侧孢短芽孢杆菌碱性蛋白酶基因BLG4在枯草芽孢杆菌WB600中的高效表达

侧孢短芽孢杆菌G4菌株在侵染线虫的过程中可以分泌蛋白酶,降解线虫体壁,从而帮助细菌侵入宿主体内.在本文中,侧孢短芽孢杆菌的胞外蛋白酶BLG4基因经克隆后插入到改造后的枯草芽孢杆菌表达载体pWT22中,构建重组表达质粒pWT22-BLG4.构建成功的重组质粒通过化学转化法转入枯草芽孢杆菌蛋白酶缺失菌株WB6000中,转化...     

黄瓜枯萎病病原拮抗细菌DS-1菌株鉴定及其生防效果研究

采用平板对峙法,从日光温室连作黄瓜根际土壤中筛选出对黄瓜枯萎病病原菌（Fusarium oxysporum f. sp. cucumerinum）具有稳定拮抗作用的细菌菌株DS-1,通过形态观察、生理生化测定和16S rDNA序列分析对该菌株进行了鉴定,并研究了对黄瓜种子萌发的影响和对苗期枯萎病的生防效果。结果表明：菌株DS-1与已报道的Brevibacillus brevis 16S rDNA具有100%同源性,结合形态特征和生理生化特性,确定DS-1为短短芽孢杆菌。基因库中该菌株的序列登录号为EF108303。DS-1对黄瓜种子萌发具有促生作用,苗期防治枯萎病的效果显著,防效达84.92%。     

侧孢短芽孢杆菌S62-9抗菌肽基因的初步定位

侧孢短芽孢杆菌S62-9可以产生高效广谱抑菌活性的细菌肽,为了确定该抗菌肽基因的遗传定位,本研究采用质粒消除和质粒转化进行正反论证。结果发现,电击法消除S62-9菌株的野生质粒pBLS62后,其突变株抑菌活性消失,而且对S62-9细菌肽的敏感性大大增强;而野生质粒pBLS62导入没有抑菌活性的枯草芽孢杆菌Wb800中,转化子Z4产生了抑菌活性,而且RP-HPLC结果表明Z4表达的抗菌物质与原始菌株S62-9抗菌肽为同一产物。从质粒消除和质粒转化与由此带来的表观性状的关系上,可以推断,侧孢短芽孢杆菌S62-9细菌肽及其免疫相关基因位于质粒而不是染色体上。     

动物益生菌短短芽胞杆菌FJAT-1501-BPA制剂的制备及其益生特性评价

为优化短短芽胞杆菌FJAT-1501-BPA胶悬剂配方,获得性状稳定可长期贮存的菌剂,同时对其作为益生菌进行益生特性评价,本试验研究了不同稳定剂、pH、NaCl及防腐剂浓度对短短芽胞杆菌FJAT-1501-BPA发酵液保存特性的影响,并对其产芽孢率、耐热性、抗生素敏感性、人工胃肠液耐受性、胆盐耐受性等生物学特性进行评估。结果显示,添加4% NaCl、0.1‰柠檬酸钙、0.1‰双乙酸钠、0.1‰山梨酸钾、2.0‰黄原胶,调节pH为7,可作为短短芽胞杆菌FJAT-1501-BPA胶悬剂保存的参考条件。短短芽胞杆菌FJAT-1501-BPA能够抑制沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌3种动物肠道病原菌的生长,具有产孢率高、耐热、耐酸、耐胆盐的特点,可与链霉素、氨苄西林同时使用,益生效果良好。因此,短短芽胞杆菌FJAT-1501-BPA可作为益生菌菌株应用于畜牧生产。     

短短芽胞杆菌产抗菌物质——羟苯乙酯发酵培养基的优化

羟苯乙酯是短短芽胞杆菌FJAT-0809-GLX的主要抑菌活性物质,为提高该菌株发酵液中羟苯乙酯的产量,本研究采用响应面法对其发酵培养基成分进行优化。首先通过单因素试验,对发酵培养基中的碳源、氮源和无机盐进行了优化,进一步通过Plackett-Burman设计对培养基的影响因素进行筛选,最后采用最陡爬坡路径逼近最大响应区域,通过Box-Behnken设计,结合响应面分析,获得短短芽胞杆菌FJAT-0809-GLX发酵产生羟苯乙酯的最佳培养基配方。结果表明,培养基最佳碳源、氮源和无机盐分别为DL-苹果酸、蛋白胨和NaCl。影响显著的3个因素分别为DL-苹果酸、豆饼粉和NaCl。最佳培养基配方为可溶性淀粉8 g/L、DL-苹果酸29.68 g/L、豆饼粉25.18 g/L、蛋白胨2 g/L、NaCl 13.18 g/L,pH 7.0~7.2。采用此培养基配方进行短短芽胞杆菌FJAT-0809-GLX发酵,羟苯乙酯平均产量为8.15μg/mL,较基础发酵培养基提高了286.26%。     

Preparation of Brevibacillus brevis FJAT-1501-BPA and Its Evaluation as Probiotic

