不同发酵方式和保存方法对3种生防菌活菌量的影响

为明确3株优良生防菌SC11、153、FO47在不同发酵方法和保存条件下活菌量变化规律,采用活菌平板计数法,测定3种生防菌12个月内活菌量变化及3种生防菌粉剂发酵初期和12月保存期后对茄子黄萎病的温室盆栽防效。结果表明,SC11、153和FO47菌粉于4℃密封保存12个月后活菌量与其初始活菌量差异不显著(P0.05);FO47菌粉在4℃保存12个月后活菌量高于初始活菌量(P0.05);3种生防菌发酵液初始活菌量较菌粉低1~2个数量级,在保存期60d内活菌量急剧下降,第6个月时接近于0。3种生防菌粉存放12个月后对茄子黄萎病仍保持较高的抑菌活性。说明,固体发酵菌粉可以得到较高数量级的初始活菌量,3种生防菌菌粉4℃密封保存12个月后活菌量及抑菌活性不变,且FO47菌粉活菌量略有上升;发酵液不利于生防菌的长期保存。     

环境因素对Bacillus amyloliquefaciens TF28在土壤中定殖的影响

为了明确生防菌株Bacillus amyloliquefaciens TF28在土壤中的定殖动态,采用活菌计数及菌株特异PCR验证相结合的方法,研究温度、含水量、pH、接种量、土壤类型和病原菌对其在离体土壤中定殖的影响。结果表明,适于菌株TF28定殖的温度、pH、含水量范围较广,在20～35℃,pH 4.5～8.6,含水量5%～35%范围内均能有效定殖;25℃、弱酸性和中性、15%含水量更利于其定殖;接种量和病原菌显著影响其定殖,接种量越大,定殖能力越强;病原菌在接种后14 d内显著促进其定殖;另外,土壤有机质质量分数高更利于其定殖。该研究为菌株TF28的推广应用提供了理论依据。     

Combination of hot water,Bacillus amyloliquefaciens HF-01 and sodium bicarbonate treatments to control postharvest decay of mandarin fruit

An antagonistic isolate Bacillus amyloliquefaciens HF-01, sodium bicarbonate (SBC) and hot water treatment (HW) were investigated individually and in combination against green and blue mold and sour rot caused by Penicillium digitatum, P. italicum and Geotrichum citri-aurantii respectively, in mandarin fruit. Populations of antagonists were stable in the presence of 1% or 2% SBC treatment, and spore germination of pathogens in potato dextrose broth was greatly controlled by the hot water treatment of 45 °C for 2 min. Individual application of sodium bicarbonate at low rates and hot water treatment, although reducing disease incidence after 8 weeks or 4 weeks of storage at 6 °C or 25 °C respectively, was not as effective as the fungicide treatment. The treatment comprising B. amyloliquefaciens combined with 2% SBC or/and HW (45 °C for 2 min) was as effective as the fungicide treatment and reduced decay to less than 80% compared to the control. B. amyloliquefaciens HF-01 alone or in combination with 2% SBC or/and HW significantly reduced postharvest decay without impairing fruit quality after storage at 25 °C for 4 weeks or at 6 °C for 8 weeks. These results suggest that the combination of B. amyloliquefaciens HF-01, SBC and HW could be a promising method for the control of postharvest decay on citrus while maintaining fruit quality after harvest.     

草鱼肠道细菌CD-17的鉴定和生防活性研究

为筛选新的生防菌种,采用平板对峙培养法测定分离自草鱼肠道细菌CD-17菌株对常见植物病原真菌的抑菌谱。通过菌株形态学扫描电镜观察、平板培养生理生化特性和分子辅助分类法确定其分类地位,同时对其活菌制剂(BCA)进行温室防效试验。结果表明,CD-17对供试植物病原真菌均有不同程度的抑制作用;温室控制条件下,BCA与炭疽病菌分生胞子悬浮液(GC)同时接种正常草莓叶片和接种GC 48h后再用BCA的控制效果分别为100%和55.68%;BCA与GC同时接种有微伤口的草莓叶片和接种GC 48h后再用BCA的控制效果分别仅为76.94%和37.82%。根据菌株形态观察、生理生化特征、16Sr DNA基因和gyrB基因序列比对分析,鉴定该菌株为解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。     

