牛病毒性腹泻—黏膜病病毒C24V株E0截短基因密码子优化及其在卡介苗中的表达

The protein encoded by E₀ gene is one of the major protective antigens of bovine viral diarrhea-mucosal disease virus (BVDV). E₀ gene is a candidate for developing genetic engineering vaccine of BVDV and it could not express in BCG, it has been shown that E₀ protein has RNase activity, and has a plurality of rare codons according to analyze the codon usage frequency of BCG. By truncating the gene and optimizing its codons, E₀ gene expressed in BCG successfully and its antigenic activity was detected, which laid the foundation for building bivalent genetic engineering vaccine to prevent tuberculosis and bovine viral diarrhea-mucosal disease at the same time.     

鬼针草不同溶媒提取物对耐药大肠杆菌抑菌效果初探

This paper researched antibacterial effect of different Bidens bipinnata L extracts against clinical ESBLs E.coli by means of micro-dilution assay and the present method of combining traditional Chinese herbs with western medicine in vitro. The results showed that it had good inhibitory effect under Bidens bipinnata L decoction, ethyl acetate extracts, acetone extracts and trichloromethane extracts in combination with antibiotic. And ethyl acetate extracts was the most efficient. Bidens bipinnata L decoction was the most widespread, and could reduce the MIC of different antibiotics.     

乙型脑炎病毒SA1444-2株E蛋白C端片段的克隆及原核表达

[目的]为进一步研制检测乙脑抗体试剂盒奠定了基础.[方法]以本实验室已构建的重组质粒pET-E(E为乙脑疫苗株SA14-14-2株E蛋白)为模板,利用PCR扩增乙型脑炎病毒E蛋白基因3'端部分片段,克隆入原核表达栽体pET-32a( ),转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE电泳分析表达产物.[结果]所表达的融合蛋白分子量约为38KD,表达产物以水溶形式存在,37℃,诱导4 h的诱导培养条件最佳,表达量约占菌体总蛋白的20%.表达产物经Ni-NTA亲和层析法纯化,获得了纯度较高的目的蛋白.ELISA检测表明,表达的蛋白能与猪乙脑病毒抗体血清发生特异性反应,具有很好的抗原性.[结论]基因工程表达的JEV E蛋白有望成为重要的实验室诊断抗原.     

重组大肠杆菌的高密度发酵放大工艺研究

在初步筛选获得性价比较好的大肠杆菌高密度发酵培养基的基础上,以表达溶菌酶基因的pcDNKLYZ重组质粒转化的大肠杆菌DH5α为模型,用150 L发酵罐进行工艺放大研究,通过对细菌生长密度(D600 nm值)、质粒产量的比较和分析,探讨用于重组质粒规模化生产的发酵工艺。结果表明:国产培养基中添加100 mL.L-1甘油、磷酸盐和硫酸盐后,重组菌的生长密度和质粒产量均与进口LB培养基接近或略高;收集的菌体分别于-70和-20℃保存,质粒提取和定量检测结果显示保存6周后质粒产量无明显变化;质粒提取和定量检测结果显示每克湿菌用5 mL溶液悬浮,可获得较高的质粒产量。     

襄樊市肉食品大肠杆菌污染状况的检测

采用国家标准法对抽样的肉类食品进行大肠杆菌的检测鉴定,结果表明：从襄樊市的几个大型农贸市场随机抽检的60个样品中,生鸡肉大肠杆菌检出率为30%,生猪肉50%,生牛肉20%,熟肉类20%。襄樊市肉类食品总体上大肠杆菌污染程度较轻,但猪肉类检出率较高,需引起有关部门的重视,特别是夏季,要加强监督检测,以防止出现大规模的食物中毒事件。     

壳聚糖酶解液对抗药性大肠杆菌的抑制作用

采用微波法从根霉菌丝体中提取壳聚糖,经纤维素酶非特异性降解得到其寡糖溶液。采用其中初步抑菌效果较好的COS3-2、COS4-2、COS4-3、COS4-4分别对氨苄青霉素抗性大肠杆菌进行抑菌实验,结果表明:壳聚糖纤维素酶解液COS3-2、COS4-2、COS4-3、COS4-4对抗药性大肠杆菌均有较好的抑制作用,其中酶解液COS3-2的抑菌活性最强,当浓度为2.5%时抑菌圈直径达到18.6 mm,最低抑菌浓度(minimal inhibiting concentration,MIC)为0.05%;壳聚糖酶解液的抑菌作用随着酶解液浓度的增加而增强,并且抑菌作用需要一定的环境,在pH值5.5～6.0范围内,对氨苄青霉素抗性大肠杆菌有很好地抑制作用,pH值过高抑菌作用减弱。     

