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81.
鸡痘病毒通用高效表达载体的构建及其初步应用 总被引:4,自引:0,他引:4
利用分子克隆技术对本室构建的高效鸡痘病毒表达载体 p1 1 S进行改造 ,在其人工合成禽痘病毒 ( FPV)强启动子 Ps的下游引入含 7个单一酶切位点的多克隆位点 ( MCS) ,构建了便于外源基因插入的通用性更强的高效单表达载体 p N1 1 S。然后将 FPV早晚期启动子 PE/ L 及其启动的鹅源新城疫病毒 NDV ZJ1株的 F基因一并插入 p N1 1 S中 ,使PE/ L 与 Ps反向串联 ,从而构建出 1个含 NDV ZJ1株 F基因的重组 FPV高效双表达载体 p N1 1 SEF,其 MCS可以用于插入其他外源基因。在此基础上 ,将 NDV ZJ1株的 HN基因插入 p N1 1 SEF的 Ps启动子下游的 MCS中 ,构建了共表达 NDV ZJ1株 F和 HN基因的重组 FPV双表达载体 p N1 1 SEFHN。将 p H1 1 SEFHN质粒 DNA与 FPV2 82 E4株共转染 CEF,得到共表达 NDV ZJ1株和 HN基因的重组 FPV,间接免疫荧光实验初步证明外源基因得到了较好的表达。表明所构建的通用高效 FPV表达载体有利于高效基因工程活载体疫苗的研制 ,具有广阔的应用前景 相似文献
82.
83.
将除去3'端跨膜区的猪瘟病毒E2基因亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBacHTb,获得重组质粒pFBHT-E2,转化进含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac,发生转座作用,经抗性及蓝白斑筛选得到含E2基因的重组载体质粒rBacmid-E2,以脂质体介导的方法将此重组载体质粒转染sf9昆虫细胞,获得重组病毒,命名为rvBac-E2.经SDS-PAGE和Western-blot及ELISA等方法检测,结果表明,此E2基因在昆虫细胞中正确表达,表达的蛋白能与猪瘟阳性血清发生特异性反应. 相似文献
84.
沈杰 《中国兽医寄生虫病》2004,12(3):59-60
1.3.1 制作原理 先选取载体,再将载体制成包裹驱杀虫药的稳定微粒悬液,当这种悬液被注射入动物皮下或肌肉以后,微粒将长期不断地释放药物。用作载体的条件如下:第一制成的含药微粒载药量大,以大于30%为好。包封率高,以大于80%为好(包封率是实际测定的每微粒中药量为理论上平均每微粒中药量的百分比)。第二既可生物降解, 相似文献
85.
细菌活载体疫苗的研究进展 总被引:4,自引:0,他引:4
随着重组DNA技术的发展和应用,基因工程疫苗的研究取得了快速的进展。其中,最有发展前景的研究领域之一,是以细菌为活载体的疫苗。细菌活载体疫苗的优点.可将保护性抗原在细菌的质粒、基因组的某些部位或细菌表面表达。 相似文献
86.
phyA基因的克隆及其新型表达载体的构建 总被引:2,自引:0,他引:2
直接以黑曲霉菌株F246基因组为模板,对植酸酶基因phyA的成熟肽(分子长度为1347bp)进行了PCR扩增,再将PCR产物克隆入pMD18-T质粒,经DNA测序鉴定正确后,亚克隆入表达载体pET30a^ 和pMG36e,成功构建了phyA基因2种新型表达载体。植酸酶phyA基因2种新型表达载体的构建,为进一步获得大量、高活性植酸酶以及研究和开发新型微生态制剂打下了基础。 相似文献
87.
对从含有鸡毒霉形体H3株TM-1基因的大肠埃希氏菌DH5α中提取的质粒,进行EcoR Ⅰ和Sα/Ⅰ双酶切,获得了大约为786bp的目的片段。将此片段与经EcoRⅠ和Sαl Ⅰ双酶切的线性原核表达载体pET-30a-1连接。转化宿主菌BL21(DE3),筛选阳性克隆。提取质粒,经酶切、PCR扩增和测序分析确证其插入正确,从而构建成了重组表达载体。阳性克隆用IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE电泳分析,证明其分子质量约为29ku;Western-blotting分析表明,该蛋白可被鸡毒霉形体阳性血清识别,具有生物学活性。 相似文献
88.
在饲料生产中,预混料是最核心的部分,预混料质量的好坏,直接影响到配合饲料的饲喂效果。为此,预混料设计者不但要使预混料营养价值全面合理,避免使用有害物质原料(尤其要注意矿物质中重金属含量),又要尽量减少使用虽无害但可能在加工、储存和使用过程中出现问题的原料。比如,氯化胆碱容易吸湿而造成预混料易结块、维生素和微量元素间易发生反应而造成维生素失效、微量元素易吸湿等。但是实际生产中又需要使用这些原料,因此如何控制预混料各原料间发生反应,使他们各自的生物利用率达到最佳,是提高预混料质量的一个重要环节。 相似文献
89.
应用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术,以随机引物单条或成对组合的方式对9株禽巴氏杆菌(PM)广西分离株和3个参考株的DNA进行了多态性分析。结果显示,在选用的20个引物中,有4对引物(4条引物成对组合)扩增的条带为1~16条,其长度在90~2600bp。相似指数分析显示,PM广西分离株GX2与GX4的相似指数最高,为0.97;GX7与B26T1200的相似指数最低,为0.21,C48—1标准强毒株与PM广西分离株间的相似指数为0.33~0.64。表明广西当地的流行株呈现多样性,与PM标准强毒株存在差异。 相似文献
90.