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71.
72.
参照GenBank中小反刍兽疫病毒(PPRV)H抗原基因序列,人工合成了PPRVH基因,将其克隆至PUC18-T质粒中,转化E.coli JM109感受态细胞,构建并选择PPRVH基因克隆重组质粒,经核苷酸序列分析正确,将其克隆至pBAD/Thio—TOPO载体中,转化E.coli TOP10感受态细胞,核苷酸序列分析证实,成功构建了PPRVH基因重组表达载体。经不同浓度L-阿拉伯糖诱导,可稳定、高效地表达PPRVH抗原。SDS-PAGE分析结果表明,用终浓度为0.2g/L的L-阿拉伯糖诱导5h的表达量最高,表达蛋白为分子质量约83ku的融合蛋白;经薄层扫描分析,其表达产量约占菌体总蛋白的10%。Western-blotting检测表明,诱导的蛋白能与PPRVH蛋白单抗发生特异性反应,说明表达的融合蛋白中含有PPRVH糖蛋白抗原。 相似文献
73.
用大肠杆菌BL21表达了马立克氏病病毒(MDV)强毒GA株的囊膜糖蛋白B(gB)基因,通过SDS-PAGE电泳分离表达蛋白条带,切下并碾碎后作为免疫原制备单克隆抗体。通过ELISA和间接免疫荧光试验(IFA),得到1株阳性单克隆抗体杂交瘤细胞株7C8。该单抗腹水的ELISA效价为1:2^12,IFA效价为1:800,与MDV不同致病型毒株CVI988、GA、RB1B、MD11、648A株感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)均呈IFA阳性。1:100稀释时与GA株感染的CEF在斑点酶联免疫吸附试验(dot-ELISA)中呈阳性。 相似文献
74.
以禽网状内皮组织增生症病毒(REV)的cDNA为模板,用PCR技术获得囊膜糖蛋白(env)基因的部分片段并构建了pGEX-4T-3-env表达质粒,进而在大肠杆菌BL21中表达融合蛋白GST-env,SDS-PAGE证明表达的融合蛋白以包涵体的形式存在。融合蛋白经过变性、复性以及牛凝血酶酶切后得到纯化的目的蛋白env,免疫BALB/c小鼠,经融合、筛选制备特异性单克隆抗体(mAb),并通过间接ELISA、间接免疫荧光和Western blotting等方法对mAb做初步鉴定。结果表明,试验成功表达了env蛋白,并获得了4株稳定分泌针对env蛋白的杂交瘤细胞(3-2A11,1-2B3,1-2D11,3D2),其分泌的mAb的Ig亚类(型)分别为IgG2b,IgG2b,IgG2b,IgG1。ELISA检测,对应腹水的效价分别为1∶105,1∶2.1×105,1∶2.2×105,1∶105。Western blotting结果显示4株抗env的mAb均能特异性识别env蛋白,间接免疫荧光分析则表明只有3-2A11和3D2这2株mAb能与REV全病毒特异性反应。 相似文献
75.
为了有效监测犬免疫狂犬病疫苗后的保护效力,以狂犬病毒(Rabies virus,RV)糖蛋白的主要优势抗原表位区G3蛋白(RV G3)作为包被抗原,建立了一种检测狂犬病毒中和抗体效价的间接ELISA方法.通过优化反应条件,确定抗原最佳包被量为8 mg/L,血清的最佳稀释度为1∶100,酶标二抗的稀释度为1∶3 000.特异性试验表明,该抗原不与犬瘟热病毒、犬腺病毒、犬细小病毒阳性血清发生交叉反应;批内和批间重复性试验的平均变异系数都小于10%;敏感性达1∶1 280.此方法检测134份血清样品的结果与美国SYNBIOTICS试剂盒相比,总符合率达95.6%. 相似文献
76.
表达马立克氏病病毒CVI988/Rispens株糖蛋白B基因的重组鸡痘病毒疫苗的免疫保护研究 总被引:1,自引:0,他引:1
用鸡痘病毒载体表达马立克氏病病毒(MDV)糖蛋白B(gB)基因构建成重组鸡痘病毒(rFPV)。以MDV GA或Md5和RBIB混合攻毒,在不同品种的鸡中评价rFPV-gB/R单价苗和与火鸡疱疹病毒(HVT)组成的二价苗的免疫保护效力。试验结果表明,MDV疫苗和FPV母源抗体阴性的SPF鸡和母源抗体阳性的商品鸡中,rFDV-gB/R均能提供免疫保护作用,且其中一种商品蛋鸡中rFPV-gB/R与HVT液氮苗或HVT冻干苗结合使用,均有显著的免疫协同保护作用。免疫学研究指出,rFPV-gB/R与常规疫苗一样,可显著地降低疫苗免疫攻毒鸡的病毒血症和羽囊排毒。 相似文献
77.
为获得狂犬病病毒(RV)糖蛋白抗原,采用RT-PCR方法从狂犬病病毒ERA株中扩增了编码RV糖蛋白的全长基因,将其克隆于pMD18-T载体,再经PCR扩增出糖蛋白全长基因和膜外区基因,将其分别亚克隆至原核表达载体pET-28a(+)、pET-32a(+)和pGEX-4T-1中,经PCR和双酶切鉴定以及序列分析,表明已成功构建了重组质粒。将重组质粒转化到大肠埃希氏菌BL21(DE3)中进行表达,结果显示,克隆到pET-32a(+)的糖蛋白膜外区基因表达量最高,目的蛋白表达量占菌体总蛋白的45.4%。经Western-blotting检测,不同载体表达的糖蛋白膜外区产物均可与兔抗RV多抗发生特异性反应,表明,重组蛋白具有良好的反应原性。 相似文献
78.
79.
为了研究甘薯糖蛋白对小鼠血脂水平的影响。先用含8.0%猪油的高脂鼠料诱导小鼠成为高脂血,再将其平均分为四组,一组用普通鼠料饲养作为对照,其他三组分别用含0.5%、1.0%及1.5%甘薯糖蛋白的鼠料饲养,在第15天和第30天对每只小鼠采血,用全自动生化分析仪测定其中的甘油三酯及血清胆固醇的浓度。结果发现用含1.0%甘薯糖蛋白的鼠料饲养15d就能明显降低高脂血模型小鼠血液中的血清总胆固醇水平,继续饲养30d能显著降低其中的甘油三酯水平;如果用含1.5%甘薯糖蛋白的鼠料饲喂,则只需15d就能同时降低两者的水平。因此甘薯糖蛋白具有显著降低高脂血模型小鼠血脂的作用。 相似文献
80.
采用水提醇沉法提取6种真菌中的糖蛋白,通过苯酚—硫酸法、间羟基联苯法、BCA法测定其总糖、酸性糖和蛋白质含量,采用PMP柱前衍生化法和HPGPC法测定其单糖组成及分子量分布,采用顺铂建立受损肾细胞模型,研究6种食用真菌糖蛋白的恢复作用。结果表明,香菇糖蛋白的总糖含量最高,为38.11%,口蘑糖蛋白中蛋白质含量最高,为34.21%,各糖蛋白中酸性糖含量均较低且相差不大;6种食用真菌糖蛋白中均含有甘露糖、葡萄糖和半乳糖,其分子量在500~20 000 u之间,在质量浓度为12.5~50 μg·mL-1时6种多糖对受损肾细胞具有一定的恢复作用。理化性质测定结果表明,这6种食用真菌糖蛋白均含有较高的多糖成分,且均对顺铂诱导的肾细胞损伤具有一定的恢复能力。 相似文献