福建5种重要木竹材细胞染色性能的研究

通过０．００５ｋｇ·ｌ－１、０．０１ｋｇ·ｌ－１两种浓度的酸性橙、直接兰、碱性绿三种染料对福建产五种重要的木竹材杉木、马尾松、米槠、木荷及毛竹切片进行染色试验和显微观察,阐明了三种染料对木竹材各种细胞的染色性,揭示了木竹材的染色机理、为进一步研究木材染色工艺打下基础     

玉米种子特异启动子GBSS Ⅰ的克隆及其功能分析

玉米子粒被认为是生产外源蛋白的理想载体,而利用种子（胚乳）特异性启动子是提高外源蛋白表达水平最简单的途径。从玉米基因组中克隆获得长为999 bp的GBSSⅠ基因启动子pGBSSⅠ,该序列不但含有CAAT-box等启动子基本元件,而且还包含光响应、激素调控、胁迫诱导和发育等多个顺式调控元件。利用该启动子构建植物表达载体pCBG-Gus,并经农杆菌介导法转化玉米幼胚,通过筛选和分化获得抗性植株。经Bar蛋白基因金标免疫试纸条和PCR检测确认获得转基因阳性玉米植株。对转基因玉米不同组织中Gus和内源GBSSⅠ的转录情况进行实时定量PCR分析和Gus组织化学染色分析,结果表明：2个基因的表达水平并不一致。在转录水平上,除了叶片（包括叶鞘）之外,其他被检组织中的Gus的表达均低于GBSSⅠ;在蛋白表达水平上,除了茎和根之外,其他组织中均可检测到程度不同的Gus活性表达,其中成熟种子（包括胚和胚乳）中Gus蛋白积累的水平最高。综上,玉米子粒特异启动子pGBSSⅠ是一个具有潜在应用价值的启动子,将为提升玉米胚乳中外源蛋白的表达量提供理论依据。     

滚动回交结合碘染色培育糯小麦新品种（系）的研究

为研究滚动回交结合花粉和胚乳碘染培育糯小麦品种的效果,给糯小麦的选育提供材料,以Caiwx作为wx基因的供体亲本,以扬麦9号、扬麦15、扬麦17等品种为轮回亲本,培育出6个糯小麦品系（扬糯615、扬糯09、扬糯6733、扬糯465、扬糯06、扬糯05G68）,并测定了它们的农艺性状、抗病性及粉质仪参数。结果表明,育成品系克服了供体亲本Caiwx株高过高、穗小、抽穗迟、成熟迟、熟相差等缺陷,同时保留了轮回亲本众多优良的数量性状,白粉病和赤霉病抗病性得到提高,每穗粒数、千粒重和产量提高。扬糯09、扬糯6733、扬糯465、 扬糯06和扬糯05G68品系的产量分别比对照品种扬麦11增产11.75%、1.99%、1.99%、0.6%、2.19%。其中扬糯05G68已进入江苏省区域试验和生产试验。糯小麦面粉吸水率明显提高,形成时间和断裂时间延长。研究结果证明,利用滚动回交结合碘染色鉴定方法培育产量、抗性、适应性达到大面积应用水平的糯小麦新品种是可行的。     

苎麻胚珠的酶解法提取及其整体染色透明技术

本文以悬铃叶苎麻雌花为试验材料,研究通过酶解方法分离出胚珠并对其进行整体染色透明的技术,目的在于提高整体透明技术在苎麻胚胎发育观察中的效果。结果表明:3%纤维素酶与1%果胶酶混合酶液提取胚珠的效果最好,采用苏木精染色后冬青油透明的方法观察效果较好。     

台盼蓝染色鉴定拟南芥sdl1突变体的细胞死亡

拟南芥突变体sdl1在光周期为16 h黑暗/8 h光照条件下生长叶片出现先萎蔫后白化现象,采用台盼蓝染色的方法研究萎蔫及白化苗的死亡情况,结果证实突变体sdl1萎蔫处发生细胞死亡,但细胞完全死亡（完全白化）后不能被染色,所以台盼蓝染色只能对突变体sdl1细胞死亡的早期进行鉴定。     

