斜带石斑鱼3种致病性弧菌的分子生物学鉴定

从患病斜带石斑鱼分离到3株病原菌EcGS020802、EcGS021001、EcGS020801,经常规生理生化鉴定均属于弧菌属的种类。为了进一步确定其分类地位,测定了3株病原菌的16SrRNA和HSP60(heat shock protein,HsP60)基因部分序列。16SrRNA基因系统进化分析表明,3株病原菌与哈维氏弧菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌亲缘关系较近,相互之间同源性均大于98．6％,差异不明显。HSP60基因序列分析表明,菌株EcGS020802、EcGS021001、EcGS020801 HSP60基因序列分别与哈维氏弧菌(AF230934)、溶藻弧菌(Ab230931)、副溶血弧菌(AF230951)HSP60基因的同源性最高,依次为95．7％、99．8％和99．8％,而与其它弧菌HSP60基因的同源性均低于90．6％,3株病原菌相互之间的同源性低于91．0％。HSP60基因构建的系统进化树表明,EcGS020802、EcGS021001、EcGS020801分别与Vibrio harveyi、Vibrio alginolyticus、Vibrio parahaemolyticus聚类。综合上述结果,菌株EcGS020802、EcGS021001、EcGS020801可分别鉴定为哈维氏弧菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌。结果表明,HSP60基因比16SrRNA基因更适合用于海水鱼致病性弧菌种问的分类研究。     

~(60)Co射线对高免卵黄液中霉形体杀灭作用的研究

用60Co射线处理高免卵黄液,研究了不同剂量、剂量率对霉形体的灭活效果和对卵黄抗体的影响。结果表明,60Co射线可以完全杀灭高免卵黄液中的霉形体,霉形体在卵黄液中的灭活剂量为6.0kGy;10.0kGy以下的辐照剂量不影响卵黄液中蛋白质含量、pH值和活性氧自由基,同时不影响抗体效价。     

利用 GST pull-down 联合质谱技术鉴定H7N9 禽流感病毒 PA-X 的互作蛋白

[目的]为探究H7N9亚型禽流感病毒(AIV)PA-X蛋白的功能,采用GST pull-down联合质谱技术筛选与鉴定与PA-X相互作用的宿主蛋白.[方法]构建PA-X的重组表达载体pGEX-4T-PA-X,转化大肠杆菌BL21(DE3)中表达重组蛋白,并利用GST亲合树脂进行纯化得到GST-PA-X融合蛋白.利用GST pull-down技术,将GST-PA-X和GST对照蛋白分别与A549细胞裂解液总蛋白进行体外孵育,得到的蛋白复合物经SDS-PAGE分离后进行质谱检测分析.[结果]经GST pull-down筛选与质谱分析鉴定后得到39个高可信度的可能与PA-X互作的候选蛋白质.通过GO注释和KEGG等通路富集分析发现,这些蛋白主要参与RNA的代谢及加工、mRNA翻译及运输、多肽生物合成及基因表达的转录后调节等生物学过程.对其中评分最高的蛋白Hsp70-2与PA-X的相互作用作进一步验证,免疫荧光试验结果表明Hsp70-2与PA-X可以在细胞浆中共定位.[结论]利用GST pull-down联合质谱技术筛选到39种与PA-X互作的候选蛋白,且经免疫荧光试验证明候选蛋白Hsp70-2与PA-X存在共定位,为深入探讨PA-X在AIV生命周期中的作用机制奠定基础.     

~(60)Co辐照联合热处理在制备太空食品中的研究

以炒面总菌落数和感官品质为指标,从不同热处理条件和辐照剂量中选择100℃热处理30 min,5或10 kGy辐照处理炒面后于25℃进行一年期保藏试验,定期(0、90、180、270、360 d)检测各类微生物含量、感官品质及蛋白质含量的变化情况。结果表明,~(60)Co辐照联合热处理能在一年保藏期中使炒面保持无菌状态,同时炒面感官品质较好,可接受度较高,辐照处理对蛋白质含量无明显影响。因此,~(60)Co辐照联合热处理可用于炒面的灭菌处理,进而为开发传统中式菜品作为中国太空食品提供技术支撑。     

养殖大菱鲆腹水症病原菌SR1的分离及鉴定

从患腹水症的养殖大菱鲆（Scophthalmus maximus）腹水分离到1株优势细菌SR1，人工感染实验证实其具有致病性。经API ID32E系统鉴定为溶藻弧菌（Viibrio alginolyticus），并测定了其16S rRNA基因序列和热激蛋白HSP60（Heat shock protein，HSP）基因序列。基于16S rRNA基因序列构建的系统树结果表明，菌株SR1与溶藻弧菌（AY967727）亲缘关系最近，然而置信度较低，仅有27％，不能有效地鉴定到种。HSP60基因序列分析表明，该菌株与溶藻弧菌（AF230931）同源性最高，为99．2％。系统发育树表明SR1确与溶藻弧菌（AF230931）聚为一个分支，且置信度较高，为84％。综合上述结果，菌株SR1可鉴定为溶藻弧菌。[中国水产科学，2006，13（4）：603—609]     