不同基质生物有机肥防控番茄土传青枯病及促生效果研究

本文旨在研究功能菌株解淀粉芽孢杆菌配合不同原料的有机肥，制备不同生物有机肥对番茄防控土传青枯病以及促生的效果研究，并考察不同生物有机肥对土壤养分及根际细菌群落的影响，获得能够有效防控番茄青枯病的生物有机肥。本研究以解淀粉芽孢杆菌T-5为功能菌株，分别配合秸秆有机肥及鸡粪有机肥，经二次发酵分别制得秸秆生物有机肥（BIO1）和鸡粪生物有机肥（BIO2）。于江苏省南京市一处青枯病多发的番茄大棚进行试验。考察不同施肥处理下番茄的发病情况、生长情况以及土壤理化性质，并利用高通量测序探究根际细菌群落的变化。两种生物有机肥均能显著降低番茄土传青枯病的发病率，且BIO1处理的防控效果最佳，使发病率降低了94.45%。两种生物有机肥均能显著促进番茄生长，增加了番茄地上部的生物量并提高了产量，但对于番茄果实品质并无显著提升。此外，施用BIO1可显著增加土壤有机质含量，BIO2则显著提高了土壤pH。土壤有机质与番茄的发病率呈负相关，与番茄地上部生物量和产量呈显著正相关关系。基于高通量测序结果，发现生物有机肥可显著提高根际细菌多样性，同时改变了细菌群落结构。防控效果最好的BIO1处理中，变形菌门相对丰度最高，放线菌门相对丰度最低，土壤硝态氮和pH与这两个门水平的细菌类群具有显著相关性。以解淀粉芽孢杆菌为功能菌株、秸秆为原料制备的秸秆生物有机肥可有效防控番茄土传青枯病，效果优于鸡粪生物有机肥。该生物有机肥还可显著促进番茄生长及产量提升，并通过调控根际细菌群落中变形菌门和放线菌门的相对丰度，提高土壤抑病能力，减少土传青枯病的发生。     

枯草芽孢杆菌生防菌株SEM-9根际定植及对根际土壤微生物多样性的影响

【目的】研究枯草芽孢杆菌生防菌株SEM-9在作物根际的定植规律及对根际土壤微生物多样性的影响。【方法】通过自然转化法对SEM-9菌株进行绿色荧光蛋白标记，利用倒置荧光显微镜观察该菌株在作物根际土壤、根表面及根系内组织的定植情况；并以土传病害土壤为试验对象，通过高通量测序初步分析SEM-9菌株处理后根际土壤中微生物多样性的变化。【结果】构建了稳定表达绿色荧光蛋白的重组菌株SEM-9-pGFP₂₂。荧光显微镜观察结果表明，SEM-9-pGFP₂₂重组菌株可以在根际土壤和根表面定植，但是无法在根内组织或细胞内定植。SEM-9菌液处理显著降低了黄瓜土传病害的发病率，提高了根际土壤真菌微生物的多样性。【结论】成功建立了SEM-9菌株的GFP标记方法，明确了该菌株的根际定植规律及对黄瓜土传病害的防治效果，为后期开发替代型微生物肥料奠定了基础。     

放线菌NF0919的鉴定及生防活性

为研发新的防治作物病害的生防药剂，用平板对峙培养法测定放线菌NF0919(分离自牛粪微生物群落)抑菌谱，并通过菌株形态学观察、培养特征、生理生化特性和分子分类法研究其分类地位，同时对其发酵产物粗提物(CE)进行室内毒力测定和田间防效试验。结果表明，放线菌NF0919对供试植物病原真菌均有不同程度的抑制作用，其中对葡萄炭疽病菌(Glomerella cingulata)、草莓炭疽病菌(Glomerella fragariae)、油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)、水稻纹枯病菌(Thanatephorus cucumeris)和苹果轮纹病菌(Botryosphaeria dothidea)的抑制作用较强，其抑菌圈半径均大于15 mm；CE对葡萄病原真菌的室内毒力和田间防治效果都显著优于化学对照药剂(多菌灵)；根据菌株形态观察、生理生化特征和16S rRNA基因序列比对分析，初步鉴定该菌株为黄色链霉菌(Streptomyces corchorusii)。     

绿木霉对币斑病菌的生长抑制作用及对镉的耐受性

木霉菌是具有广阔应用前景的生防制剂，可用于多种植物病害的防治，也可作为重金属的吸附剂。本研究从北京多种草地类型中分离到83株木霉菌株。本研究对8种木霉菌进行了拮抗币斑病菌的平皿试验，其中哈茨木霉152-22、脐孢木霉192-49和绿木霉192-45菌株利用其对空间和营养的竞争能力以及分泌的非挥发性和挥发性物质，显著抑制了币斑病菌的生长。此外，采用梯度试验(0~350 mg·L^-1)研究了这些菌株对高浓度镉胁迫的耐受性。随着镉浓度的增加，虽然三种木霉菌的生长均受到一定程度地抑制，但绿木霉192-45菌株表现出较强的镉耐受能力。这说明绿木霉菌对镉胁迫和币斑病菌均具有较强抗性。综上所述，绿木霉192-45可以在镉富集和币斑病频发的复合胁迫草地中发挥至关重要的作用。