石斑鱼的研究进展

通过对石斑鱼当前的繁育、养殖模式及技术、疾病防治、分子水平等研究现状进行综述,发现石斑鱼作为我国南方沿海快速发展的新兴海洋鱼类,拥有广阔的发展前景,但苗种繁育、养殖病害、饲料、养殖方式等4个突出问题严重制约石斑鱼产业的快速发展,因此建议在苗种繁育方面要重点研究生物饵料的稳定培养技术,解决苗种繁育早期活饵供应不足的问题;在养殖病害方面既要加强研发高效疫苗的力度,又要推广“防重于治”的观念;在饲料问题方面应着力探索鱼粉的替代植物蛋白,进行低碳养殖;在养殖方式方面则应着力推广深海网箱养殖和工厂化循环水高密度养殖模式,提升养殖效率,拓展潜在养殖空间,以期促进石斑鱼产业的快速发展.     

Dmrt 基因在斜带石斑鱼胚胎发育不同阶段的表达分析

【目的】对斜带石斑鱼（Epinephelus coioides）胚胎发育过程及 Dmrts 基因在此过程的表达情况进 行研究,为以后深入研究 Dmrts 基因在石斑鱼中的功能提供基础。【方法】用自然产卵方式取得受精卵在室内 恒温（24±0.5℃）、静水中孵化,在盐度 31.0 的海水中培育,整个胚胎发育过程历时约 29 h 50 min,之后进入 胚后发育阶段。利用光学显微镜观察斜带石斑鱼胚胎发育过程,分别取分裂期、囊胚期、原肠期、神经胚期、 器官形成期、初孵仔鱼期的胚胎保存于 RNAlater 中且每组 5 个平行。【结果】通过荧光定量分析 Dmrt 在不同 胚胎发育时期的相对表达量,结果表明,斜带石斑鱼 Dmrt 基因在胚胎发育过程中,都从卵裂期开始表达。其 中 Ecdmrt1（E. coioides Dmrt1）基因在囊胚期表达水平达到峰值,卵裂期和初孵仔鱼期表达量较低,Ecdmrt1 基 因在囊胚期表达是分裂期的 5.4 倍。Ecdmrt2（E. coioides Dmrt2） 基因在胚胎初期相对表达量比较平稳,而在神 经胚期表达量显著上升,是分裂期的 9.2 倍;Ecdmrt2 基因在初孵仔鱼中表达水平最高,是分裂期的 17.6 倍。 Ecdmrt2b 基因在胚胎发育过程中表达量逐渐增加,在器官形成期表达量达到峰值（P ＜ 0.05）,在初孵仔鱼中 表达水平又下降。Ecdmrt3（E. coioides Dmrt3）基因在胚胎发育初期表达量相对较低,在器官形成期表达量显著 上升,是分裂期 7.1 倍,在初孵仔鱼中表达量达到峰值。【结论】Ecdmrt 基因在胚胎发育过程中均从卵裂期开 始表达,且可能参与胚胎的组织器官发育及仔鱼发育生长。     

饵料中蛋白质、糖类、脂类对点带石斑鱼生长的影响

采用均匀设计U5(53)法研究了饵料中蛋白质(X1)、糖类(X2)、脂类(X3)对点带石斑鱼生长的影响。试验进行了56d。对增重率(Y1)、特定生长率(Y2)、饵料系数(Y3)做线性回归分析,得出增重率的回归方程为:Y1=-128.392+26.4063X3+0.0252005X12-1.11842X3(2R2=0.9672),特定生长率的回归方程为:Y2=-1.13695+0.280137X3+0.000250155X12-0.011822X3(2R2=0.9617),饵料系数的回归方程为:Y3=3.42262-0.0335425X2-0.0557297X3-0.00046018X12(R2=0.9860)。Y1max=106.502时,X1=56、X3=11.805;Y2max=1.307时,X1=56、X3=11.848;Y3min=0.73时,X1=56、X2=14、X3=14。糖类在Y1、Y2两个回归模型中被剔除。在糖类含量固定为6.00%的情况下,根据特定生长率的等值线图得出生产中饵料中蛋白质、脂类最适含量分别为48.30%和11.85%。     

