鸡lncRNA-MSTRG.15568.9及其预测靶基因的表达

试验旨在了解在鸡睾丸中高表达的1个长链非编码RNA （long non-coding RNA,lncRNA）及其预测靶基因的时空表达规律,研究二者在鸡弱精子症中的调控作用。根据弱精子症和正常北京油鸡公鸡睾丸转录组测序筛选到的1个高表达的lncRNA （MSTRG.15568.9）,采用顺式（cis）作用模式预测其潜在靶基因SPAG4（sperm-associated antigen 4）,进一步采用实时荧光定量PCR方法进行表达量分析。分别选择3只0、5、20、30、45、60周龄正常北京油鸡公鸡,检测MSTRG.15568.9与SPAG4基因在不同周龄公鸡睾丸中的表达量差异;选择30周龄3只正常公鸡,采集睾丸、肝脏和脾脏等8个部位组织样品,检测MSTRG.15568.9与SPAG4基因在不同组织间的表达规律;选择45周龄弱精子症公鸡和正常公鸡各3只,对比MSTRG.15568.9与SPAG4基因在睾丸的表达量差异。结果显示,MSTRG.15568.9与SPAG4存在明显的时空表达差异,且二者表达趋势基本一致。在不同周龄的鸡睾丸组织中,MSTRG.15568.9和SPAG4的表达趋势相近,MSTRG.15568.9在20周龄的表达量显著高于0、5、30、45、60周龄（P<0.05）,0和5周龄表达量显著低于20、30、45和60周龄（P<0.05）;SPAG4在45周龄表达量最高,其次是20周龄（P<0.05）。MSTRG.15568.9和SPAG4在睾丸和肝脏中的表达量均显著高于脾脏、肾脏等组织（P<0.05）;在正常睾丸组织中的表达量均显著高于弱精子症睾丸组织（P<0.05）。综上所述,MSTRG.15568.9与SPAG4基因具有较明显的组织表达特异性,且MSTRG.15568.9可能调控SPAG4基因的表达,参与精子发生与精子活力调控;但其具体作用机制需要进一步探索。本研究可为鉴定与鸡弱精子症调节机制相关的功能基因提供参考。     

中华蜜蜂保种(资源)分子生物学评价方法

中华蜜蜂是我国独特的东方蜜蜂遗传资源,具有非常重要的利用与保护价值。随着技术的发展,基于分子生物学的保种手段也逐渐展开。本文详细阐述了蜜蜂保种的重要性,介绍了适用于蜜蜂资源评价的常用遗传标记以及适用于遗传资源保护的评价指标,为中蜂资源保护与利用工作提供理论与实践指导。     

基于刚毛柽柳转录组测序的EST-SSR标记识别与开发

表达序列标签-简单序列重复(EST-SSR)能为植物适应环境提供分子基础.通过对5个不同样地刚毛柽柳(Tamarix hispida)进行转录组测序、组装及比较,共识别出该物种1187个多态性EST-SSR位点.其中,三核苷酸重复数目最多(54.42％),其次是二核苷酸重复(37.66％).分别有500、176和211...     

2016～2020年上海市松江区猪蓝耳病的监测与分析

为进一步了解上海市松江区猪群蓝耳病的流行态势及其免疫效果,笔者于2016～2020年间在松江区规模场、种养结合家庭农场共采集了5 728份猪血液样品,应用ELISA方法检测免疫抗体,同时应用荧光RT-PCR方法检测病毒核酸。结果显示:规模场、种养结合家庭农场猪蓝耳病免疫抗体的平均合格率为90.2%、95.1%,5年内除了2016年检测出猪蓝耳病病毒核酸有0.7%阳性率外,其余年份未检出。本研究表明,上海市松江区猪群蓝耳病的免疫情况整体良好。     

免疫亲和柱荧光光度法在检测黄曲霉素中的应用

自从 1960年美国发生十多万只火鸡因食用黄曲霉毒素污染的饲料而死亡的轰动事件后,食品、食品原料及饲料中是否有黄曲霉毒素污染,即成为世界各国密切关注的问题。从 70年代到 80年代,对黄曲霉素的限量要求一般是 10～ 20μ g/kg以下,而现在对黄曲霉素的限量要求达到 2～ 4μ g/kg以下甚至更低,限量指标提高了十倍以上,这在其它卫生限量指标方面是少有的。对黄曲霉毒素含量的限量越低,则表明对检测仪器和方法的要求越高。复杂的操作、大量的有机试剂、严格的防护条件、对操作者的损害、较长的耗时等等都不适应形势发展的要求。因此,…     

