

暗纹东方鱼屯生殖期两性判别的研究

暗纹东方鱼屯俗称河豚，属江海洄游性鱼类。生殖季节，雌、雄个体副性征差异不明显，不能采用常规鉴别方法进行性别鉴定。作者根据体征、体态特征，采用综合指标判别法对１９９５年３月１５日至５月３０日在江苏仪征—泰州６０ｋｍ江段渔获的１０３８尾暗纹东方鱼屯进行了雌、雄性别判定，正确率达９５．４％。该方法操作简单，不伤鱼体，仅凭眼观即可判定自由游动状河鱼屯的雌、雄。文中有关利用行为差异来判定鱼类雌、雄的方法，国内外尚未见诸报道。该项工作为鉴别鱼类性别提供了一种新方法，在鱼类人工繁殖和规模化生产中具有一定应用价值     

盐度对暗纹东方鲀胚胎发育的影响

研究了不同盐度对暗纹东方鲀胚胎发育的影响，盐度为4和8的试验组中受精卵的发育历期、孵化率及初孵仔鱼24小时的存活能力和淡水相比均无显著差异。在盐度12及以上，绝大部分受精卵死亡，仅有极少数个体孵化出膜，且全为畸形并都在24小时内死亡；发育速度随着盐度的升高而变慢。因此，暗纹东方鲀胚胎正常发育所能耐受的盐度范围是0～8。     

Pathological changes induced by three myxosporeans in the intestine of cultured tiger puffer, Takifugu rubripes (Temminck and Schlegel)

Pathological changes in cultured tiger puffer, Takifugu rubripes , with emaciation disease in Kyushu, Japan were studied histologically. In most cases, diseased fish were heavily infected with at least one of three myxosporeans ( Myxidium fugu , Myxidium sp. and Leptotheca fugu ) and two unidentified hyperparasitic microsporeans, attached to, or in, the intestinal epithelium. Myxidium fugu attached to the surface of the epithelium, caused no noticeable effects on the host tissue, irrespective of its infection with the hyperparasite. Myxidium sp., which proliferated in the epithelium, induced severe pathological changes including accumulation of cell debris between the epithelium and lamina propria and resultant detachment of the epithelium. Leptotheca fugu, another histozoic myxosporean, induced degeneration of the epithelium, associated with massive infiltration of macrophages into the epithelium to encapsulate parasites. When L. fugu was infected with its hyperparasitic microsporean, shortened villi were also observed. This is probably because passage of macrophage-parasite aggregates through the basement membrane of the epithelium severely damaged the epithelial structure. It is evident histologically that, unlike epicellular M. fugu , histozoic Myxidium sp. and L. fugu with or without hyperparasitic microsporeans, were highly pathogenic to host fish. This strongly suggests that they are causative agents of the emaciation disease.     

红鳍东方鲀SREBP-1基因的电子克隆及生物信息学分析

利用斑马鱼的SREBP-1的氨基酸序列NP_001098599.1为探针,对红鳍东方鲀基因组数据库进行BLAST分析,获得红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)的固醇调节元件结合蛋白-1 (Sterol regulatory element binding protein-1,SREBP-1)的cDNA序列及相应的氨基酸序列.采用生物信息学方法对其基本理化性质、蛋白质结构及功能结构域进行分析.结果发现红鳍东方纯SREBP-1基因的开放阅读框全长3 330 bp,共编码1 109个氨基酸;红鳍东方鲀SREBP-1的氨基酸序列与黄斑蓝子鱼、大西洋鲑、斑马鱼、人、牛及原鸡的同源性分别为81％、73％、72％、55％ 、55％、54％和54％;系统进化分析结果表明,红鳍东方纯SREBP-1与黄斑蓝子鱼的进化关系最为密切,亲缘关系最近;红鳍东方鲀SREBP-1蛋白中α-螺旋较多,该蛋白质氨基端包含1个bHLH-zip的结构.     

红鳍东方鲀Sirt1基因的克隆及其原核表达

【目的】克隆红鳍东方鲀Sirtuin1(Sirt1)基因编码阅读框(ORF),并对其进行原核表达。【方法】采集红鳍东方鲀脂肪组织,提取其总RNA,采用RT-PCR方法扩增和克隆红鳍东方鲀Sirt1基因的ORF,构建其原核表达载体pET32a/Sirt1,并在大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行表达。【结果】红鳍东方鲀Sirt1基因ORF区由2 070个核苷酸组成,编码689个氨基酸。根据红鳍东方鲀Sirt1ORF核苷酸序列推测的氨基酸序列与其他物种进行比对,发现其与罗非鱼(Oreochromis niloticus)、非洲齿鲤(Nothobranchius furzeri)、科恩氏假鳃鳉(Nothobranchius kuhntae)、斑马鱼(Danio rerio)、人(Homo sapiens)和小鼠(Mus musculus)的同源性分别为82%,82%,81%,66%,72%和69%;成功构建了重组质粒pET32a/Sirt1,用IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE电泳结果显示,在约105ku处有特异性的蛋白条带出现。【结论】克隆得到红鳍东方鲀Sirt1基因的ORF序列,并成功对其进行了原核表达。