伪狂犬病病毒在NF-κB家族p65基因敲除细胞系的复制规律研究

试验旨在研究伪狂犬病病毒(PRV)在NF-κB家族p65基因敲除细胞系中的复制规律。利用慢病毒介导的CRISPR/Cas9基因定点修饰技术构建猪肺泡巨噬细胞(3D4/21)p65基因稳定敲除细胞系。通过构建p65-sgRNA重组质粒,转染至HEK293T/17细胞,收取慢病毒,感染3D4/21细胞后利用嘌呤霉素筛选获得多克隆细胞系,T7核酸酶检测敲除效率,再通过有限稀释法获得3D4/21-p65^-/-的稳定细胞系。CCK-8试剂盒检测3D4/21细胞中敲除p65基因后对细胞增殖的影响;流式细胞术检测PRV-GFP感染3D4/21及3D4/21-p65^-/-细胞后病毒增殖的差异;实时定量PCR检测PRV感染3D4/21及3D4/21-p65^-/-细胞后PRV gB、TK基因mRNA表达水平及PRV感染细胞诱导的IL-1β和IL-6基因mRNA水平表达的变化;Western blotting检测PRV-QXX感染3D4/21及3D4/21-p65^-/-细胞后PRV gB、gE蛋白的表达;滴度测定检测PRV-QXX感染3D4/21及3D4/21-p65^-/-细胞后子代病毒滴度。结果表明,sgRNA2和sgRNA3的基因编辑效率较高,对其进行克隆化培养进而获得敲除p65基因的稳定表达细胞系;CCK-8试剂盒检测细胞活力表明,p65基因敲除对细胞活力无影响;流式细胞仪检测表明,同一时间点PRV-GFP在3D4/21-p65^-/-中的增殖显著高于对照细胞;实时荧光定量PCR表明在3D4/21细胞中敲除p65基因促进了PRV gB、TK基因的mRNA表达水平,而抑制了IL-1β、IL-6基因的mRNA表达;Western blotting结果表明,在3D4/21细胞中敲除p65基因促进了PRV gB、gE蛋白的表达;滴度测定结果表明,同一时间点PRV-QXX在3D4/21-p65^-/-细胞中子代病毒的复制显著高于对照细胞。以上结果均表明,p65基因敲除可促进PRV在3D4/21细胞中复制。     

中国荷斯坦牛干奶期长度的群体特征及其与生产性能的关系

本研究旨在探究北京地区中国荷斯坦牛干奶期长度（DPL）的变化规律及其变异对奶牛各项生产性能的影响,包括产奶性能、繁殖性能、初乳品质和乳房健康。收集了北京地区34个牧场出生于2009—2018年136 231头中国荷斯坦牛的干奶日期、生产性能记录、繁殖性能记录等。通过整理试验牛群的干奶记录,揭示了北京地区中国荷斯坦牛1胎和2胎DPL的群体规律,利用固定模型分析了胎次、产犊季节、场-产犊年和初产月龄对DPL的影响;此外,利用固定模型分析了DPL的变异对日产奶量、乳脂率、乳蛋白率、首末次配种间隔（interval from first to last insemination,IFL）、产犊至首次配种间隔（interval from calving to first insemination,ICF）和初乳品质的影响,利用Logistic回归过程分析了DPL的变异对首次配种受胎率（conception rate of first insemination,CR）、首次配种56 d不返情率（56-days non-return rate of first insemination,NRR56）、难产率和乳房健康的影响。研究结果显示,北京地区中国荷斯坦牛DPL平均为58.81 d,胎次、产犊季节、场-产犊年和初产月龄均对DPL有显著影响（P<0.05）。DPL的变异对日产奶量、乳蛋白率、ICF、CR、NRR56、难产率和乳房健康有显著影响（P<0.05）。干奶期短的奶牛测定日平均乳蛋白率、CR和NRR56更高;DPL适中的奶牛测定日平均产奶量更高、乳房健康水平更好、ICF更短、难产率更低。本研究在国内利用大规模牛群数据揭示了中国荷斯坦牛DPL的群体规律,可为中国规模化奶牛场提升管理水平提供参考。     

