中国沿海6个花鲈群体的遗传多样性分析

利用8对微卫星或简单重复序列[microsatellite or simple sequence repeats(SSR)]标记对辽宁东港(DG)、绥中(SZ),河北秦皇岛(QHD),山东青岛(QD),浙江舟山(ZS)以及广东珠海(ZH)海域的6个花鲈(Lateolabrax maculatus)群体进行遗传多样性分析。结果表明,共检测到等位基因90个,每个位点的等位基因数(NA)为3~20;有效等位基因数(Ae)为1.7~11.4;观测杂合度(Ho)为0.355~0.971;期望杂合度(He)为0.398~0.912;多态信息含量(PIC)为0.365~0.906;6个群体的遗传多样性处于中等水平且群体间差异不显著(P0.05),其中舟山群体的遗传多样性最高(NA=11;He=0.762;PIC=0.734),绥中群体的遗传多样性最低(NA=9.8;He=0.721;PIC=0.692);哈代?温伯格平衡检验显示,除秦皇岛群体外,标记Lama18、Lama21和Lama29在其他5个群体中偏离HWE(P0.01)。位点Lama18与Lama42间存在极显著性的连锁不平衡(P0.01);分子方差(AMOVA)分析结果显示群体间、群体内个体间以及所有个体间的方差均达显著性水平(P0.01);群体间配对Fst(pair-wise Fst)和遗传距离分析结果显示,舟山群体与其他5个群体遗传分化最远,遗传距离最大,而北方的绥中、东港、青岛以及秦皇岛4个群体间分化不显著;聚类分析显示,珠海与秦皇岛群体先聚合,再与舟山群体聚为一支。绥中、东港、青岛群体聚为一支;遗传组分分析结果显示,6个花鲈群体中共包含3个主要遗传组分,其中舟山群体遗传混杂少,遗传信息保留完整,而绥中、东港和青岛3个群体遗传组分类似,遗传混杂严重。另外,秦皇岛与珠海群体约40%的遗传组分相同;研究结果表明,中国沿海的花鲈群体中除舟山群体外,绥中、东港、青岛、秦皇岛和珠海5个群体的遗传多样性已受到现有养殖模式与养殖逃逸的影响。     

花鲈对常用饲料原料中氨基酸和磷的利用率研究

试验以Cr2 O3为指示物 ,以 70 %基础饲料和 30 %的待测饲料原料组成试验饲料 ,在室内流水养殖系统中 ,采用虹吸法收集粪便 ,测定了花鲈对红鱼粉、豆粕、花生粕、菜籽粕、肉骨粉和棉籽粕中蛋白质、氨基酸的表观消化率和磷的利用率。在水温 2 5± 1℃的试验条件下 ,花鲈对鱼粉、豆粕、花生粕和菜籽粕的蛋白质的表观消化率都在 80 %以上。花鲈对原料氨基酸表观消化率的变化与对蛋白质表观消化率的变化相一致 ,除了赖氨酸、缬氨酸、蛋氨酸之外 ,对肉骨粉中表观氨基酸的消化率最低。对饼粕类原料中的含硫氨基酸 (如蛋氨酸 )的表观消化率低于其他氨基酸 ,对鱼粉中的组氨酸、对肉骨粉中的苏氨酸利用率最低。花鲈对鱼粉中磷的利用率最高为 85 5 2 % ,而对菜籽粕、肉骨粉和棉籽粕中磷的利用率很低 ,仅为 8 6 9%～ 2 4 82 %。     

