牛GlyCAM1基因遗传多态性的研究

摘要：以中国荷斯坦牛、鲁西黄牛、渤海黑牛为研究对象,利用CRS-PCR、PCR-SSCP及DNA测序技术检测了GlyCAM1基因的遗传多态性。结果表明：本研究首次发现在牛GlyCAM1基因外显子3的第2081（A/C）和内含子3的2417（C/T）位点存在突变,两位点在3个牛群中的等位基因频率A/B分别为0.7525/0.2475、0.6112/0.3888、0.3375/0.6625; 0.9046/0.0954、0.8383/0.1617、0.7875/0.2125;经过χ2适合性检验, 3种牛群在内含子3的突变达到Hardy-Weinberg平衡状态（P>0.05）,在外显子3鲁西黄牛和渤海黑牛达到Hardy-Weinberg平衡状态（P>0.05）,但中国荷斯坦牛的突变在此位点未达到Hardy-Weinberg平衡状态（P<0.05）。     

黑穗醋栗果实超声波降解多糖的结构及抗糖基化活性

为了充分利用黑穗醋栗果实中的多糖资源,该文对水提醇沉,大孔树脂纯化制得黑穗醋栗果实多糖进行超声波降解,并对分离纯化后得到的低分子量多糖的理化性质、结构特征和抗糖基化反应活性进行了研究。利用葡聚糖凝胶Sephadex G-100对降解多糖进行分离纯化,高效液相色谱法测定分子量,气相色谱法测定单糖组成,红外光谱、紫外光谱、刚果红试验和电镜扫描初步表征多糖结构。结果表明:黑穗醋栗果实降解多糖(BCP I)纯度为83.88%±0.76%;重均分子量为235 955 Da;BCP I为酸性杂多糖,单糖组成及物质量比为:半乳糖醛酸:鼠李糖:阿拉伯糖:甘露糖:葡萄糖:半乳糖=2.31:1.11:3.14:0.34:0.36:1.00。BCP I具有多糖的特征吸收峰,不含多酚、蛋白质和核酸;不具有三股螺旋结构,呈现片状不规则的形态。抗糖基化活性测定结果表明BCP I对糖基化反应3个阶段(Amadori产物形成阶段、二羰基化合物形成阶段和糖基化终产物形成阶段)产物的形成均表现出良好的抑制作用,抑制率随浓度与时间的增加而增大。最大抑制率分别为49.55%±0.79%,41.82%±0.72%和42.01%±0.13%,均高于对照氨基胍。研究结果可为后续深入探讨黑穗醋栗果实多糖结构与降血糖活性之间的构效关系提供理论基础。     

植物分子农业研究中的问题与策略

植物分子农业是一个新兴的产业,人们对此很是关注。目前,植物分子农业的发展仍然有许多的限制因素。如蛋白产量低、下游加工困难、蛋白产品的异质性等等。研究人员正致力于对这些问题的研究,提出了许多技术方案。这些问题的解决,将使植物分子农业的发展进入一个新阶段。     

桃金娘果实不溶性膳食纤维理化特征及其抗糖基化性能研究

分别采用水法和酶法改性提取制备桃金娘果实中不溶性膳食纤维(IDF),使用扫描电镜(SEM)、红外光谱(FT-IR)、X射线衍射(XRD)等方法表征其理化特性,并评估桃金娘IDF在蛋白糖基化各阶段抑制活性及其对晚期糖基化终末产物(AGE)的吸附性能。研究结果表明：水法提取IDF(WIDF)中水分、脂肪、蛋白质及灰分含量更高。酶法改性提取桃金娘IDF(EIDF)得率为67.43%,低于水法提取。2种方法制备的IDF官能团相似,但EIDF结晶度更低,为29.32%,EIDF的表面粗糙、结构松散,并伴有孔洞。当EIDF的质量浓度为2 g/L时,糖基化体系中果糖胺及羰基分别为(1.98±0.25) mmol/L和(21.75±1.17)μmol/g,β-淀粉样蛋白荧光强度(5.26±0.14)×10⁶,对AGE的抑制率为(18.15±0.73)%,EIDF抗糖基化能力优于WIDF。当EIDF质量浓度为10 g/L时,可吸附33.28%的AGE。     

小麦ArfGAP基因的克隆、半定量RT-PCR分析及原核表达

为明确小麦ArfGAP基因在非生物胁迫中所行使的功能,采用电子克隆技术分离普通小麦ArfGAP基因后对其在不同非生物胁迫下的表达特性进行了分析,并在大肠杆菌中表达了该基因。结果表明,从扬麦18号中克隆得到的TaArfGAP基因ORF全长为2 121bp。生物信息学分析表明,TaArfGAP蛋白氨基端方向存在一个典型的ArfGAP蛋白结构域,在亲缘关系上与山羊草、乌拉尔图小麦和短柄草较近,而与甘蓝等作物关系较远。半定量RT-PCR分析表明,TaArfGAP基因在干旱、PEG和NaCl胁迫下显著上调表达,但在高温条件下则显著下调表达。SDS-PAGE检测结果表明,IPTG终浓度为0.8~1.0mmol·L-1、诱导温度为24℃及诱导时间为10h时,在分子量大小为81kD左右可以得到较大的可溶性表达蛋白量,且与预期结果一致,说明TaArfGAP基因在原核表达体系中成功表达。     

