化学去核卵母细胞为受体的小鼠体细胞核移植

卵母细胞的化学去核是采用干扰染色体分离或纺锤体正常功能的化学试剂,使其所有染色质通过纺锤丝牢固结合,并借助极体排出的惯性将所有染色质全部带出胞外,达到去核目的。目前以化学去核处理的MⅡ期卵母细胞为受体,已获得克隆小鼠。然而,第一次减数分裂期的小鼠卵母细胞经化学去核后,进行核移植还未见报道。与传统的机械去核相比,该方法对卵母细胞无机械损伤,完全是极体的自然排放;同时细胞质及其中核重编程相关因子损失量小;而且高效、省时,程序简单,所得的卵胞质或许更适合于供体细胞核的重编程。剪取超排小鼠的卵巢,以注射器刺破有腔卵泡后获得卵母细胞和卵丘细胞复合体,进行体外成熟培养。成熟培养5 h后去除卵丘细胞,挑选生发泡破裂的细胞顺序移入含脱羰秋水仙碱(DC,0.4μg/mL,2 h)和DC(0.4μg/L) 放线菌酮(CHX,50μg/mL)的M16培养液中继续培养,直到第一极体排出。去核卵胞质与胎儿成纤维细胞用植物凝集素(PHA,200μg/mL)粘合后,转入电击槽;施加1个5 V/mm、3μs交流电脉冲和2个92 V/mm、70μs直流电脉冲进行电融合。3 h后,以SrCl2激活6h,于四孔培养皿中制作的“孔中孔”(well of well)体外培养重构胚。试验重复3次,共计698个卵母细胞,获得的重构胚融合率和激活率分别为84.8%和93.6%;胚胎2-细胞发育率为24.7%,4-细胞率为6.74%;2-细胞期克隆胚移植假孕受体后,没有获得怀孕受体。试验分别以“血清饥饿”胎儿成纤维细胞、新鲜细胞和冷冻保存细胞为供体作核移植,结果表明,冷冻保存细胞的融合率(69.3%)与其余两组(80.6%和84.8%)呈显著差异(P<0.05);激活率、2-细胞和4-细胞发育率,则三组间差异不显著(P>0.05)。本研究将化学去核与无透明带技术相结合,完全丢弃了传统核移植的显微操作及其繁琐程序,属手工克隆,它的成功将会大大简化核移植程序,同时提高了核移植的生产力,最终提高核移植总效率。     

Boron-Calcium Synergically Alleviates Aluminum Toxicity in Wheat Plants (Triticum aestivum L.)

The effects of B and Ca treatments on root growth, nutrient localization and cell wall properties in wheat ( Triticum aestivum L.) plants with and without Al stress were investigated. Seedlings were grown hydroponically in a complete nutrient solution for 7 d and then treated with B (0, 40 μM), Ca (0, 2,500 μM), and Al (0, 100 μM) in a 500 μM CaCl₂ solution for 8 d. The cell wall materials (CWM) were extracted with a phenol: acetic acid: water (2:1:1 w/v/v) solution and used for subsequent pectin extraction with trans -1,2-diami-nocyclohexane- N,N,N,N -tetraacetic acid (CDTA) and Na₂CO₃ solutions. Boron, Ca, and B + Ca treatments enhanced root growth by 19.5, 15.2, and 27.2%, respectively, compared to the control (pH 4.5). Calcium and B+Ca treatments enhanced root growth with Al stress by 43 and 54%, respectively, while B did not exert any effect. The amounts of CWM and pectin per unit of root fresh weight increased by Al treatment, whereas the Ca and B+Ca treatments slightly reduced the contents of these components. Seventy-four percent of total B, 69% of total Ca, and 85% of total Al were located in the cell wall in the B, Ca, and Al treatments, respectively and 32% of total B, 33% of total Ca, and 33% of total Al were located in the CDTA-soluble and Na₂CO₃-soluble pectin fractions. A more conspicuous localization of B was observed in the presence of Al. Aluminum treatment markedly decreased the Ca content in the cell wall as well as pectin fractions, mainly in the case of the CDTA-soluble pectin fraction. Boron + Ca treatment decreased the Al content in the cell wall and pectin fractions compared to the Ca treatment alone in the presence of Al. It is concluded that the B+Ca treatment enhanced root growth and, B and Ca uptake, and helped to maintain a normal B and Ca metabolism in the cell walls even in the presence of Al.     

一种用于细胞培养的人血清制备方法

人血清可用于需要天然培养基的细胞培养。为探讨简便、有效的人血清制备方法,本实验研究通过取材,采血,血清的提取、鉴定和保存等操作步骤,分离出棕黄色、较粘稠的标准血清样品。本实验方法可供高校和科研机构参考使用。     

生物技术在柑橘砧木上的应用

本文概述了当前国内外柑橘砧木生物技术尤其是基因工程技术和体细胞杂交技术在柑橘砧木种质改良和品种选育的研究现状与进展,可为我国柑橘砧木资源的研究与开发利用提供参考。基因工程在柑橘育种中的应用起步较晚,但近年来发展迅速,通过运用农杆菌介导法、附体腋芽转化－离体扩繁鉴定法、DNA直接导入法等基因工程技术对培育新型抗性柑橘砧木品种取得了一定的成果;在体细胞杂种的运用方面,通过原生质体融合,获得了大量具优良性状的杂种体细胞,并建立了多个抗病杂交后代群。目前,柑橘砧木生物技术的研究方兴未艾,现代生物技术在柑橘砧木资源多样性研究与种质改良方面仍是今后的主攻方向。     

