蛋白质组学研究技术及其在果树学中的应用

蛋白质组研究是当今生命科学发展的一个新的增长点,它能阐明基因组所表达的真正执行生命活动的全 部蛋白质的表达规律和生物功能。简要介绍了蛋白质组学产生的科学背景、研究方法和研究内容。蛋白质组学研究 方法主要有双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D-PAGE)、质谱(Mass-spectrometric)技术、蛋白质芯片(Protein chips)技术、酵母 双杂交系统(Yeast two-hybrid system)、双向高效柱层析和生物信息学等。其应用的范围包括植物群体遗传学、在个体 水平上植物对生物和非生物环境的适应机制、植物的发育和组织器官的分化过程,以及不同亚细胞结构在生理生态 过程中的作用等诸多方面。同时展望了植物蛋白质组学研究前景以及蛋白质组学技术在果树学中的应用前景。     

用吹扫捕集法测定十字花科蔬菜中挥发性物质

采用吹扫捕集技术(Purge and Trap technique)对不同十字花科蔬菜中的挥发性成分进行了富集,以气质联用仪(GC／MS)进行鉴定。结果在白菜、羽衣甘蓝、芥蓝、青花菜、芥菜和大白菜中共鉴定出86种挥发性物质,化合物的种类包括醇类、醛类、酮类、酯类、硫醚类等,同时还发现了硫苷降解产物异硫氰酸盐和腈类等化合物。     

高效阴离子交换色谱法测定毛头鬼伞多糖中的单糖组成

本文采用高效阴离子交换色谱—脉冲安培检测器（HAPEC-PAD），建立了一种测定多糖中单糖比例的方法。以NaOH为淋洗液、CarboPac^TM A20预处理柱，CarboPac^TMPA20分离柱，金工作电极，Ag/AgCl参比电极，8种自然界中常见单糖标准品做混合标样，探索方法可行性。在淋洗液浓度为2．5mmol／L时，各种单糖组分得到有效分离，其线性和重现性均良好并在此基础上测定了毛头鬼伞多糖中单糖比例；与传统的方法相比，此方法具有前处理简单、灵敏度高、节省时间和试剂等优点。     

摄入不同能量的围产期乳牛肝低密度脂蛋白受体mRNA丰度的比较

将30头健康、经产、处于围产期的黑白花乳牛随机分为3组，每组10头。从产前28d开始，低能量组乳牛饲喂《中国奶牛饲养标准（2000）》减少20％日粮（能量摄入80％），对照组乳牛饲喂《标准》日粮（能量摄入100％），高能量组乳牛饲喂《标准》增加20％日粮（能量摄入120％），产后各组乳牛均饲喂标准日粮。至产后第56d结束试验；采用内对照RT-PCR方法检测摄入不同能量的围产期乳牛肝活体组织低密度脂蛋白受体（LDLR）mRNA丰度。结果，不同能量组乳牛肝LDLR mRNA丰度产前至产后均呈现先升高后降低的趋势。100％和120％能量组肝LDLR mRNA丰度在产后14d达最大值，且产后均高于产前（产后56d除外，P〈0．01或P〈0．05）；而80％能量组产后1d即达到最大值，产前14d至产后14d，LDLR mRNA相对表达量显著高于100％和120％能量组；产后28～56d，120％能量组显著高于80％和100％能量组（P〈0．01）。表明围产期乳牛能量摄入水平对肝LDLR mRNA丰度有显著影响。     

莠去津原药中莠去津及主要杂质的气质联用分析研究

本文通过采用气质联用(GC—MS)法对莠去津原药中莠去津及其它杂质进行分析鉴定，从而了解莠去津原药中的杂质情况和质量状况，用以指导工业生产。     

‘三棱榄''橄榄果实香气成分分析

1 材料与方法选取广东优良鲜食橄榄品种‘三棱榄’,2001年12月6日采样,采用固相微萃取法(SPME)富集香气成分(鲜橄榄果肉于15℃下捣碎后取样1.0 g放入4 mL聚四氟乙烯硅橡胶垫密封螺口玻璃瓶中,插入100μm聚二甲基硅氧烷纤维头于室温25-30℃顶空取样2 h),用美国Finnigan TRACE GC-MS气相色谱-质谱联用仪进行分析。气相色谱柱为DB-1弹性毛细管柱30 m×0.25 mm,载气为He(99.99％),流速1.0mL/min。程序升温从40℃开始先保持10 min,后以2℃/min的升温速率升至150℃保持10 min。质谱条件:电子能量70 eV,离子源温度250℃,质量范围35-450 aum,不分流进样。2002年12月18日采样重复分析。     

红肉脐橙果肉中主要色素的定性及色素含量的变化

 运用薄层层析法及二极管阵列检测器与高效液相色谱联用的方法, 确定红肉脐橙果肉中含有番茄红素和β- 胡萝卜素两种主要色素, 它们在液相色谱图中占总峰面积(计溶剂峰) 的73. 57 %～77. 78 % , 番茄红素占55. 36 %～58. 49 % , β- 胡萝卜素占18. 21 %～19. 93 %。利用反相高效液相色谱仪以及番茄红素和β- 胡萝卜素标样制作标准曲线, 测定果实发育及室温贮存过程中色素的变化动态, 结果表明, 该脐橙果肉中的番茄红素在成熟期含量最高, 达109. 67μg·g^-1DM, β- 胡萝卜素此时也达到最高值(15. 52μg·g^-1DM) ; 番茄红素的含量在采收后基本呈下降趋势(但采后30 d 有显著升高) , 说明果肉中存在类胡萝卜素采后合成的现象; 贮存4 个月后, 番茄红素含量急剧降低至最高时的1/ 10。     

利用RT-PCR与PVP-ELISA检测水稻瘤矮病单头叶蝉

 目前国内外对水稻瘤矮病毒(Rice gall dwarf virus,RGDV)的研究主要集中在其核衣壳蛋白和外衣壳蛋白的性质、结构及其与介体的亲和性、与介体传毒能力的关系等方面,本室在已有室内检测研究的基础上,利用RT-PCR和PVP-ELISA法对田间带毒叶蝉进行检测,并对2种方法的检测结果进行了比较。     

2%甲嘧磷·马粉剂的气相色谱分析

本文采用5％OV-17为色谱柱固定相,以邻苯二甲酸二正戊酯为内标物,用FID检测器对2％甲嘧磷 马粉剂进行定量分析,甲基嘧啶磷、马拉硫磷的标准偏差分别为0.027、0.011,变异系数分别为2.40％、0.99％; 甲基嘧啶磷回收率为99.5％-100.3％,马拉硫磷的回收率为98.9％～99.8％o该方法方便、快捷、准确。     

21％聪唑禾草灵·乙菝氟草醚乳油液相色谱分祈

本文采用高效液相色谱法,以C18柱为固定相,甲醇+水为流动相,用236nm紫外检测器定量测定唑禾草灵、乙羧氟草醚混剂的有效成分含量。本方法的变异系数分别为0.06%、0.40%;标准偏差分别为0.009、0.032;平均回收率分别为99.13%、100.05%;线性相关系数分别为0.9993、0.9998。