DNA条形码技术在中药领域的应用

DNA条形码技术可对物种进行快速自动鉴定,具有鉴定准确、结果稳定、操作简便、适用广泛等特点,目前在中药领域应用较多。从DNA条形码技术在中药材鉴定、种植、流通、市场监管、中成药鉴定和药用植物种质资源调查等中药领域的多个方面进行综述,并探讨DNA条形码技术在中药领域的优势和不足,以期为DNA条形码技术在中药领域的研究提供新的思路。     

长白山杜鹃花基因组DNA提取及RAPD体系的建立

采用改良的CTAB法提取杜鹃花的基因组DNA,所得的DNA纯度高、质量好,可用于RAPD分析.筛选出的杜鹃花RAPD反应的最佳体系为25μL反应体系中包括模板DNA20～200ng.引物10pmol,dNTPs100μmol·L-1,TaqDNA聚合酶0.5U,Mg2 2.5 mmol·L-1,10xbuffer缓冲液2.5 mmol·-1,其余部分用无茵超纯水补充.PCR扩增程序为94℃预变性5 min;94℃变性1 min,37℃退火1min,72℃延伸2min,40次循环;72℃最终延伸7min.应用优化后的反应体系PCR扩增获得的RAPD指纹图谱带型清晰,重复性好,为长白山杜鹃花品种鉴定、分类的研究提供了一定基础.     

黄鳝线粒体DNA的提取及其酶切分析

用碱裂解法从黄鳝肝脏组织中提取线粒体DNA,并对提取的线粒体DNA纯度、完整性进行了检测.结果表明,其紫外吸收比值为OD26/280在1.72～1.96之间,纯度较高,琼脂糖凝胶电泳表明提取线粒体的完整性好;用EcoR Ⅰ和HindⅢ对黄鳝线粒体DNA进行酶切,用琼脂糖凝胶电泳检测,均能检测出两套不同的酶切片段,证明黄鳝线粒体DNA存在多态性.     

一种制备富含多糖丝状真菌基因组DNA的方法

采用改进CTAB法提取的红曲霉、镰刀菌和微小毛霉基因组DNA数量和质量都较为理想,DNA产量在90～130 μg·g-1湿菌体,大小均在21kb.4℃可保存4～6个月.用该方法提取的基因组DNA为PCR扩增的模板,扩增结果稳定、准确.分别用限制性内切酶SacⅠ、HindⅢ、BamHⅠ酶解红曲霉M34均能得到较为均一的完全酶切带.该方法快速、简便,成本低,适合富含色素和多糖的真菌的基因组DNA的提取.此外,还适合真菌分子育种等的筛选和样本量大的PCR检测.     

植物转基因沉默的机制及克服方法

植物转基因沉默可以发生在染色体DNA、转录和转录后3种不同的层次上,转录水平基因沉默机制涉及DNA甲基化、位置效应、重复序列和同源序列等的作用,转录后水平基因沉默机制常用RNA阈值模型、异常RNA模型、双链RNA模型和未成熟翻译终止模型等解释。使用去甲基化、控制外源基因的拷贝数及结合位点、利用MAR序列、优化使用增强子、启动子等手段可以解除部分转基因沉默。     

四种桉树青枯菌DNA提取方法及PCR检测灵敏度比较

以带有青枯菌Ralstonia solanacearum的桉树组织为材料,采用4种不同的提取方法抽提青枯菌DNA,同时利用青枯菌的特异性引物进行PCR扩增,比较了4种DNA的提取方法及PCR检测的灵敏度。结果表明,煮沸法和热裂解法操作相对简单,但检测灵敏度较低,检测限分别为104CFU/mL和103CFU/mL;简化提取法和试剂盒法检测效果较好,均可检测到102CFU/mL的青枯菌;简化提取法比试剂盒法操作更简单,检测成本低,具有更高的应用价值。     

凡纳滨对虾微卫星DNA的筛选及其特性的研究

采用小片段克隆法构建凡纳滨对虾的部分基因文库,用放射性同位素[y-^12P]ATP标记的（CA）15（AT）12（AG）12、（AAT）8、（AAG）8做探针筛选阳性克隆。共获得微卫星序列152个,其中二核苷酸为核心的微卫星序列：（AG）a〉（AC）a〉（AT）a,三核苷酸为核心的微卫星序列：（AAT）a〉（CAT）a〉（AAG）a应用引物设计软件primer3．0设计引物105对。选择合成10对理论上易出现影子带的引物,筛选后用31个凡纳滨对虾个体对这些引物进行了评估,结果10对引物中有8对引物能扩增出谱带,其中1对扩增产物出现影子带,1对扩增产物为单态．有6对扩增产物出现多态。     

DNA疫苗与多糖类免疫促进剂在对虾疾病控制上的应用研究进展

DNA疫苗作为第3代疫苗具有许多优点,其在水产养殖领域的应用前景广阔。多糖类免疫促进剂是一种能直接作用于免疫系统激活有关细胞的物质,它能够提高机体的免疫力,在虾的养殖领域中已得到应用。论文对DNA疫苗与多糖类免疫促进剂做了简要介绍,并对其在对虾疾病控制上的应用前景进行了展望。     

DNA直接导入法获得烟草新品系

为解决烟草栽培品种香气品质低下的问题,选用香料烟品种Ti245、高密度腺毛品种Ti1068、浓香型品系6251为供体,将三者总DNA混合后经花粉管通道导入烟草栽培品种K326;后代产生了广泛变异,经过连续3年的选育,获得了优良品系K809。与受体K326相比,K809田间农艺性状优良、叶片腺毛密度增加、香气物质含量大幅度提高,评吸结果表明香气品质得以改善;RAPD分子检测发现,K809含有来源于受体和供体的所有片段,一些片段仅与某供体特异同源,表明供体Ti245、Ti1068、6251的某些DNA片段在K809基因组中进行有效了整合,并且对烟叶的香气品质具有积极作用。     

刺参响应灿烂弧菌侵染的基因组DNA甲基化水平和转录组差异及其关联分析

为探讨病原菌胁迫下刺参(Apostichopus japonicus)基因组DNA甲基化水平和转录组表达的差异,本研究采用人工攻毒侵染胁迫,获得刺参化皮体壁组织,并以未攻毒组的健康体壁组织为对照,对刺参2种体壁组织进行全基因组甲基化测序(WGBS)和转录组高通量测序,解析刺参体壁基因组DNA甲基化差异,筛选响应病原胁迫的差异甲基化区域和差异表达基因。同时,通过基因组甲基化和转录组联合分析,筛选负相关关联基因,为解析刺参响应灿烂弧菌(Vibrio splendidus)侵染的分子机理提供基础数据。结果显示,刺参对照组和侵染组基因组总甲基化水平分别为(3.59±0.04)%和(3.87±0.27)%,侵染组甲基化水平显著升高;在发生甲基化的位点中,攻毒组和对照组的mCpG占比分别为83.06%和81.91%,mCpG为最主要的甲基化形式。本研究共筛选出差异甲基化区域(DMRs) 626 677个,注释到23 706个功能基因。转录组测序共检测到29 290个基因,筛选到差异表达基因496个,其中,上调基因214个,下调基因282个。在基因组甲基化与转录组的关联分析中,筛选到180个负相关关联基因,其中,差异甲基化区域位于启动子区域的负相关基因为60个。对负相关关联基因的GO和KEGG富集分析,筛选到相关通路和LRR、hsp20和CARD等关键基因。本研究将为解析刺参抗病的表观遗传调控机制提供数据,也为刺参抗病性状选育提供科学参考。