南方地区中国荷斯坦牛乳中体细胞数变化规律的研究

采用最小二乘法分析了南方地区某奶业集团2006年7个牛场2 063头中国荷斯坦牛22 377次乳中体细胞数(SCC)测定日记录,以揭示SCC的变化规律.结果表明乳中SCC为459.49×103士924.66×103个/mL,不同牛场、月份、泌乳月和胎次对乳中体细胞数的影响均达到极显著水平(P＜0.01),而产犊季节对乳中SCC的影响未达到显著水平(P＞0.05).SCC随着胎次和泌乳月的增加有升高的趋势.     

食源性致病菌单细胞观测与预测的研究进展

微生物在单细胞水平下的生长普遍具有随机性和变异性,同时低菌量污染食品所造成的危害风险亦不可忽视,因此食源性致病菌单细胞的生长观测及预测研究逐渐成为食品预测微生物学及食源性致病菌风险评估的研究热点。在分析现有相关文献的基础上,将目前主要的食源性致病菌单细胞生长观测研究分为间接推断和直接观测两类方法;同时对食源性致病菌单细胞生长预测的模型参数与建模过程进行概述,比较了传统预测微生物的决定模型与微生物单细胞的随机模型二者之间的区别,强调了单细胞生长模型需在随机建模的基础上开展,并通过个体建模方法进一步联系其与所在食品环境之间的关系。最后,分析了食源性致病菌单细胞生长观测与预测的现状,并展望了其未来与食品安全风险评估相结合的发展趋势。     

水平圆台式排种器型孔结构尺寸对囊种率影响的研究

在对新型水平圆台排种器研究基础上,从水平圆台式排种器的结构和工作原理出发,结合丸粒化种子尺寸分布的特点,采用可靠性理论对型孔结构和参数进行了研究,确定了型孔参数的模型,进一步通过试验确定了影响型孔囊种率的主要因素,最后通过试验数据分析确定了具有最佳效果的参数组合,即动盘倾角32°,型孔直径15mm,导种槽角度55°,导种槽高度为7mm,动盘转速为17r/min时囊种效果最好,为该类排种器的设计提供了借鉴和理论依据。     

鸡淋巴器官中肥大细胞异质性的研究

应用常规甲苯胺蓝（ＲＴＢ）、长时间甲苯胺蓝（ＬＴＢ）、阿利新蓝－藏花红（ＡＢ－Ｓ）、醛品红－阿利新蓝（ＡＦ－ＡＢ）、阿利新蓝－高碘酸雪夫氏反应（ＡＢ－ＰＡＳ）等组化染色法证实，在鸡胸腺、脾脏、腔上囊等淋巴器官的实质中存在大量的肥大细胞，不同器官中的肥大细胞各有其分布特点，并且在形态大小、异染性、颗粒的粘多糖成分、染色特性等方面具有异质性，表明鸡淋巴器官中的肥大细胞可能存在不同的亚型     

苜蓿细胞悬浮培养与耐受高浓度PEG变异体的筛选

本文对紫花苜蓿的细胞悬浮培养、悬浮细胞系的建立、离体辐射效应和高浓度ＰＥＧ耐受性变异体的筛透进行了研究。结果表明：１．高浓度的２，４．Ｄ（５～１０ｍｇ／Ｌ），低浓度的ＡＢＡ（０．１～２ｍｇ／Ｌ），高浓度的蔗糖（６％～９％），较高的离子强度，以及逐步缩短继代时间，均有利于胚性悬浮细胞系的快速建立。相反，细胞分裂素，高浓度的ＮＨ和ＧＡａ的存在，不利于悬浮系的建立。细胞分裂素（４ＰＵ３０，ＫＴ或ＢＡ）可促进细胞的团聚，不利于细胞的分散。此外，低浓度的２，４－Ｄ，４ＰＵ３０（或ＢＡ，ＫＴ）和ＡＢＡ的配合使用，在悬浮培养基中可形成大量的体细胞胚。２．辐射处理悬浮细胞的最适剂量为２０～６０Ｇｙ。３．未经改造的初期悬浮培养物远较悬浮细胞系对高水势敏感。４．胚性悬浮细胞系经２０Ｇｙ的γ射线处理，筛选出了对１５％ＰＥＧ水势（约－１１巴）耐受性的克隆６个，并获得了一批再生植株，从２０％ＰＥＧ（约－１５巴）筛选出１个抗性克隆。抗性细胞系对高浓度ＰＥＧ和ＮａＣｌ产生的水势在细胞水平表现出很强的抗性。     

固定化酵母细胞糖蜜酒精连续发酵的研究

本文报道采用海藻酸钙作载体固定酵母活细胞用于糖蜜酒精连续发酵的研究。结果表明:在发酵液中加人研制的微量 MG 稳定剂,可显著提高载体的稳定性。固定化酵母细胞可连续正常使用6个月以上。在温度30—33℃,pH4—5,糖浓度16％～19％(W/V)发酵条件下,每升固定化酵母细胞每小时可产酒精24～25g;固定化酵母细胞分批和连续发酵,分别比传统的游离酵母分批发酵效率提高24％和8倍以上。