转基因镜鲤精子保存及人工授精孵化试验研究

为提高鱼类的精子保存及授精孵化水平,对转基因镜鲤的精子在0.5%水解乳蛋白Hanks液中进行了常温(23℃)和冷藏(4℃)保存试验,并观察其活力及保持时间。结果表明,冷藏保存的精子不论其活力、活力持续时间及保存时间均好于常温保存的效果。对保存2d的精子进行了授精及孵化试验。结果表明,经保存的精子(2d)完全可以授精和孵化出苗。     

牛精子体外获能前后元素变化的研究

 本文应用x射线能谱技术，对获能前后精子质膜表面（头部、中段）和内部（顶体内、中段线粒体内）的元素进行了分析测试。结果表明，牛精子用肝素+咖啡因体外获能后，头部、中段质膜表面的Na、Al、S、K含量升高，Cl、Ca含量降低；顶体内Na、Mg、Si、P和Fe含量降低，而Ca、K、Cl和S含量升高；精子中段线粒体内Na、P、Si、Cl和Ca升高，而Mg、S、K和Fe却降低。获能过程中精子顶体内Na/Ca、Na/K、Cl/Ca、Cl/K和Na/Cl的浓度比分别为42.13、12.43、15.36、45.31和2.74；而摩尔比又分别为73.42、21.13、17.37、4.99和4.23。本文并对可能的获能机理进行了讨论。     

汪清麦饭石的毒理学研究

为开发新的饲料添加剂，阐明其限量和安全性，本试验首次对汪清麦饭石做了较系统的毒理学研究．急性毒性试验结果ＬＤ５０＞２０ｇ／ｋｇ，说明汪清麦饭石属实际无毒类物质．微核试验、精子畸形试验和致畸试验结果表明，在小鼠口粮中添加３．０％以下麦饭石时，致突变阴性（Ｐ＞０．５），无胚胎毒性和致畸作用；添加量达５．０％时，可使小鼠精子畸变率增高（Ｐ＜０．０１），外现畸形率达２．０％．以上结论提示我们，在大剂量使用麦饭石时应引起注意．     

精子提取物对绵羊显微授精受精率及胚胎发育影响的研究

将绵羊精子可溶性撮物与上不运动绵羊精人同注射于体外成熟的绵羊卵母细胞并在体外培养，结果发现，共同注射的卵母细胞卵裂率、２￣１６细胞发育率，桑椹胚发率育，囊胚发育率均显著高于对照组，其中卵母细胞卵裂率和２￣１６细胞发育率还显著高于精子单独注射组；桑椹胚，囊胚发育率明显高于精子单独注射组。     

不同因素对牛卵母细胞胞质内精子注射效果的影响

采用胞质内精子注射法（ICSI）构建牛显微受精胚胎,探讨卵母细胞成熟培养时间、精子状态及精子操作液中聚乙烯吡咯烷酮（PVP）浓度对牛卵母细胞胞质内显微受精（ICSI）卵体外发育的影响。结果显示：成熟培养20 h、24 h和28 h的卵母细胞用于ICSI时,ICSI卵的形态完整率分别为94.6%（175/185）、97.2%（173/178）和96.4%（189/196）（P〉0.05）;成熟培养24 h和28 h的卵母细胞,其ICSI卵的卵裂率（73.4%和70.9%）和囊胚发育率（31.8%和29.6%）显著高于成熟培养20 h的卵母细胞（61.1%和20.6%）（P〈0.05）。对成熟培养24 h的卵母细胞注射获能精子时,ICSI卵的卵裂率和囊胚发育率（72.7%和31.4%）高于未获能精子组（69.4%和29.3%）和不运动精子组（71.5%和30.4%）,但无统计学差异（P〉0.05）。采用含5%,10%和15%PVP的精子操作液处理获能精子后对成熟培养24 h的卵母细胞进行ICSI操作,PVP浓度为5%和10%时,ICSI卵的卵裂率（73.2%和66.9%）和囊胚发育率（32.7%和29.7%）差异不显著（P〉0.05）,但二者均显著高于15%PVP浓度组的卵裂率和囊胚发育率（51.0%和16.3%）（P〈0.01）。结论认为,选用获能精子,并使用含5%PVP的精子操作液进行处理,对成熟培养24 h的牛卵母细胞进行ICSI操作,有利于ICSI卵的体外发育。     