鞍带石斑鱼繁育群体遗传多样性分析

鞍带石斑鱼作为最大型的石斑鱼,生长速度快,有明显的生长优势,在石斑鱼的产业发展中起到举足轻重的作用。为了解人工养殖和选育活动对鞍带石斑鱼遗传多样性的影响,本文采用微卫星分子标记技术,对广东、海南和福建三个省份共五个代表性采集点的鞍带石斑鱼繁育群体的遗传变异信息进行了研究。群体内遗传多样性分析显示,5个群体等位基因(Na)的平均数目为7.326(6.375-8.380),观测杂合度(Ho)平均值为0.711(0.625-0.775),期望杂合度(He)平均值为0.705(0.684-0.734),多态信息含量(PIC)平均值为0.659(0.633-0.693)。其中,来自福建厦门翔安区的鞍带石斑鱼繁育群体遗传多样性最高。分子方差分析(AMOVA)结果显示,5.36%的遗传变异来自群体间,95.45%来自所有个体间。群体间遗传分化指数(Fst)及遗传距离结果显示,GC和CP群体聚为一支,再与AT群体聚为一支,再与XA群体距为一支,HL群体为独立一支。通过系统进化树分析显示,鞍带石斑鱼繁育群体交叉在一起,没有形成明显的地理格局分布。总而言之,这三省五地的鞍带石斑鱼繁育群体遗传多样性较高,没有明显的驯化迹象。整体研究表明,鞍带石斑鱼繁育群体仍具有较高的遗传多样性,品种受亲本近交影响而出现衰退的可能性不高,人工繁育技术的不完善及养殖管理不规范可能是导致品种病害频发及养殖成活率低的原因。本研究为鞍带石斑鱼种质评价和人工选育提供理论依据。     

赤点石斑鱼神经坏死病毒MCP基因原核表达条件优化

[目的]优化赤点石斑鱼神经坏死病毒的主衣壳蛋白（MCP）基因的原核表达条件。[方法]采用RT-PCR技术扩增出赤点石斑鱼神经坏死病毒MCP基因,构建重组表达载体pRSETA-MCP,以其转化大肠杆菌BL21（DE3）plysS,在不同培养基、温度、pH值条件下进行诱导表达。[结果]重组菌在SOB和LB培养基、pH值7.0、37℃条件下表达量最高,所得的融合蛋白分子量约为44.5 kD。[结论]该研究为RGNNV-MCP疫苗研制奠定了基础。     

3月龄斜带石斑鱼形态性状对体质量的影响

为明确斜带石斑鱼形态性状与体质量的相互关系,对3月龄斜带石斑鱼体质量、头长、躯干长、体长、全长、体高、体宽、眼间距、眼径、吻长、尾柄高、尾柄长等12个性状的测量数据进行多元分析。结果显示,斜带石斑鱼各形态性状间的相关系数达极显著水平(P0.01);通径分析结果表明,体长、体高、体宽和眼间距对体质量的通径系数达极显著水平(P0.01),其中,体长的直接作用最大,体高、体宽和眼间距主要通过体长间接影响体质量,这4个性状对体质量的共同决定系数之和为0.954。可见,体长、体高、体宽和眼间距是影响3月龄斜带石斑鱼体质量的主要性状。     

饲料蛋白中添加虾蛋白肽对珍珠龙胆石斑鱼幼鱼生长性能和抗氧化指标的影响

为研究两种蛋白水平下添加虾蛋白肽对珍珠龙胆石斑鱼幼鱼生长性能和抗氧化指标的影响,设计6种饲料,以440、480 g/kg两种饲料蛋白与0、10和20 g/kg 3种虾蛋白肽添加量配制。结果显示,相同蛋白水平下,石斑鱼的终末均重和增重率均随着虾蛋白肽水平的上升而先上升后下降,10 g/kg虾蛋白肽组显著高于0、20 g/kg虾蛋白肽组;虾蛋白肽添加量相同时,480 g/kg饲料蛋白组显著高于440 g/kg饲料蛋白组。蛋白质效率、肌肉粗蛋白和粗脂肪含量、血清AST和ALT活力、肝脏CAT和T-AOC活力的变化规律与增重率类似。饵料系数、血糖含量和肝脏MDA含量的变化规律则与之相反。试验结果表明,在不同蛋白水平的饲料中添加虾蛋白肽均能促进珍珠龙胆石斑鱼幼鱼的生长,并提高其抗氧化能力,但添加量过高会产生抑制作用,因此,虾蛋白肽适宜添加量为10 g/kg。     