中性植酸酶在豆粕型饲料中替代磷酸二氢钙对花鲈生长及磷代谢的影响

本文旨在研究豆粕型饲料中用中性植酸酶替代不同水平的磷酸二氢钙,对花鲈(Lateolabrax japonicus)生长和磷代谢及利用的影响。以(2.52±0.01)g的花鲈为试验对象,用中性植酸酶分别替代试验用的豆粕型饲料中60%(PE6)、80%(PE8)和100%(PET)的磷酸二氢钙,每个替代水平饲料中分别设置1000FTU/kg(PE610,PE810,PET10)和1500FTU/kg(PE615,PE815,PET15)2个梯度。8周的养殖试验结果显示,在豆粕型饲料中用中性植酸酶替代磷酸二氢钙后,对各试验组花鲈的生长、鱼体成分和蛋白质消化率均无显著影响(P>0.05);但PE615和PE815组的干物质消化率显著高于对照组(P<0.05),PE815组的脂肪消化率显著高于PE610、PET10和PET15组(P<0.05),而PE615和PE815的总磷消化率显著高于对照组、PE610组和PET15组的(P<0.05)。各试验组的总磷摄入量、表观磷的摄入量、粪磷和非粪磷的排出量均随试验料中磷酸二氢钙添加量的减少而显著降低(P<0.05),而除PE610和PE815以外的各试验组的总磷储积率却显著高于对照组(P<0.05)。根据本试验的结果,在含有30.5%豆粕的花鲈饲料中添加一定量的中性植酸酶同时减少磷酸二氢钙的添加量后,仍能显著提高饲料中磷的消化和利用(P<0.05)。中性植酸酶的添加量以1000FTU/kg饲料为宜,其作用相当于12g/kg的磷酸二氢钙。     

黄鳍鲷基因组微卫星的分离

采用磁珠富集法构建黄鳍鲷(Acanthopagrus latus Houttuyn)基因组微卫星富集文库。共挑选60个克隆进行测序,分析发现58个克隆分别含(GA)n或(CA)n两碱基重复单元。进一步通过序列比对,最终获得41个具有特异微卫星序列的阳性克隆。其中,23个克隆含有(GA)n或(CT)n两碱基重复序列,17个克隆含有(GT)n或(CA)n重复序列,另1个含有以上两种重复类型。获得的微卫星序列中,单一型及间断型序列各有20条,另有1条属于复合型序列。序列长度为117~512 bp,平均259 bp。微卫星核心序列两碱基重复5到38次,绝大多数序列重复次数大于10。基于微卫星两端的侧翼序列设计并获得了3对能够在黄鳍鲷基因组有效扩增的微卫星引物。本研究旨为进一步开展黄鳍鲷分子育种及资源评价分析提供基础资料。     

花鲈白细胞介素8基因的克隆与序列分析

采用同源克隆和末端快速扩增(RACE)的方法,从经LPS刺激的花鲈(Lateolabrax japonicus)总RNA反转录产物中获得了803 bp的IL-8 cDNA序列。该序列包含159 bp的5′非编码区(UTR)和359 bp的3′非编码区(UTR)以及297 bp的开放阅读框(ORF),可编码99个氨基酸。序列的3′UTR含2个mRNA不稳定基序,在Poly A尾上游17 bp处有1个明确的Poly A加尾信号(AATAA)。预测的氨基酸结构含27个氨基酸组成的信号肽,将信号肽切除可产生72个氨基酸组成的成熟肽,预测成熟肽的分子量约为8.3 kD,等电点为7.85。花鲈IL-8序列中用于形成二硫键的4个半胱氨酸保守,前2个半胱氨酸被1个精氨酸分开,形成CXC结构。与其他鱼类的IL-8相似,花鲈IL-8序列中也缺乏哺乳类中存在的ELR基序,而含有ELH结构。进化分析显示,花鲈IL-8与从鱼类和哺乳类分离的IL-8有不同程度的同源性,与硬骨鱼黑鲷(Acanthopagrus schlegeli)和牙鲆(Paralichthys olivaceus)的进化关系最近,其次为软骨鱼类,与无颌类和哺乳类的分化较大;而哺乳类的ELR结构可能为IL-8在进化过程中特化而成的结构,以加强IL-8特异性的趋化能力。     