草原畜牧业产业链利益联结机制影响因素研究

在草原畜牧业产业链的建设过程中,构建稳定、和谐、有效的产业链利益联结机制,是产业链有效运行的必要前提和重要支撑。基于此,对新疆、内蒙古、青海及甘肃的四大典型草原牧区利益联结主体牧户、合作社和龙头企业进行了实地问卷调查,运用结构方程模型对其产业链利益联结机制的影响因素进行了实证分析。研究结果表明,行为表现、畜产品物流特征和合作意愿对产业链利益联结机制有显著的正向影响;经营状况并不能直接影响其产业链的利益联结,而是通过其他3条路径间接影响产业链的利益联结机制;主体的行为表现可以直接和间接影响彼此间的利益联结,畜产品物流特征对于彼此间合作意愿影响是微乎其微的;产业链主体的发展状况、契约关系、分销渠道以及合作预期的认知分别是经营状况、行为表现、畜产品物流特征和合作意愿中对利益联结机制影响最为显著的因素。     

Undernutrition in the parental and first generation provokes an organ‐specific response to oxidative stress on neonates of second filial generation of Wistar rats

Undernutrition induces an increase of the oxidative stress that can predispose offspring to various diseases in adulthood through epigenetic reprogramming. The aim of this study was to evaluate the effects of intergenerational undernutrition on protein oxidation and antioxidant defence response on liver, heart and brain of the second‐generation neonates (F₂) of undernourished rats. For this purpose, both parents in parental (F₀) and first generation (F₁) were fed with a low‐nutrient diet. Body mass and length decreased (p < 0.05) in F₀, F₁ and F₂ being the F₁ males who exhibited a greater mass loss. A decrease in plasma albumin concentration was observed in F₂ neonates (p < 0.05) and also a mass loss of liver, heart and brain (p < 0.05), although proportionally to body length reduction. Undernutrition increased levels of protein oxidation in liver and heart (p < 0.05) but not in brain (p > 0.05) while catalase activity increased only in brain (p < 0.05). In summary, intergenerational undernutrition modifies the antioxidant status through an organ‐specific response, on F₂ neonate rats, where the brain increased catalase activity to prevent a severe oxidative damage and support the vital functions of this key organ to maintain vital functions.     

金免疫层析法检测囊虫循环抗原试验研究

应用胶体金和免疫层析技术进行了检测金免疫层析法(GICA)囊虫循环抗原(CA)试验研究。5株抗囊虫McAb和一株多抗用于最佳配对的筛选,一株用于标记胶体金,另一株包被NC膜。以双抗体夹心ELISA为对照,GICA用于CA检测,观察其敏感性、特异性和稳定性。结果显示,以McAb 1A5和1B6配对的结果最佳,1A5最适标记量为10μg／mL,186最佳包被浓度为1 g／L;用GICA和ELISA两种方法检测囊虫CA,痈猪血清和囊液的符合率达100％,病人血清和脑脊液的符合率达80％;CA最低检测量为10 ng,检测正常猪、人及其他疾病血清,均呈阴性;检测时间5-15 min,整个实验仅一步操作;GICA试纸条分别在4℃和室温下保存105 d以及在37℃保存45 d,检测结果均未发现改变。以上结果表明,快速检测囊虫循环抗原的金免疫层析法具有简便、快速、敏感、特异和稳定的特点,适合基层使用。     

猪流行性腹泻病毒间接ELISA检测方法的建立

猪流行性腹泻（porcine epidemic diarrhea,PED）是由猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）引起的猪的一种急性、高度传染性肠道疾病,给养猪业造成了严重的经济损失。本研究以纯化的PEDV 为包被抗原,通过优化 ELISA 反应条件,建立了间接 ELISA 抗体检测方法,其反应条件为：抗原最佳包被浓度为 20 μg/mL,血清标准品最佳稀释度为 1：500,包被时间为4℃过夜,5%小牛血清37℃封闭1 h,二抗 1：10 000稀释,37℃作用1 h,抗体临界值为 D_{450 nm}≥ 0.289判为阳性,D_{450 nm}≤ 0.236判为阴性,介于二者之间为可疑。检测猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、伪狂犬病毒、细小病毒和口蹄疫病毒标准血清抗体均为阴性,重复试验变异系数均小于10%,对江苏、江西、福建、广东地区74份猪血清样品进行检测,抗体阳性率达84%,表明该方法具有较好敏感性、特异性和重复性,可用于 PEDV 抗体检测和流行病学调查。     