饲料牛磺酸水平对不同生长阶段斜带石斑鱼幼鱼生长性能和体成分的影响

本试验旨在研究饲料牛磺酸水平对不同生长阶段斜带石斑鱼幼鱼生长性能和体成分的影响。以酪蛋白和明胶为蛋白质源,配制牛磺酸水平分别为0(D1)、0.5%(D2)、1.0%(D3)和1.5%(D4)的试验饲料。将初始体重为(13.85±0.25)g斜带石斑鱼幼鱼随机分为4组,每组4个水族箱(体积为120 L),每箱放养25尾。试验鱼每天投喂饲料2次至表观饱食,养殖周期84d,分别在饲喂的第28、56和84天称重、取样。试验第1~28天为第1个生长阶段,第29~56天为第2个生长阶段,第57~84天为第3个生长阶段。结果表明:在每个生长阶段下,牛磺酸添加组(D2、D3和D4组)试验鱼的增重率、特定生长率、摄食率和饲料效率均显著高于未添加牛磺酸组(D1组)(P0.05),且D3组试验鱼的增重率显著高于其他牛磺酸添加组(第3个生长阶段的D4组除外)(P0.05)。在同一饲料牛磺酸水平下,第1个生长阶段试验鱼的增重率、特定生长率、摄食率和饲料效率均显著高于第2个和第3个生长阶段(P0.05)。在饲喂至第28、56和84天时,各牛磺酸添加组试验鱼的肝体比和脏体比均显著低于未添加牛磺酸组(P0.05),肥满度则与未添加牛磺酸组无显著差异(P0.05)。在同一饲料牛磺酸水平下,饲喂至第56和84天时的肝体比和脏体比均显著低于饲喂至第28天时(P0.05)。饲喂至第84天时,各牛磺酸添加组鱼体的粗蛋白质含量显著高于而粗脂肪含量显著低于未添加牛磺酸组(P0.05)。上述结果表明,饲料中维持一定水平的牛磺酸有利于斜带石斑鱼幼鱼的生长,饲料牛磺酸不足或过多均不利于其生长。饲料中添加牛磺酸降低斜带石斑鱼幼鱼体脂沉积而增加体蛋白质沉积。以增重率为评价指标,通过回归分析得到3个生长阶段斜带石斑鱼幼鱼饲料的适宜牛磺酸水平分别为1.20%(第1个生长阶段)、1.08%(第2个生长阶段)、1.00%(第3个生长阶段)。斜带石斑鱼幼鱼对牛磺酸的需要量随鱼龄的增长而下降。     

龙胆石斑鱼集约化养殖试验

从2002年12月19日引进3~5cm的龙胆石斑鱼苗820尾,经过11个月养殖试验测定,共 存活483条,成活率58.9％,平均体重473g／尾,最大体重950g／尾,养殖期间,饵料系数1.44,饵料效率 69％,养殖总积温7900℃。     

南海常见7种石斑鱼的DNA条码构建与亲缘关系分析

利用特异性聚合酶链式反应（PCR）技术扩增获取了南海海域常见的7种石斑鱼———鲑点石斑鱼（Epinephelus fario）、青石斑鱼（E.awoara）、黑边石斑鱼（E.fasciatus）、赤点石斑鱼（E.akaara）、七带石斑鱼（E.septemfasciatus）、斜带石斑鱼（E.coioides）、棕点石斑鱼（E.fuscoguttatus）———线粒体DNA COI基因及核DNA的RAG1基因部分序列。测定序列的比较分析结果显示：①该研究获取的COI基因部分序列能将7个物种分别开来,可以作为DNA条码;②线粒体DNA COI基因及核DNA的RAG1基因部分序列分别构建的系统发生树较为一致,结果都支持7种石斑鱼分为3支：青石斑鱼和斜带石斑鱼为第1支;鲑点石斑鱼、黑边石斑鱼、赤点石斑鱼和棕点石斑鱼为第2支;七带石斑鱼为第3支。研究表明,COI基因部分序列不但可以作为物种辨识的良好DNA条码,而且在石斑鱼属内的种间系统发生关系分析方面也具有一定的适用性。