鲈鱼白细胞介素-8 cDNA序列的克隆与原核表达

采用RT-PCR方法扩增和克隆了鲈鱼白细胞介素-8(LjIL-8)的编码阅读框。该编码阅读框由300个核苷酸组成,编码由99个氨基酸组成前体蛋白。LjIL-8氨基酸序列与哺乳动物和鱼类IL-8类似物的氨基酸同源性分别为23%~48%和25%~92%。氨基酸序列分析表明,N端存在一长23个氨基酸的信号肽,含有形成2个链内二硫键的4个半胱氨酸。分子进化分析表明,LjIL-8与欧洲鲈鱼的亲缘关系最近。将LjIL-8编码序列克隆到原核表达载体pET-28a (+),转化E.coli BL21(DE3)后用IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE检测结果表明,预期分子量大小的小分子蛋白在大肠杆菌中成功表达,Western-blotting检测结果显示,目的蛋白能与抗6×His单克隆抗体发生特异性反应。     

侧多食跗线螨天敌种类调查及其应用前景研究

据调查,侧多食跗线螨的天敌种类有16种,隶属于7个科,其优势种为塔六点蓟马和拟长毛钝绥螨。通过生态位研究,从理论上阐述了应用天敌昆虫控制侧多食跗线螨的可行性。通过天敌昆虫保护与应用技术研究,提出了增加天敌昆虫种群数量和有效控制侧多食跗线螨的技术途径。     

Growth-dependent survival mechanisms during the early life of a temperate seabass (Lateolabrax japonicus): field test of the ‘growth–mortality’ hypothesis

Three concepts based on size, time and growth rate are contained in the functional mechanisms of the ‘growth–mortality’ hypothesis, and are known as the ‘bigger is better’, ‘stage duration’ and ‘growth-selective predation’ hypotheses, respectively. Although it is sufficiently documented in fishes that faster growing and bigger larvae selectively survive, synergistic operation of the three components of the ‘growth–mortality’ hypothesis within a species have received little attention. In this study, we have tested the components of the ‘growth–mortality’ hypothesis based on the growth characteristics of original population (OP) and survivors (SV) of Japanese seabass (JSB) Lateolabrax japonicus. Larval and juvenile JSB were repeatedly sampled from the Tango Sea in 2007 and 2008. Otoliths from larvae and juveniles were analyzed to produce back-calculated daily records of size-at-age and growth rate, and were compared between OP and SV. Selective survival for fast-growing and bigger larvae was evident, and our results strongly support the ‘bigger is better’ hypothesis as well as the ‘growth-selective predation’ hypothesis. Growth rates of the individuals that metamorphosed into juveniles had significantly faster growth rates than non-metamorphosing larvae older than 48 days, the minimum age for metamorphosis, suggesting a clear relationship between growth rates and the timing of metamorphosis. On average, SV completed the larval stage ∼13 days earlier than those of OP, supporting the ‘stage duration’ hypothesis. Thus, SV of JSB exhibited traits consistent with all aspects of the ‘growth–mortality’ hypothesis: faster growth, bigger size-at-age, and shorter larval stage duration (LSD), i.e., larvae with faster growth, bigger size-at-age and a shorter LSD selectively survived the larval period. Although maternal influence on growth and survival was evident, factors that regulate growth–mortality mechanisms remain to be explored for JSB.     

RseB影响溶藻弧菌感染花鲈的能力

为了研究Rse基因缺失对溶藻弧菌感染花鲈能力的影响，评估了花鲈感染后的LD50、定殖能力和免疫响应，结果显示，溶藻弧菌野生株LD50为2.013×105CFU/ml，RseB缺失溶藻弧菌LD50为5.526×105CFU/ml，RseB缺失溶藻弧菌毒力下降2.75倍；溶藻弧菌主要在花鲈的鳃部、肠道、皮肤定殖，RseB缺失溶藻弧菌定殖肠空泡化程度更低，鳃组织结构的损坏程度更低；分别对野生株与RseB缺失溶藻弧菌感染的花鲈头肾组织进行转录组测序，发现与免疫相关的差异表达基因一共有236个，其中包括了122个显著上调的免疫基因和114个显著下调的免疫基因，这些基因大部分显著富集在Th1和Th2细胞分化、B细胞受体信号通路、T细胞受体信号通路等特异性免疫通路上，部分基因显著富集在与细胞凋亡相关的通路以及与炎症相关的NF-kappa B信号通路中。综上结果表明RseB缺失溶藻弧菌能引起宿主细胞的免疫反应且毒力有所降低。