叶绿素荧光技术在筛选光合突变体中的应用

叶绿素荧光技术作为光合作用研究的手段,在光合突变体筛选中起到了重要作用。使用该技术,大量光合突变体得以分离,并且随着分子生物学的进展,突变基因也被陆续克隆,同时利用这一技术的筛选方法也随着人们对光合作用机制认识的深入,不断得到了改进,本研究就这方面进展做以综述。     

结核分枝杆菌复合群、副结核分枝杆菌和禽分枝杆菌禽亚种多重TaqMan荧光定量PCR方法的建立及初步应用

结核分枝杆菌复合群(MTBC)、包括结核分枝杆菌(MTB)、牛分枝杆菌(MB)、非洲分枝杆菌、田鼠分枝杆菌等;非结核分枝杆菌(NTM)中禽分枝杆菌(MA)是自然界常见的动物致病菌,包含4个亚种,分别为禽分枝杆菌禽亚种(MAA)、禽分枝杆菌人/猪亚种(MAH)、禽分枝杆菌副结核亚种/副结核分枝杆菌(MAP)和禽分枝杆菌森林土壤亚种(MAS)。为建立MTBC、MAP和MAA的多重荧光定量PCR检测方法,本研究基于MTBC、MAP和MAA的特异性基因devR、F57和IS901分别设计引物及探针,通过优化各反应条件,建立了一种可同时检测3种分枝杆菌的多重Taq Man荧光定量PCR方法。特异性试验结果显示,该方法对MTB、MB、MAP、MAA和MAS检测为阳性,对其他畜禽病原菌,包括MAH、13种NTM和7种非分枝杆菌检测结果均为阴性,特异性较强。敏感性试验结果显示,该方法对MB、MAP和MAA重组质粒标准品的检测限均为1.0拷贝/μL,敏感性较高;重复性试验结果显示,批内与批间重复性试验变异系数均小于2.5%,重复性较好。利用该方法检测体外模拟污染(MB、MAP和MAA菌液浓度分别为1.0...     

鹦鹉热衣原体荧光环介导等温扩增（LAMP）检测方法的建立

鹦鹉热衣原体(Chlamydia psittaci)是一种人兽共患病原体,能引起自然疫源性衣原体病,目前广泛分布于世界各地。本研究应用环介导等温扩增技术(LAMP),针对鹦鹉热衣原体23S RNA基因序列设计引物,并进行筛选以及敏感性和特异性试验,建立了鹦鹉热衣原体恒温荧光扩增方法。该方法在63℃恒温条件下1 h内即可显示结果,操作简单、快速,特异性强,灵敏度可达100拷贝/μL,且与流产衣原体、动物布鲁氏菌、牛结核分枝杆菌、沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌无交叉反应;用国产仪器可直接通过检测荧光信号判读结果,既增强了准确性,也避免了开盖污染产生假阳性;应用建立的LAMP方法对实验室保存的临床DNA样品进行检测,发现检测结果与QPCR相同。该方法的建立弥补了传统检测技术的不足,为实现鹦鹉热衣原体的现场快速诊断提供了技术支持。     

脂质体转染胚盘细胞将外源质粒pEGFP-C2导入鹌鹑胚的研究

运用脂质体转染第Ⅹ期胚盘细胞的方法将外源质粒pEGFP C2经脂质体包裹后注射到鹌鹑种蛋Ⅹ期胚盘下腔,孵化种蛋.提取孵化6d的鹌鹑胚基因组DNA,进行PCR检测,嵌合体阳性率为84％,证实外源基因在胚胎中的表达.对孵化至出壳的G0代鹌鹑组织进行DNA提取并PCR分析,以及组织切片荧光检测,证实外源基因在G0代鹌鹑组织中成功表达.结果表明脂质体转染胚盘细胞是一种制备转基因鹌鹑行之有效的方法.