地衣芽孢杆菌nju-1411-1降解羽毛角蛋白过程中含硫化合物的变化

利用自行筛选到的1株角蛋白降解细菌--地衣芽孢杆菌nju-1411-1发酵羽毛角蛋白,发酵2 d时角蛋白降解率、角蛋白酶活、生物量等指标就达到了最大值.降解率的变化和角蛋白酶活力的变化基本是一致的,并且酶的活力明显高出笔者所在实验室筛选的其他2株角蛋白降解菌--链霉菌B221和真菌C281.发酵过程中,硫元素以硫酸根、亚硫酸根、硫离子、硫代硫酸根、巯基化合物、二硫键化合物、半胱氨酸、胱氨酸以及S-磺酸半胱氨酸类物质等9种形态存在,没有检测到过硫化物、多硫化物、连多硫酸盐、芳基类硫代磺酸盐、烷基类硫代磺酸盐等其他形式的含硫化合物.其中硫酸根、亚硫酸根、硫代硫酸根和S-磺酸半胱氨酸类物质是主要形态,而其他5种物质含量相对较少.硫酸根和硫代硫酸根是硫元素代谢的终产物,其中硫酸根在自然状态下和氧化酶的作用下都可以产生,而硫代硫酸根是微生物代谢的产物.亚硫酸根和S-磺酸半胱氨酸类物质出现相互消长的关系,表明硫解作用的存在.发酵液的可溶性物质中,二硫键主要以胱氨酸的形式存在;除了少量的半胱氨酸以外,巯基还存在于多肽和寡肽中.     

与毛囊生长发育及羊毛品质相关基因的研究进展

羊绒是山羊的内层毛被,具有重要的经济价值。简要介绍了与毛囊生长发育及羊毛品质相关的基因及其研究进展,包括角蛋白家族基因、BMP及其介导的信号通路、Runx家族基因。     

高原型藏绵羊KAP 基因单核苷酸多态性分析

试验旨在寻找角蛋白辅助蛋白(keratin-associated proteins,KAP)基因与产毛性状相关的多态位点,为藏绵羊产毛性状的分子标记提供理论依据。采用PCR-SSCP技术对高原型藏绵羊角蛋白辅助蛋白基因家族中KAP 3.2、KAP 7基因部分序列和KAP 8基因外显子进行多态性分析。结果表明,3个基因座都存在多态性,均检测到AA、AB和BB 3种基因型。KAP 3.2基因以A等位基因为优势等位基因,AA基因型为优势等位基因型;KAP 7和KAP 8基因均以B等位基因为优势等位基因,BB基因型为优势等位基因型。高原型藏绵羊在KAP 3.2和KAP 8基因座达中度多态,而在KAP 7基因座为低度多态,在KAP 3.2和KAP 8位点上基因型频率处于Hardy-Weinberg非平衡状态。测序分析结果表明,KAP 3.2和KAP 8基因上分别存在1个C→T（271 bp）和1个T→C(1122 bp）的突变,均属于同义突变,KAP 7基因5′调控区存在1个T→C（102 bp）的突变。     

脱细胞羊膜与小肠黏膜下层对大鼠皮肤缺损修复中表皮干细胞的影响

目的 观察脱细胞羊膜(HAM)与小肠黏膜下层(SIS)促进大鼠皮肤缺损修复中表皮干细胞的作用.方法 SD大鼠24只,在两侧背部各做1个直径为1.8 cm圆形全层皮肤缺损.创面随机分为A组、B组和C组.A组HAM覆盖,B组SIS覆盖,C组纱布覆盖.在2周时处死动物取材,HE染色观察皮肤缺损修复情况.免疫组织化学染色检测角...     

兔角蛋白基因转化棉花及其纤维品质的改良

利用农杆菌介导转化法,将棉纤维特异表达启动子GAE6-3A驱动的兔角蛋白基因（MP）转入常规棉花“冀合713”中。PCR及Southern杂交分析表明,兔角蛋白基因已整合进棉花基因组。6个转基因株系中,4个为单拷贝插入,转基因后代的分离符合孟德尔3：1的1对基因的分离规律,外源基因在这些转基因后代中能稳定遗传。对这4个转基因株系T3代纤维检测结果表明,兔角蛋白基因对棉花纤维品质的影响主要是纤维强度的提高,其中3个株系纤维强度提高率达10％以上。     

鹤、鹳羽毛角蛋白氨基酸分析与应用

用高效液相色谱对9种鹤、鹳羽毛角蛋白的氨基酸组成与含量进行检测分析.结果表明,鹤类与鹳类的羽毛角蛋白均有各自较为相近的氨基酸构成比例,氨基酸组成的种类相同,仅在相对含量上有差异.与其他动物比较发现,不同科属的动物羽或毛角蛋白的氨基酸构成含量不同,具有特征性;相同科属的动物羽或毛角蛋白的氨基酸构成含量具有不同程度的相同或相近性.本文本着建立对野生动物无伤害性研究方法的宗旨,通过对鹤、鹳羽毛角蛋白的氨基酸组成分析探索该方法在野生动物分类、识别与鉴定上的可行性.     