逆转录病毒载体介导的猪瘟病毒E2基因在真核细胞中表达及动物免疫试验

利用DNA重组技术将猪瘟病毒(CSFV)石门株囊膜蛋白E2基因插入逆转录病毒载体pBABE-puro中构建成重组逆转录病毒载体pBABE-puro-E2,该重组逆转录病毒表达载体与pVSVg质粒经磷酸钙共转染法将其转入293GP细胞中包装逆转录病毒假病毒。用包装的假病毒感染SP2/0细胞,经嘌呤霉素筛选阳性细胞后进行流式细胞技术(FACS)分析,结果表明CSFVE2基因在SP2/0细胞膜上成功表达。将表达E2蛋白的SP2/0细胞腹腔免疫BALB/c小鼠,用流式细胞仪检测证明,成功诱导小鼠产生了抗E2蛋白的抗体。为下一步利用细胞免疫小鼠研制抗猪瘟病毒单克隆抗体打下基础。     

抗仔猪EWS和WSD的研究——维生素E对PWD和OD防制效果的试验观察

试验选用２８日龄断奶的大长杂种仔猪１１窝１００头，随机分为Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ组，每组２５头。Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ组从２８日龄至４５日龄分别在每千克日粮中添加维生素Ｅ１０ｍｇ，１５ｍｇ，２０ｍｇ。Ⅰ组对照，日粮中不添加维生素Ｅ，６０日龄结束试验。结果表明，分别饲喂每千克日粮中添加１０ｍｇ，１５ｍｇ和２０ｍｇ的Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ组ＰＷＤ和ＯＤ发病率比日粮中不添加维生素Ｅ的Ⅰ组分别降低２４％，３２％和２８％，死亡率分别降低８％，４％和８％，差异极显著（Ｐ＜０．０１）；日增重率分别提高１８．３４％，２０．７７％和１５．０７％，差异极显著（Ｐ＜０．０１）。     

杀球灵(Diclazuril)和麦杜拉霉素(Maduramycin)等四种聚醚类抗菌素对鸡巨形艾美尔球虫(E.maxima)药效的笼饲试验

对杀球灵和其它4种聚醚类抗菌素麦杜拉霉素,那拉菌素(Narasin),拉萨洛菌素(Lasalocid),莫能菌素(Monensin)的抗巨形艾美尔球虫效力进行了笼饲试验.重度感染情况下,和感染不给药对照组相比,5ppm麦杜拉霉素,80ppm那拉菌素,100ppm拉萨洛菌素和100ppm莫能菌素可防止鸡只死亡,改善增重,减轻肠道病变和减少卵囊数量.1ppm杀球灵组出现10%死亡,但是从增重和病变来看,鸡只仍然受到保护,粪便里也很少见到卵囊.对肠粘涂片的观察显示杀球灵明显抑制了巨形艾美尔球虫的有性生殖阶段,即配子生殖阶段的发育.从抗球虫指数来看,上述5种药对巨形艾美尔球虫的效力依次是拉萨洛菌素,麦杜拉霉素,杀球灵,那拉菌素和莫能菌素.     

伪狂犬病病毒gE囊膜糖蛋白主要抗原表位区基因的原核表达

参照GenBank上公布的伪狂犬病病毒gE基因序列设计1对引物,通过PCR方法扩增一段包含gE主要抗原表位编码区的564 bp的片段,扩增产物克隆于pMD18-T vector中,酶切后插入原核表达载体pET-32a的T7启动子下游,构建的原核表达质粒pET-gE在大肠杆菌BL21中获得了高效表达。SDS-PAGE结果显示:表达产物分子质量为38 ku,以包涵体的形式存在,表达产物用His亲和层析柱进行纯化。Western blotting分析表明:该蛋白能与标准阳性血清发生特异性反应。结果证明该表达产物具有生物学活性,可作为鉴别诊断的抗原。