甘肃黄芪属AstragalusLinn.黄芪亚属Subgen.Phaca（Linn.）Bunge植物研究

研究整理了甘肃黄芪属黄芪亚属植物共２０种,１个亚种,７个变种,１个变型。提供了分种检索表及每个种的文献及其在甘肃省的产地和分布。其中５个种为分布新记录。     

不同干燥方法对鸭茅营养成分及其损失的影响

研究干燥方法对鸭茅(不同生育阶段)营养成分及其损失量的影响。结果表明:(1)随着生育期的推进,粗蛋白质和粗灰分含量逐渐下降,中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维含量逐渐增加,而水溶性碳水化合物含量开始不断增加,开花期最高,结实期又迅速减少;干燥方法对水溶性碳水化合物含量的影响极其显著(P<0.01),其含量的顺序为:烘干>晒后烘干>晒干>阴干。(2)干燥方法与营养物质的损失量间差异显著(P<0.05),其损失量的顺序为晒后烘干>晒干>阴干。不同干燥方法的水溶性碳水化合物损失量与干物质、粗灰分、无氮浸出物损失量之间呈显著相关,相关系数分别为0.8798、0.6404和0.6568。     

前列腺素E2和F2α对LPS刺激后奶牛子宫内膜上皮细胞COX-1和COX-2表达的影响

试验旨在阐明前列腺素E₂（prostaglandin E₂,PGE₂）和F_2α（prostaglandin F_2α,PGF_2α）对体外培养的奶牛子宫内膜上皮细胞中环氧合酶-1（cyclooxygenase-1,COX-1））与环氧合酶-2（cyclooxygenase-2,COX-2）表达的影响。培养奶牛子宫内膜上皮原代细胞和传代细胞,第4代细胞以1×10⁶个/孔接种于6孔板,以10^-7mol/L PGE₂和PGF_2α分别预处理细胞24 h,以100 ng/mL细菌脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）刺激细胞4、8和12 h后分别提取RNA和总蛋白质,采用实时荧光定量PCR与Western blotting等技术检测COX-1与COX-2 mRNA和蛋白质的表达量。结果表明,与对照组相比,COX-1 mRNA表达量在PGE₂单独作用4、8和12 h后显著上调（P<0.05）;COX-2 mRNA表达量在PGE₂单独作用4和12 h后显著上调（P<0.05）,PGE₂单独处理使COX-1、COX-2蛋白表达量均显著上调（P<0.05）。与对照组相比,LPS刺激8和12 h时COX-1 mRNA表达量显著下调（P<0.05）,LPS刺激后COX-1蛋白表达量无显著变化（P>0.05）;LPS刺激后4、8和12 h时COX-2 mRNA表达量显著上调（P<0.05）,LPS刺激后COX-2蛋白表达量显著上调（P<0.05）。与LPS单独处理组相比,LPS+PGE₂处理组在8和12 h时COX-1和COX-2 mRNA表达量均显著上调（P<0.05）,同时COX-1和COX-2蛋白表达量也显著上调（P<0.05）。PGF_2α在LPS未刺激和刺激后对COX-1和COX-2 mRNA的表达无显著影响（P>0.05）,仅在PGF_2α单独处理8和12 h后COX-1 mRNA表达量上调（P<0.05）。两种激素联合处理与各自单独处理及LPS单独刺激相比,对COX-1和COX-2 mRNA表达具有一定的协同诱导作用。     

Study on the Virulence Gene Distribution and Genetic Evolution of Cattle Shiga Toxin-producing Escherichia coli Isolates

This study was aimed to understand the relationship of virulence gene distribution and genetic evolution between cattle originated Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) and human originated enterohaemorrhagic Escherichia coli (EHEC) O157. This experiment collected 18 strains STEC in a dairy farm from Jiangsu province and 9 STEC reference strains (human, sheep, swine and avian), according to the method of U.S. Centers for Disease Prevention and Control Center (PulseNet), using the XbaⅠ enzyme digestion and pulsed field gel electrophoresis (PFGE) analysis, virulence genes were detected in some STEC isolates. The virulence gene distribution of O157 from different origin was remarkably different. The cattle originated STEC O157 and the human originated EHEC O157:H7 (EDL933W) had the most similar virulence gene distribution. In contrast, virulence genes were lack in cattle STEC O18 and O26, even though the cattle STEC O18 and O26 had the similar genotype as human EHEC O157:H7 (EDL933W). PFGE of Xba Ⅰ digested chromosomal DNA from 27 isolates of STEC exhibited 22 profiles. In general,the Dice coefficients of different originated STEC ranged from 72% to 100%.Cattle STEC O157 had a high similarity with two strains of human originated EHEC O157, while a low similarity was demonstrated between cattle STEC O157 and STEC O157 of swine and avian. The Dice coefficients of the cattle STEC O157 and the two strains of human EHEC O157 ranged from 83% to 95%. The Dice coefficients of cattle STEC O26 (Ⅶ,Ⅷ) and the two strains of human EHEC O157 were more than 82%. Therefore, it was concluded that the cattle STEC O157 and human EHEC O157 had a closer relationship in terms of virulence gene distribution and in genetic evolution.