全文获取类型
收费全文 | 89576篇 |
免费 | 2771篇 |
国内免费 | 6721篇 |
专业分类
林业 | 4158篇 |
农学 | 7615篇 |
基础科学 | 2262篇 |
4458篇 | |
综合类 | 36877篇 |
农作物 | 4827篇 |
水产渔业 | 7161篇 |
畜牧兽医 | 24062篇 |
园艺 | 5102篇 |
植物保护 | 2546篇 |
出版年
2024年 | 849篇 |
2023年 | 2692篇 |
2022年 | 3065篇 |
2021年 | 3078篇 |
2020年 | 2725篇 |
2019年 | 3362篇 |
2018年 | 1702篇 |
2017年 | 2682篇 |
2016年 | 3322篇 |
2015年 | 3307篇 |
2014年 | 4053篇 |
2013年 | 4180篇 |
2012年 | 5696篇 |
2011年 | 5886篇 |
2010年 | 5568篇 |
2009年 | 5636篇 |
2008年 | 5799篇 |
2007年 | 4921篇 |
2006年 | 4239篇 |
2005年 | 4055篇 |
2004年 | 3491篇 |
2003年 | 3034篇 |
2002年 | 2319篇 |
2001年 | 2159篇 |
2000年 | 1638篇 |
1999年 | 1359篇 |
1998年 | 1082篇 |
1997年 | 944篇 |
1996年 | 874篇 |
1995年 | 856篇 |
1994年 | 795篇 |
1993年 | 584篇 |
1992年 | 605篇 |
1991年 | 571篇 |
1990年 | 448篇 |
1989年 | 474篇 |
1988年 | 213篇 |
1987年 | 159篇 |
1986年 | 98篇 |
1985年 | 72篇 |
1984年 | 35篇 |
1983年 | 44篇 |
1982年 | 65篇 |
1981年 | 65篇 |
1980年 | 56篇 |
1979年 | 30篇 |
1978年 | 27篇 |
1977年 | 18篇 |
1975年 | 29篇 |
1973年 | 38篇 |
排序方式: 共有10000条查询结果,搜索用时 15 毫秒
862.
通过噬菌体展示技术筛选牛病毒性腹泻病毒(BVDV)重组E2蛋白特异性纳米抗体,验证纳米抗体反应原性。使用BVDV灭活疫苗免疫羊驼,分别在第0、21、49及70天采集全血,测得抗体效价后分离全血中淋巴细胞,提取总RNA,反转录后PCR扩增目的片段。目的片段和pCANTAB5E使用限制性内切酶酶切连接后转至TG1感受态细胞中,应用噬菌体展示技术构建VHH噬菌体展示文库。再经过3轮"吸附-洗脱-筛选"后得到与BVDV-E2结合的噬菌体,用ELISA鉴定其反应性。结果获得插入率为90.8%,库容为1.02×107 CFU/mL的文库。ELISA结果和序列分析显示,得到2条与E2蛋白具有良好反应性的纳米抗体且与VHH同源性较高的序列。研究结果为BVDV的防控和新型疫苗的研制奠定基础。 相似文献
863.
866.
867.
《中国兽医学报》2015,(4):558-564
根据大鲵蛙病毒(Chinese giant salamander ranavirus,CGSRV)主要核衣壳蛋白MCP编码基因的序列设计合成4条特异性引物,以重组pMD19-T-MCP质粒为模板,通过反应条件与反应体系优化,建立CGSRV的环介导等温扩增(LAMP)检测方法,测定LAMP对CGSRV的最低检测限,并与巢式PCR和普通PCR进行比较。结果表明,该LAMP方法最佳反应温度为62℃,反应时间为40min,对CGSRV最低检测限5copies/μL,而巢氏PCR和常规PCR的检测限为50和5×103copies/μL,表明该LAMP方法的灵敏度显著高于巢氏PCR和常规PCR;且与淋巴囊肿病毒、鲫鱼出血病疱疹病毒2型、云斑尖塘鳢虹彩病毒、鳜鱼传染性脾肾坏死病毒、迟钝爱德华菌、嗜水气单胞菌和维氏气单胞菌等均无交叉反应;反应结束后加入荧光染料EtBr可肉眼判定粉色为阳性,而棕色则为阴性。因此,该方法对CGSRV的检测较巢氏PCR和常规PCR更为简便、快速、灵敏、特异,且不需昂贵仪器设备,更适合养殖现场检测,为CGSRV早期感染的快速检测提供了新方法。 相似文献
868.
869.
肠致病性大肠杆菌DPO-PCR快速检测方法的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
为建立肠致病性大肠杆菌(EPEC)的快速检测方法,本研究以EPEC bfp A基因为靶基因设计了一对双启动寡核苷酸引物(DPO),建立了EPEC的DPO-PCR快速检测方法。结果显示,退火温度在45℃~65℃范围内均能够高效地扩增出目的基因,表明DPO引物对退火温度不敏感。该方法对其他菌株的扩增结果均为阴性,特异性强;其灵敏度为97 cfu/m L。利用该方法和国标法分别对采集的230份临床样品进行检测,均共计检出5份EPEC阳性样品,两者符合率为100%。本研究建立的DPO-PCR方法设计简单、特异性强、灵敏度高,具有良好的实用性,为快速准确检测EPEC提供新的检测手段。 相似文献
870.
从杭白菊(Chrysanthemum morifolium‘Hangbaiju’)中克隆了4个细胞壁松弛和伸展相关的木葡聚糖内转糖苷酶/水解酶基因,分别命名为CmXTH1、CmXTH2、CmXTH3和CmXTH4,序列分析表明其编码的氨基酸序列N端都含有23~30个氨基酸组成的信号肽区域和保守的催化活性位点DE(I/L)DEFLG以及紧邻的N(R/A)T组成的N端糖基化位点,CmXTH1/2/3的C端均含有4个保守的半胱氨酸残基,CmXTH1/2/3/4蛋白的相似度为66.2%。系统进化分析结果表明,CmXTH1/2/3属于XTH家族Ⅰ组,CmXTH4属于Ⅱ组。实时荧光定量结果表明:(1)菊花CmXTH1/2/3/4在根、茎、叶和花蕾中均有表达。CmXTH1在根中表达量较高,CmXTH2/3在茎中表达量较高,CmXTH4在花蕾中表达量最高。(2)CmXTH1/2/3/4在花序不同部位表达量有差异,CmXTH1/4在舌状花中表达量最高,CmXTH2/3在筒状花中表达量较高。(3)CmXTH1/2/3/4在舌状花不同发育阶段表达量差异显著,CmXTH1/2在盛花期表达量最高,CmXTH3在衰老期表达量最高,CmXTH4在初开期表达量最高。病毒诱导基因沉默结果表明,CmXTH1/2/3/4沉默系的花序直径和舌状花长度与对照相比均有所减小,其中CmXTH4沉默系减小最大,分别减小了25.67%和10.42%,舌状花花瓣表皮细胞与对照相比明显变小,影响了舌状花花瓣的伸长;CmXTH2沉默系的筒状花雄蕊长度和CmXTH4沉默系的花萼直径分别与对照相比显著减小。这表明菊花CmXTH1/2/3/4基因参与了花序的开放,促进了舌状花花瓣的伸长,对于菊花的花序增大具有重要作用。 相似文献