胶孢炭疽菌侵染橡胶树叶片染色方法的建立及显微观察

本研究建立了一种橡胶树叶片中胶孢炭疽菌的染色方法,通过显微观察明确胶孢炭疽菌在橡胶树叶片中的侵染结构,为橡胶树炭疽病的预测预报提供理论依据。在脱色剂（0.15%三氯乙酸乙醇溶液∶氯仿=5∶1）处理12 h,1%刚果红染色剂抽滤染色3 h的条件下,能清晰观察到胶孢炭疽菌在橡胶树叶片上的发育进程和侵染结构。结果表明,在28 ℃、100%相对湿度培养条件下,接种橡胶树淡绿期叶片2~6 h为分生孢子萌发高峰期,12 h后分生孢子萌发率大于85%;8~12 h为附着胞形成高峰期,接种12 h约75%的芽管顶端产生附着胞,少数附着胞中央部位开始形成侵染钉;24 h为侵染钉形成高峰期,同时分生孢子萌发形成多个芽管;36 h时附着胞顶端再次萌发产生次级附着胞,从而进一步侵染周围细胞,叶片出现零星病斑;48 h时芽管不断分支异化成菌丝并产生次级分生孢子,叶片出现大量典型的炭疽病病斑;72 h后菌丝在叶片表面纵横扩展,随机分支,逐步形成网状分布。随着菌丝的扩展,叶片组织发生一系列的病理变化,侵染部位组织出现褐色坏死病斑。本研究建立了一种着色效果好,简便易行,经济有效的橡胶树叶片中胶孢炭疽菌的染色方法,进一步明确了胶孢炭疽菌的侵染结构。     

大豆种皮特异性启动子的克隆及功能分析

采用PCR技术从大豆品种吉农17基因组DNA中分离得到大豆种皮特异性启动子片段SCSP,长度约为1268 bp.序列分析表明SCSP与报道序列同源性达97%以上.将其与GUS基因融合,构建植物表达载体pSCSP-GUS后,转化到EHA105根癌农杆菌中,通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法转化烟草(Nicotiana tabacum)NC89.转基因植株的GUS活性检测表明,仅能在种皮检测到GUS活性,而在茎、叶和花等其它组织中都未检测到GUS活性,证实SCSP片段具有种皮特异性表达功能.     

重组鸡痘病毒活疫苗X-gal染色空斑计数法的建立

建立了一种简易的携带LacZ基因重组鸡痘病毒(rFPV)活疫苗的X-gal染色空斑计数法。rFPV接种次代鸡胚成纤维细胞(CEF)72 h后,加2 mL/L戊二醛固定液室温固定15 min,再加500μg/mL X-gal染色液37℃过夜,倒置显微镜下直接计数蓝染空斑。染色空斑计数法的空斑数是不染色直接计数法的1.6~3.3倍。该方法在重组鸡痘病毒活疫苗研究及其工业化生产检验中具有较大的应用价值。     

猪丹毒病的防治措施

猪丹毒是猪丹毒杆菌引起猪的急性．热性传染病。临床上分急性败血型，亚急性疹块型及慢性关节炎．心内膜炎型。该病流行于世界各地．对养猪业危害很大。该菌是一种纤细的小杆菌．形直或略弯。革兰氏染色阳性。对自然环境的抵抗力较强，耐胃酸。对热的抵抗力较差．对一般消毒药敏感。猪，以架子猪最易感．呈散发或地方流行，常发生在夏秋炎热多雨季节。病猪和带菌猪是本病的传染源，通过病猪分泌物、排泄物及污染物等传染。健康猪经消化道、损伤皮肤粘膜或蚊蝇叮咬感染。     

1个新水稻组成型启动子的克隆与功能鉴定

根据基因芯片数据库和RT-PCR验证得到1个高活性的水稻组成型表达基因(TIGR Locus:LOC-Os07g34589),用PCR技术从籼稻品种明恢63基因组中克隆得到其上游启动子PSUI1,长度为1 941bp;将其与β-glucuronidase(GUS)报告基因融合构建植物表达载体DX2181b-PSUI1,利用玉米Ubiquitin启动子融合GUS报告基因构建表达载体DX2181b-PUbi作为对照,通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法将DX2181b-PSUI1和DX2181b-PUbi转化粳稻品种中花11。组织化学染色表明,含DX2181b-PSUI1的转基因植株中,GUS基因在幼苗期叶片、叶鞘、根,抽穗期叶片、叶鞘、茎秆、颖壳、雄蕊和成熟期的叶片、叶鞘、茎秆、胚、胚乳中均有表达,说明PSUI1为组成型启动子。对GUS表达活性进行定量分析表明,PSUI1启动子的活性约为玉米Ubiquitin启动子活性的1/3～1/2,但是PSUI1表现出了更好的表达稳定性。