The composition of colloidal suspension agent of Brevibacillus brevis FJAT-1501-BPA was optimized to obtain the stable long-term storage agent,at the same time,the evaluation of this strain as a probiotic strain was conducted in this paper. The effects of different stabilizers,pH,NaCl and preservative concentrations on the preservation characteristics of this strain were studied. And spore yield,heat resistance,antibiotic sensitivity,artificial gastrointestinal tolerance,bile salt tolerance and other biological characteristics of Brevibacillus brevis FJAT-1501-BPA as a probiotic strain were evaluated. The results showed that the colloidal suspension agent of Brevibacillus brevis FJAT-1501-BPA was composed of 4% NaCl,0.1‰ calcium citrate,0.1‰ sodium diacetate,0.1‰ potassium sorbate and 2.0‰ xanthan gum with pH 7.Brevibacillus brevis FJAT-1501-BPA could inhibit the growth of Salmonella, Escherichia coli and Staphylococcus aureus. It had good tolerance to artificial gastric and intestinal juice, 0.3% pig bile salt, high spore production rate and strong heat resistance,and it could be used in conjunction with streptomycin and ampicillin. Therefore,Brevibacillus brevis FJAT-1501-BPA could be used as a probiotic strain in livestock production.     

转录调控因子AbrB对生防短短芽胞杆菌X23中抗生素edeines生物合成的影响

非核糖体类抗生素edeines是短短芽胞杆菌Brevibacillus brevis X23产生的主要抑菌物质，提高其产量有助于增加生防效果。通过全基因组测序及生物信息学分析挖掘短短芽胞杆菌X23的全局性调控因子，基于Red/ET同源重组技术构建温敏型敲除载体，通过双交换同源重组技术获得短短芽胞杆菌X23全局性转录负调控因子缺失的突变株，然后采用平板抑菌、液相色谱-质谱联用（HPLC-MS）和实时荧光定量PCR研究了全局性转录负调控因子敲除对短短芽胞杆菌X23不同生长时期发酵液的抑菌活性、edeines产量、ede操纵子转录水平的影响。从短短芽胞杆菌X23基因组中挖掘到了1个全局性转录负调控因子AbrB，敲除abrB基因后edeines生物合成基因簇操纵子的转录水平在生长前期显著提高，在发酵48 h后abrB突变株中edeine A和edeine B总产量比出发菌株提高了1.1倍。结果显示短短芽胞杆菌X23中AbrB是edeines生物合成过程中的负调控因子，敲除abrB提高了edeines的产量。     

短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)XDH菌株发酵培养基配方的研究

从泰山土壤中分离获得一株对多种动物病原细菌具有强烈拮抗作用的细菌—短短芽孢杆菌(Brevibacillus bre-vis)XDH。采用摇瓶培养法对发酵培养基配方进行了研究。通过单因素试验和均匀设计试验确定了XDH菌株发酵培养基最佳组成为:葡萄糖1.5%、黄豆饼粉3.0%、蛋白胨0.2%、NaC l 0.1%、(NH4)2SO40.5%、CaCO30.6%、MgSO40.6%。发酵液效价达到1456.8μg/mL,比基础培养基效价提高近10倍。     

粤北大宝山矿区土壤中抗铅菌株的筛选鉴定

采集大宝山矿区重金属污染的土壤样品,采用稀释涂布平板法对土壤样品中抗铅菌株的筛选,进一步在含不同铅浓度的培养液中进行驯化;通过对该菌株的形态观察、一系列生理生化试验、以及16S r DNA序列的比对研究进行鉴定;利用原子荧光光度计测定其对发酵液中铅的吸附能力。结果表明,分离获得的抗铅菌株在铅浓度为500 mg·L-1的培养液中长势良好,鉴定为类短短芽孢杆菌(Brevibacillus parabrevis),该菌株在含铅浓度为300mg·L-1的液体培养情况下,培养20 h左右,对发酵液中铅的去除效率高,高达30.27%。     

侧孢短芽孢杆菌BL-21抗菌蛋白的稳定性分析和分离纯化

为明确侧孢短芽孢杆菌BL-21(Brevibacillus laterosporus)产生的抗菌物质的类型,对其发酵液抗菌活性的稳定性进行分析,并在此基础上对有效成分进行分离纯化。采用杯碟法检测了B.laterosporus BL-21代谢产物的热稳定性、酸碱稳定性和蛋白酶稳定性;通过硫酸铵盐析、CM-Sepharose Fast Flow离子交换层析、凝胶过滤层析和SDS-PAGE进行了分离纯化。研究结果表明:B.laterosporus BL-21产生的抗菌物质在50℃以下稳定,在pH 7~8时抑菌效果最好,对蛋白酶敏感;发酵液中含有多组分抗菌物质,其中一个组分的分子量为20.1 k Da。B.laterosporus BL-21的发酵液能抑制烟草赤星病菌(Alternaria solani)和蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)的生长,具有一定的生防潜力和研究价值。