罗非鱼HSP70(tHSP70)蛋白的生物信息学分析、真核表达及质谱鉴定

运用生物信息学技术分析罗非鱼热休克蛋白70(tilapia heat shock protein,tHSP70)的理化特性、糖基化位点、跨膜区域、蛋白的细胞定位及信号肽与虹鳟等其他动物HSP70的相似性,以人工合成cDNA为模板,通过聚合酶链式反应扩增其完整CDS,并将此DNA片段与真核表达载体pGAPZa-A连接,构建pGAPZa-HSP70表达质粒,在毕赤酵母GS115中表达tHSP70蛋白,对表达上清液进行SDS-PAGE及Western-blotting分析后,采用Ni²⁺IDA层析脱盐纯化目的蛋白,并对所表达的蛋白进行糖基化PAS染色鉴定。对表达的蛋白进行SDS-PAGE后,将所获得的非预定大小(约100 ku)条带进行电离飞行时间质谱鉴定,并确定其蛋白种类。结果表明:tHSP70所含氨基酸数量为640,分子量为70 274.5 u,等电点为5.49。在哺乳动物网织红细胞(体外)的半衰期为30 h,在酵母内半衰期大于20 h,而在大肠杆菌内的半衰期也大于10 h,不稳定指数为36.64,脂肪族指数为85.58。可能分别含有6个N-和O-糖基化位点,所克隆tHSP70基因与目的基因完整编码区序列完全一致,所构建的pGAPZa-HSP70质粒能在GS115中成功表达,诱导表达上清液经SDS-PAGE及Western-blotting分析后发现,除70 ku目的蛋白外,还出现一条100 ku条带。经糖基化PAS染色证明,此100 ku蛋白可能是HSP70糖基化的结果,且能被人的兔抗HSP70抗体识别,质谱鉴定证明该条带即是tHSP70蛋白。本研究所表达tHSP70蛋白为后续罗非鱼细胞学及抗原提呈等免疫学研究奠定了基础。     

糖基化反应改善大豆抗原蛋白功能特性的研究进展

大豆含有丰富的营养成分,被广泛应用于食品和饲料行业,但大豆中的抗原蛋白对人和动物有一定的致敏作用而不利于吸收和利用,有时甚至导致幼龄动物的死亡。因而改善大豆抗原蛋白功能特性及去除抗原蛋白的致敏性便成为了研究的热点。该文围绕蛋白质糖基化方法可安全有效的改善蛋白质功能性质这一特性,综述了糖基化方法对大豆抗原蛋白功能特性影响的相关研究,以期对大豆抗原蛋白的后续深入研究提供理论参考。     

中国荷斯坦牛GlyCAM1基因遗传多态性与乳房炎关联性分析

以273头中国荷斯坦牛为研究对象,利用CRS-PCR、PCR-SSCP及DNA测序技术检测糖基化依赖细胞粘附分子1（GlyCAM1）基因外显子3、内含子3的遗传多态性。结果表明：GlyCAM1基因分别在外显子3和内含子3的第2081（A/C）、2417（C/T）位存在突变,两位点在牛群中的等位基因频率A/B分别为0.752 5/0.2475,0.904 6/0.095 4;经χ^2适合性检验,
中国荷斯坦牛群2417位点的突变达到Hardy-Weinberg平衡状态（P〉0.05）,但2081位点的突变未达到Hardy-Weinberg平衡状态（P〈0.05）。采用最小二乘法拟合线性模型将该基因座不同基因型与奶牛乳房炎进行了关联分析,结果表明：胎次效应（P〈0.01）、场效应（P〈0.01）和泌乳月（P〈0.05）对乳房炎的影响较大。2081位基因型效应对SCCS的影响达到了显著水平（P〈0.05）,且AA基因型个体的SCS显著低于AB和BB基因型个体（P〈0.05）。     

人参UGT基因家族功能研究进展

人参(Panax ginseng)作为一种具有良好药理活性的药用植物,一直受到广泛关注,而其能够发挥药理活性的部分主要是人参皂苷,主要包括齐墩果烷型和达玛烷型.据研究表明,人参皂苷下游生物合成途径最后一步离不开糖基转移酶的催化过程.因其主要以UDP-糖作为供体分子,所以称之为UDP-糖基转移酶,即UGT.本文结合前人的...     

板蓝根饮片糖基化蛋白纳米颗粒的构建与表征

从板蓝根饮片中分离出糖基化蛋白,体外构建纳米颗粒,并对所形成胶体的理化性质和生物活性进行表征。经SDS-PAGE鉴定板蓝根饮片粗提液中存在3个主要的糖基化蛋白,用这些蛋白构建的纳米颗粒的粒径约为50 nm。MDCK细胞试验表明,蛋白纳米颗粒具有较强的抗病毒能力。