Hsp70在小鼠体外早期胚胎发育中的表达

为探究热休克蛋白Hsp70在小鼠体外早期胚胎发育中的表达情况以及Hsp70在胚胎发育中的作用机理,本试验采集8~12周龄SPF小白鼠的卵巢,在体式显微镜下采集卵母细胞并培养成熟,用0.1%透明质酸酶消化卵丘卵母细胞复合体后,放入SrCl₂+CB液中进行5 h(37℃)的孤雌激活,然后移入G1培养液进行培养。取培养至2细胞期、4~8细胞期、9~16细胞期、桑椹期和囊胚期的小鼠胚胎提取总RNA,通过实时荧光定量PCR检测Hsp70在各个时期的表达情况,免疫荧光染色检测其在各个时期小鼠胚胎的表达定位。实时荧光定量PCR结果表明,Hsp70在小鼠体外早期胚胎的2细胞期、4~8细胞期、9~16细胞期、桑椹期、囊胚期都有表达,但在2细胞期胚胎和4~8细胞期胚胎的相对表达水平较高,在9~16细胞期胚胎、桑椹期胚胎和囊胚期胚胎的相对表达水平较低。免疫荧光染色结果显示,Hsp70定位于各个时期胚胎的细胞核和细胞质中,但9~16细胞期以后Hsp70主要定位于细胞核中。综上所述,Hsp70对小鼠体外早期胚胎的发育具有潜在的调控作用,这为进一步明确热休克蛋白Hsp70在胚胎抗热应激中的作用及机理研究提供了理论依据。     

兔出血症病毒主要结构蛋白基因的克隆、原核表达及其免疫原性鉴定

本试验采用RT-PCR方法扩增了兔出血症病毒(rabbit haemorrhagic disease virus,RHDV)衣壳蛋白VP60基因。PCR产物纯化后连接T载体,提取质粒后,进行序列测定,将测序正确的纯化产物双酶切,克隆入原核表达载体pET28b(+)中,构建原核表达载体。将鉴定正确的重组质粒转化表达宿主菌E.coli Rosetta^TM,用IPTG诱导培养重组表达菌。经SDS-PAGE分析,在分子质量62.0 ku处可见明显的表达带,经Western blotting检测,约在62.0 ku处出现特异性的反应带。结果表明,表达蛋白具有良好的抗原性。     

60 %环·敌可湿性粉剂在甘蔗田使用的安全性评价

对60%环.敌可湿性粉剂不同剂量、不同施药时期、不同施药方式进行对比试验,探讨该除草剂在甘蔗田使用的安全性。结果表明,从施药时期看,以甘蔗生长2~4叶期施药比芽前施药或6~8叶期施药较安全;从施药方式看,以相对定向喷雾比直接封顶喷雾安全;从剂量看,以900 g a.i./hm2造成的药害轻且容易恢复,而2700 g a.i./hm2不仅药害重且不易恢复,1800 g a.i./hm2则介于上述两者之间。     

^60Co-γ射线对成体长牡蛎生长的影响及致死效应

Effects of ionizing irradiation of ^60Co-γ ray on mortality and growth of one year-old Pacific oysters ( Crassotrea gigas ) were studied. Irradiation was conducted at 4℃ and without sea water, and the survival, shell length, shell width, whole wet weight and condition index of irradiated oysters were measured. A biphasic dose response effect of 6^60Co-γ irradiation on Pacific oyster with high stimulatory response dose range to 100 Gy, and strong hormesis effects had been observed. Gamma ray induced mortality happened within 90 days after irradiation, and the relation between dosage ( D ) and mortality at 90 days could be described by the equation of M90 = 0.0041D^2- 0. 1816D (R^2= 0. 9958) with an LD50/90 of 135 Gy, indicating that the Pacific oyster has strong resistance to ^60Co-γ irradiation. Growth in shell length, shell width and whole wet weight of Pacific oyster were also enhanced by 60 Gy of ^60Co-γ ray. The condition index was also enhanced by ^60Co-γ irradiation in the dosage range from 40 to 100 Gy, with the maximum stimulatory response of 2.5 fold of control value at the 40 Gy dosage, suggesting that the accelerating effects of γ ray on growth of the Pacific oyster led to increase in dry meat. Results of this study showed that ionizing irradiation might be useful in the improvement of production traits in shellfish.     

云荞1号的选育及高产栽培技术

云荞1号是由云南曲靖地方苦荞资源经60Co-γ射线辐射,系统选育而成。通过第八轮国家苦荞品种区域试验,云荞1号在北方和南方组中比对照九江苦荞分别增产8.3%和6.0%,其单产在14个参试品种中居第4位。2010年通过国家小宗粮豆品种鉴定委员会鉴定。该品种适宜在云南昭通、四川西昌、内蒙古赤峰、山西五寨、甘肃定西等地及与之相近的生态区域推广种植。