肉鸡热休克蛋白70 mRNA荧光定量PCR方法的建立和优化

对适应性饲养到30日龄时的60只肉鸡进行热应激处理,通过热休克蛋白70(heatshockprotein70,HSP70)mRNA荧光定量PCR(fluorescencequantitativePCR,FQ-PCR)方法检测热应激处理肉鸡组织中HSP70mRNA含量。虽然受试鸡肝脏和心脏的HSP70mRNA水平在热应激6h时略低于对照组(P>0.05),但随持续性高温应激时间的延长,HSP70mRNA水平逐渐升高,热应激18h时应激肉鸡肝脏和心脏HSP70mRNA水平达最高水平,明显高于对照组(P<0.01)。实验选用3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(GAPDH)作为内参照,体外转录的RNA和阳性质粒作为两种标准品。结果显示,实验所建立和优化的FQ-PCR反应体系是理想的。     

热胁迫对大豆花荚离层细胞HSP70基因表达、能量供应及花荚脱落率的影响

实验运用Northern blot检测和生理生化分析等技术研究热胁迫对大豆(Glycine max)品种花荚离层细胞的HSP70基因表达、能量供应及花荚脱落的影响。结果显示，热胁迫能够提高所有6个供试大豆品种花荚离层细胞的HSP70基因表达水平、线粒体及其蛋白含量以及细胞色素氧化酶表达量，而不同程度地降低了所有供试品种的花荚脱落率。结果说明，大豆花荚离层细胞HSP70基因的高效表达可能是通过有效地改善花荚离层细胞的能量供应，从而达到抑制花荚脱落的目的。关键词: 大豆；热胁迫；HSP70基因；线粒体；细胞色素氧化酶；花荚脱落率     

小麦热激蛋白基因TaHSP70克隆及其在植物防卫和抗逆反应中的表达分析

热激蛋白是一类结构非常保守的分子伴侣类型的应激蛋白,在调控动、植物代谢和信号传导等方面发挥重要作用.本研究利用同源克隆法,筛选非亲和条锈菌小种CYR32侵染诱导的cDNA文库,分离获得1个HSP70家族基因的全长cDNA序列TaHSP70.序列分析发现,该cDNA片段包含1个2 412 by开放阅读框,推测其编码包含6...     

甘蓝新品种秦甘70的选育及其抗病优质性评价

秦甘 70是利用具有抗病优质和配合力高的两个自交不亲和系 HS2 10 3- 6 - 9和 FT6 32 8- 1- 5配育成的杂交一代 ,为中早熟甘蓝新品种 ,定植到叶球收获 70 d左右。植株综合经济性状优良 ,中心柱 6 .5 cm,紧实度0 .5 7,帮叶比 2 6 .5 % ;叶质脆甜 ,富含营养物质 ,鲜重含粗蛋白 11.81g/ kg,粗纤维 4 .113g/ kg,可溶糖 32 .5 g/ kg,VB1 2 .118g/ kg;抗 Tu MV,Br和 CMV3种病害 ;产量 6 4 32 0 .0 kg/ hm2 ,比对照中甘八号增产 15 .1%。     

黄瓜CSHSP70基因内含子结构分析

 【目的】探明黄瓜CSHSP70基因的内含子数目及其结构特点。【方法】根据黄瓜CSHSP70基因cDNA序列设计引物，应用PCR技术从gDNA中克隆CSHSP70基因，采用RT-PCR技术验证内含子的存在。【结果】经测序与拼接，得到长度为4 056 bp的黄瓜CSHSP70基因，它包含7个内含子。经分析发现这些内含子富含A•T，具有类似启动子和HSE核心结构的序列存在。对黄瓜、甜瓜和丝瓜CSHSP70基因部分序列的比较分析表明，该基因在这3个葫芦科作物中具有很强的保守性。【结论】内含子存在的特殊结构表明其可能对该基因表达具有调控作用。     

用高稳系数法评价玉米品种的高产稳产性

应用高稳系数（HSC）法对1994年华北春玉米区试结果进行分析,综合评价参试品种的高产性和稳产性。12个品种中,3138高产稳产性最好,旱21×丹85566虽然丰产性好,但稳产性差。长试19丰产性和稳产性都差。高稳系数法,简便实用,所得结果与常规分析基本一致。     