锰对公鸡乳酸脱氢酶活性和精子密度的影响

本文就日粮锰对公鸡乳酸脱氢酶(LDH)活性及生殖功能的影响进行了研究。结果表明日粮中锰缺乏或过多引起血清、肝脏和睾丸 LDH 活性同步下降。精子数/睾丸Ⅰ组(添加 Mn 0ppm)、Ⅳ组(添加 Mn 300ppm)比Ⅲ组(添加 Mn100ppm)分别降低了35.06%和31.55%,表明精子生成过程对锰的需要量有一定的范围。睾丸 LDH 活性和精子数/睾丸之间 r=0.6791(P<0.05),提示锰缺乏或过多造成睾丸生精功能下降的重要原因之一是由于锰影响了睾丸 LDH 活性。     

冷冻前后牛羊精子表面三种凝集素受体的定量研究

 用自己设计的酶标凝集素法测定了乳用牛、乳肉兼用牛、中国美利奴羊、澳洲美利奴羊新鲜和冷冻精子表面的麦芽凝集素（WGA）受体、大豆凝集素（SBA）受体及伴刀豆球蛋白A（Con A）受体的相对数量。在乳用牛精子，冷冻后WGA受体数量显著下降（P< 0.01），穿透实验表明WGA受体数量与精子的穿透率呈高度正相关（r=0.86），另两种受体的数量在冷冻后无显著变化，与精子的穿透率也无相关关系。在乳肉兼用牛精子，冷冻后数量显著下降的是SBA受体（P< 0.01）在中国美利奴羊精子是WGA受体（P< 0.05）和Con A受体（P< 0.05），而在澳州美利奴羊精子三种受体的数量均无显著变化。     

无角道赛特绵羊精液低温和冷冻保存试验

采用不同成分的稀释液对无角道赛特14号种公羊鲜精进行了低温保存(4℃)和冷冻保存(-196℃)试验。结果表明:在4℃条件下,精液在A、B、C和D四种稀释液中分别保存72h、72h、144h和192h后,仍然满足输精要求,从而确定D液为最佳稀释液(30g/L葡萄糖、14g/L柠檬酸钠、3g/L乙二胺四乙酸钠、2g/LvE、50mL/L卵黄)。在冷冻保存试验中,C液为细管精液冷冻保存最佳稀释液(56g/L蔗糖、52g/L乳糖、4g/L乙二胺四乙酸钠、2g/LvE、50mL/L甘油、50mL/L卵黄),冻后精液的活力为0.48;在上述实验基础上,给C液中分别添加催产素(添加后浓度为20IU/100mL)、前列腺素(添加后浓度为0.1mg/100mL)及催产素 前列腺素(20IU/100mL 0.1mg/100mL)进行细管精液冷冻保存,其冻后活力分别为0.55、0.48、0.52,说明含20IU/100mLOT的C液对无角道赛特绵羊精液的冷冻保存效果最好。     

不同孵育时间对猪精子转染外源DNA效果的影响

建立稳定的精子载体法技术体系对家畜的转基因育种等研究具有重要意义.为获得公猪精子与DNA最佳共孵育时间,优化建立猪精子载体法技术体系,本研究通过定量PCR、荧光显微镜检测和精液常规分析方法等,研究分析猪精子与DNA不同共孵育时间对猪精子活力、活率、DNA转染率、吸附DNA和内化DNA量的影响.结果表明,多聚乙烯亚胺(polyethyleneimine,PEI)包裹的标记DNA与精子共孵育15、30、60和90 min后,随着孵育时间的延长,精子活力和活率有极显著下降(P＜0.01),而精子转染率呈极显著(P＜0.01)或显著(P＜0.05)上升,吸附外源DNA量和内化外源DNA量也呈上升趋势,但是30 min后不同孵育时间之间差异不显著(P＞0.05).此外,随着共孵育时间的延长,与精子转染率提高幅度相比,精子活力和活率的下降幅度更明显.综合考虑精子活力、活率、转染率、吸附DNA量和内化DNA量等参数,猪精子与外源DNA共孵育时间以30 min为最佳.     

36h睡眠剥夺对雄性小鼠性行为及精子质量的影响

[目的]研究睡眠剥夺对雄性小鼠性行为及精子活性的影响。[方法]用轻柔刺激法睡眠剥夺昆明雄性小鼠36 h,观察其性行为,通过镜检计算精子活率和精子畸变率。[结果]36 h睡眠剥夺后,捕捉潜伏期极显著升高(P0.01),捕捉次数极显著降低(P0.01)。36 h睡眠剥夺后精子活率显著降低(P0.05),精子畸变率极显著升高(P0.01)。[结论]36 h睡眠剥夺可对雄性小鼠性行为及精子质量产生明显不良影响。