斑马鱼卵母细胞第一次减数分裂过程中MAPK的表达及定位

用不同浓度的促滤泡激素(FSH)和17α,20β-双羟孕酮分别作用于斑马鱼卵母细胞。结果表明,1 IU/mL的FSH和5 ng/mL的17α,20β-双羟孕酮对斑马鱼卵母细胞生发泡破裂都具有明显促进作用。其中17α,20β-双羟孕酮的作用效果较好,经过SDS-PDGE电泳和WesternBlot检测发现,5 ng/mL 17α,20β-双羟孕酮对斑马鱼卵母细胞诱导后,分裂原蛋白激酶被激活,生发泡破裂的卵母细胞数目增多。免疫组化检测证实,第Ⅰ期的卵母细胞中分裂原蛋白激酶没有激活,第Ⅱ期、第Ⅲ期细胞质中分裂原蛋白激酶开始激活,第Ⅴ期卵母细胞的胞质与核区同时存在活性的分裂原蛋白激酶,并伴有生发泡破裂。以上结果说明分裂原蛋白激酶在斑马鱼卵母细胞第一次减数分裂恢复过程中发挥重要作用,并且随着分裂原蛋白激酶激活,其活性部位从细胞质转移到细胞核。     

暗适应条件下斑马鱼的光谱敏感性

为研究暗适应条件下斑马鱼Danio rerio视网膜电图(ERG)试验中的最佳试验参数和光谱敏感性,选取体长为3.5～4.0 cm的6月龄斑马鱼,探究了斑马鱼视网膜电图试验中的最低暗适应时间和闪光刺激时间间隔,以ERG的b波振幅分量作为对光刺激的响应分析了斑马鱼的暗视光谱敏感性。结果表明：斑马鱼的ERG试验中暗适应时间至少为90 min(t检验,P>0.05),闪光刺激时间间隔至少为50 s(配对t检验,P>0.05);暗适应条件下,斑马鱼的光谱敏感性函数在可见光波段和紫外光波段均出现了敏感峰值,敏感峰值分别出现在500 nm和365 nm波长处,且紫外敏感峰值相较于可见光敏感峰值降低约0.28个lg单位。研究表明,暗适应的斑马鱼对可见光和紫外光均表现出敏感性,其视网膜中的U-视锥细胞和视杆细胞共同参与了暗视视觉,增加了暗视光谱敏感范围,从而提高了暗视视觉的灵敏度。     

在斑马鱼仔鱼脑部异体移植胚胎细胞的尝试

为建立斑马鱼(Danio rerio)脑部细胞移植模型,先用红色荧光染料标记供体胚胎细胞,再移植细胞到AB品系和两种转基因斑马鱼仔鱼脑部。荧光显微镜和组织学切片观察发现移植细胞沿组织或细胞间隙而不是通过血管向周围组织扩散,但细胞增殖分化不明显。在细胞移植24 h后,脑部组织学结构与对照组无明显差别。带有白血病基因的胚胎细胞在AB仔鱼的脑部没有产生肿瘤样增生和转移。相比之下,正常胚胎细胞在白血病模型的仔鱼脑部非白血病细胞聚集区出现较多增殖和迁移。这些结果提示脑局部微环境不支持移植细胞的增殖分化;细胞移植只能弥补局部细胞的空疏而不能用作细胞替代治疗。     

DEHP对斑马鱼仔鱼HPG和HPA轴相关功能基因表达的影响

为了探讨邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)对斑马鱼早期生命阶段下丘脑-垂体-性腺轴(HPG)和下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA)相关功能基因表达的影响,将斑马鱼的受精卵暴露于10、30和300μg/L DEHP溶液中,同时设置空白对照,96 h后,利用实时荧光定量PCR技术,测定斑马鱼仔鱼HPG和HPA轴上12个功能基因的表达。结果显示,与对照组相比,30μg/L DEHP处理组的Cyp19b、GnRH3、Era和ERβ基因表达量显著升高,GnRH2、Pomc、Mr、Mc2r、Crh、Gr和Crhbp基因在各DEHP处理组表达量显著降低,FSH-β和Crhbp基因表达量无显著变化。以上研究结果表明：DEHP对斑马鱼胚胎/仔鱼阶段的2个主要内分泌分子通路产生了显著影响,将会导致内分泌功能的改变,从而可能影响斑马鱼的后期生长发育。     