角蛋白19片段单克隆抗体的制备及鉴定

为制备角蛋白19片段（CYFRA21-1）的单克隆抗体（mAb）,采用间接 ELISA 方法检测免疫小鼠的抗体效价,融合、筛选、克隆化单克隆抗体,将筛选得到的单克隆细胞株注入小鼠腹腔制备腹水,采用辛酸硫酸铵法、蛋白 A 柱纯化腹水抗体,以 SDS-PAGE 凝胶电泳、紫外分光光度法检测抗体纯度和浓度;利用鼠抗体亚型鉴定试剂盒对单克隆抗体进行亚型鉴定;采用阻断 ELISA 法测定 mAb 的敏感性（IC50）。结果表明,筛选获得4株分泌角蛋白19片段 mAb 的细胞株,将4株细胞株2F9、3H5、7C3、6F11注入小鼠腹腔,分别获得效价为2．56×105、5．12×105、5．12×105、2．56×105的单克隆抗体,经纯化,抗体蛋白浓度为12．43 mg／mL～16．00 mg／mL,为 IgG1型抗体,其 IC50在1．03 ng／mL～1．53 ng／mL 之间。说明获得了4株分泌高效价 CYFRA21-1单克隆抗体的细胞株,为建立 CYFRA21-1的检测试剂盒奠定了基础。     

一株羽毛角蛋白降解菌的产酶条件研究

角蛋白是一种抗性强和难降解的硬性蛋白,角蛋白酶具有专一降解天然角蛋白的功能,可以显著提高角蛋白的消化率。地衣芽孢菌株K-19具有很强的羽毛角蛋白分解能力,本试验对该菌株的发酵产酶条件进行了优化,最终得到摇瓶发酵产酶的最佳培养基和发酵条件为:羽毛粉1.5%、玉米粉1%、黄豆粉1%、NH4Cl0.05%、NaCl0.05%、K2HPO40.03%、KH2PO40.04%、MgCl2·6H2O0.01%、酵母膏0.01%,pH值7.5～8.0;250ml三角瓶里装发酵培养液30ml,37℃,接种量4%,200r/min摇瓶发酵72h,该菌株产角蛋白酶的酶活可达246.8U/ml,比初始酶活128U/ml提高了93%。     

鸡蛋壳膜角蛋白不同提取工艺的效果比较

为探索不同方法提取的鸡蛋壳膜角蛋白的得率及其结构的区别,为鸡蛋壳膜角蛋白工业化生产方法的选择提供理论依据,分别采用氢氧化钠碱法、过氧化氢氧化法、碱性蛋白酶法从鸡蛋壳膜中提取角蛋白,以其反应速率及产品角蛋白的得率、分子量、结构完整性等为指标,比较3种不同提取方法对鸡蛋壳膜角蛋白性质的影响。试验比较结果表明,角蛋白得率：氧化法(24.33%)＞碱法(19.31%)＞酶法(15.19%);反应速率：氢氧化钠碱法最快,过氧化氢氧化法次之,碱性蛋白酶法最慢;角蛋白分子量：碱性蛋白酶法(31～43 kDa)＞氢氧化钠碱法(14.4～20.1 kDa)＞过氧化氢氧化法(＜14.4 kDa);角蛋白结构：碱性蛋白酶法和氢氧化钠碱法提取的角蛋白,二级结构保存完整,过氧化氢氧化法提取的角蛋白二级结构受到了破坏。氢氧化钠碱法和碱性蛋白酶法可用于生产分子量高、二级结构完整的角蛋白产品,而过氧化氢氧化法是生产小分子肽类角蛋白产品较好的方法。     

羊驼皮肤角蛋白基因家族的表达

为了揭示羊驼皮肤结构发生和皮肤生理的分子机制,对构建的皮肤cDNA文库进行了大规模的测序,以对羊驼皮肤的结构基因--角蛋白基因家族进行基因水平的表达分析.通过构建羊驼皮肤cDNA文库的基因表达谱,发现了羊驼皮肤结构基因角蛋白的表达具有以下特点:keratin家族有7个家庭成员表达,其中上皮角蛋白类型I keratin10表达丰度最高,而上皮角蛋白类型Ⅱ表达丰度较低;毛干特异性上皮角蛋白以类型I keratin 25低表达为主;毛发角蛋白以类型I keratin 40低表达为主.这些基因的表达对维持羊驼皮肤及其衍生物(毛发)的正常生理起着重要的作用.