植物HSP70反义基因工程雄性不育表达载体的构建及鉴定

[目的]为更好地研究HSP70热激蛋白基因与植物雄性不育的关系。用PCR方法克隆了水稻花药特异表达启动子Osg6B,将其与设计合成的HSP70反义片段连接,构建了由水稻花药特异表达启动子Osg6B驱动的HSP70反义表达载体,并进行了PCR和酶切鉴定。[结果]克隆的Osg6B启动子序列与所发表的序列同源性高达97%,启动子区域的顺式调控元件完整;构建的由水稻花药特异表达启动子Osg6B驱动的HPS70反义表达载体通过了菌落PCR验证和表达载体值粒的酶切鉴定,载体构建成功。[结论]该表达载体的构建将为植物基因工程雄性不育的利用奠定基础。     

Protective role of heat-shock protein 70 in gastric mucosal lesion induced by endotoxin in cirrhotic rats with portal hypertensive gastropathy

AIM: To investigate the protective role of heat-shock protein 70 (HSP70) in the pathogenesis of gastric mucosal damage in cirrhotic rats with portal hypertensive gastropathy (PHG).METHODS: The rat model of liver cirrhosis with PHG was established by injection with tetrachloride.The animals were divided into normal control group, PHG group, PHG+heat treatment group, PHG+BPI21 group and PHG+endotoxin groups.The endotoxin used in the experiment was at the dose of 3 mg/kg and endotoxin antagonist BPI21 was at the dose of 2 mg/kg.HSP70 was induced by pre-treating the animals with mild whole-body heating.The levels of HSP70 and tumor necrosis factor alpha (TNF-α) in the gastric mucosa were measured by ELISA.Furthermore, the pathological changes of the gastric mucosa were observed under microscope with HE staining.RESULTS: Compared with the normal control rats, the rats in PHG group showed obvious gastric pathological lesion, decrease in HSP70 production and increase in TNF-α level in the gastric mucosa, and increased endotoxin concentration in the plasma.Compared with PHG+endotoxin group, the gastric mucosal lesion in PHG+BPI21 group was significantly attenuated, accompanied by the increase in HSP70 production and decrease in TNF-α level in the gastric mucosa.Heat treatment increased HSP70 production and decreased TNF-α concentration in the PHG rats, thus attenuating the gastric mucosal damage.CONCLUSION: HSP70 alleviates the gastric mucosal lesion induced by endotoxin in cirrhotic rats with PHG and decreases the concentration of TNF-α in gastric mucosa, indicating a protective role of HSP70 in the pathogenesis of gastric mucosal damage in PHG.     

叶用莴苣热激蛋白LsHsp70-1707基因的克隆及表达分析

为了解叶用莴苣热激蛋白LsHsp70-1707基因在高温下的作用机制,通过同源克隆及RACE技术克隆并获得叶用莴苣热激蛋白LsHsp70-1707基因全长cDNA序列,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析基因在不同叶用莴苣品种中的表达量差异。该基因全长2 400bp(KP258179),开放阅读框为2 106bp,编码701个氨基酸,与西瓜(AAC03416.1)、牵牛花(ABZ04081.1)、黄瓜(CAA52149.1)、菠菜(AAB91471.1)等HSP70蛋白高度同源。实时荧光定量PCR结果表明:高温处理时,该基因在热敏品种中表达没有明显增加,随着处理时间的增加甚至表现为下调,而在耐热品种中,其表达上调。成功克隆得到叶用莴苣热激蛋白LsHsp70-1707基因,热胁迫下该基因在不同品种中的表达有一定的差异性,推测该基因可能与叶用莴苣耐热性相关。     

牛分枝杆菌esat-6和mpb70-mpb83基因DNA疫苗的免疫效果

用PCR技术和重叠延伸剪接技术获得牛分枝杆菌esat-6基因和mpb70-mpb83融合基因，连接真核表达载体pcDNA3．1（＋），构建了重组质粒pCE6和pC70-83-E6。分4组免疫小鼠：pCE6组、pC70—83-E6组、pcDNA3．1（＋）和PBS对照组，采用间接EI。ISA法检测免疫小鼠血清特异性抗体水平，MTT法检测免疫小鼠脾淋巴细胞增殖情况和IFN—y分泌情况。结果表明，2重组质粒免疫组小鼠的血清抗体水平持续上升，而2对照组始终维持在较低水平，且pC70-83-E6组小鼠的抗体水平高于pCE6组。经PPD刺激后，pCE6组和pC70—83-E6组小鼠的SI值与2对照组均差异显著（P〈0．05），2重组质粒免疫组间差异不显著（P〉0．05）；2重组质粒免疫小鼠脾细胞产生的IFN—y均显著高于2对照组（P〈0．05），且pC70-83-E6组明显高于其他3组（P〈0．05）。证实本试验构建的2种牛分枝杆菌DNA疫苗可有效诱导实验动物产生体液免疫和细胞免疫应答。