长链非编码RNAs TCONS＿00028652、lnc＿H007和lnc＿H001在斑马鱼胚胎期的时空表达

[目的]长链非编码RNAs(long noncoding RNAs,lncRNAs)近年来受到了越来越多的关注,被认为是重要生物学过程中潜在的关键调控因子,目前已经在斑马鱼胚胎和组织中发现了大量的lncRNAs。然而,这些在成体组织中已发现并鉴定的有差异表达的lncRNAs在胚胎发育时期的时空表达谱仍不清楚,本文研究成体斑马鱼心脏中发现的3个lncRNAs在胚胎发育阶段的时空表达谱。[方法]首先对其编码潜能利用在线软件进行分析,并通过Ensemble、NCBI等网站对其与蛋白编码基因的关系进行分析,然后利用实时荧光定量PCR方法分析了lncRNAs TCONS_00028652、lnc_H001和lnc_H007在斑马鱼胚胎发育阶段以及不同组织的表达水平。为了进一步研究其在斑马鱼胚胎发育过程中表达的空间位置,采用全胚原位杂交技术进行检测。[结果](1)通过在线数据库对其在基因组上的位置与编码基因的关系分析发现,TCONS_00028652属于基因间长链非编码RNA,lnc_H001属于内含子型,而lnc_H007属于反义型长链非编码RNA;(2)通过实时荧光定量PCR检测发现它们在胚胎发育不同时期几乎都有表达,而且在成体组织中,不仅在心脏中有表达,在其它组织也有表达,其中TCONS_00028652在大脑和肝脏中的表达高于其它组织,lnc_H001在大脑中的表达高于其它组织,而lnc_H007则是在心脏中表达高于其它组织。[结论]3种lncRNAs不仅在斑马鱼心脏发育和修复中起作用,而且在其它器官发育和修复以及胚胎发育过程也发挥一定的作用。     

斑马鱼miR-30e对血细胞生成的作用机制研究

microRNA(简写为miRNA)是一类内源基因编码的单链RNA分子,参与转录后基因的表达调控,在血液生成过程中起着重要作用.为研究miR-30e对鱼类血液生成的作用机制,以斑马鱼Danio rerio作为模式生物,针对青藏高原裂腹鱼血液组织中高表达的miR-30e,利用生物信息软件预测斑马鱼miR-30e的靶基因,...     

温度对斑马鱼胚胎发育的影响研究

观察了不同温度（22℃、24℃、26℃、28℃、30℃、32℃）下斑马鱼受精卵的死亡率、孵化周期、孵化率等指标的变化规律。结果表明：在22-28℃范围内,随温度升高,死亡率逐渐降低;在28-32℃范围内,随温度升高,死亡率逐渐增高,28℃为斑马鱼胚胎发育的最适温度。该研究结果为丰富硬骨鱼类繁殖生理学提供参考资料。     

喹禾灵对映体对斑马鱼毒性的手性选择性研究

为了研究喹禾灵对映体对水生生物的手性选择性毒性,对喹禾灵对映体进行了斑马鱼急性毒性试验,并研究了亚致死水平上对斑马鱼体内ATP酶活性的影响。研究发现,精喹禾灵和喹禾灵对斑马鱼的急性毒性分别为高毒和低毒;二者在诱导时间和诱导强度上对斑马鱼体内Na+,K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性均表现出不同的作用方式。喹禾灵对斑马鱼Ca2+-ATP酶活性的影响在72 h时,250μg.L 1、1 000μg.L 12个处理组表现出明显诱导效应(P<0.05),在96 h各处理组均表现出诱导作用。精喹禾灵除在24 h时,5μg.L 1、10μg.L 1处理组外,其他各处理组对斑马鱼体内Ca2+-ATP酶表现出较强的诱导作用;72 h后,25μg.L 1、100μg.L 1处理组酶活性有下降趋势,其他2个处理组酶活性则继续增加。喹禾灵对斑马鱼Na+,K+-ATP酶活性的影响在48 h时,250μg.L 1、1 000μg.L 12个处理组有明显诱导效应(P<0.05),72 h时只有1 000μg.L 1处理组有明显诱导作用。精喹禾灵25μg.L 1、100μg.L 1处理组在24 h时对Na+,K+-ATP酶活性即表现出很强的诱导效果,48 h后各处理组酶活性都开始明显增加;72 h时各浓度处理组酶活性有下降趋势,96 h后基本与对照组无显著性差异。试验结果表明喹禾灵对映体对斑马鱼毒性有显著的手性选择性。     

TLR21在斑马鱼免疫功能中的作用研究

［目的］研究斑马鱼TLR21受体家族的作用。［方法］用各种纯组分刺激斑马鱼,研究斑马鱼TLR21受体家族（zTLR21.1、zTLR21.3、zTLR21.4）的表达量变化,推测它们的功能。［结果］zTLR21.1对于LTA刺激无反应,对于LPS、ployI：C和Glucan刺激都有上调反应。zTLR21.3和zTLR21.4对于LPS、LTA和ployI：C刺激均无反应,对于Glucan刺激有明显上调变化。［结论］zTLR21.1可能是一种能够识别大部分抗原的模式识别受体。zTLR21.3和zTLR21.4的功能很类似,可能都是酵母的特异识别受体。