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61.
鸡抗REV血清的制备与检定 总被引:1,自引:1,他引:0
用网状内皮组织增生症病毒(REV)HA9901株免疫SPF鸡,无菌采血制备鸡抗REV血清。通过ELISA、IFA、AGP、HI等方法对制备的血清进行检测,未检出禽类常见的其他17种(或亚型)病毒的抗体,该血清具有良好的特异性。通过测定,该血清用于间接免疫荧光试验(IFA)的效价为1:2000,用于IFA检测REV的染色效果与REV单抗(11818和11854的混合物)相当。试验结果表明,该批血清1000倍稀释可作为一抗,用于REV的间接免疫荧光检测。 相似文献
62.
利用高度近交系大鼠的新生仔睾丸作抗原对处女大鼠进行免疫,制得 H-Y 抗血清.将同系大鼠的桑椹胚置于含有抗血清的培养液中体外培养5~6小时.结果表明其中部分胚胎能继续发育至囊胚(46.7%);另一部分胚胎停滞发育(53.3%),但解除抗体后重新恢复发育能力(34%).经胚胎移植后证明,前者约有79%发育为雌鼠,而后者约86%发育为雄鼠.由此可见,H-Y 抗血清对雄性胚胎具有特异性的抑制作用.用同样方法免疫远交系大鼠,所得抗血清不能对雄性胚胎产生抑制作用. 相似文献
63.
根据已报道的甘薯潜隐病毒莲藕分离物sweet potato latent virus-lotus(SPLV-lotus)核苷酸序列设计引物,采用RT-PCR从感病莲藕样品中扩增获得SPLV-lotus辅助成分-蛋白酶基因(HC-Pro),大小为1 375 bp。通过序列测定和分析后,将其克隆到原核表达载体pGEX4T-1,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),经IPTG诱导并纯化获得大小为74 kD的融合蛋白pGEX4T-1-HC-ProSPLV-lotus。SDS-PAGE结果显示,融合蛋白获得过量表达。以纯化蛋白为抗原免疫新西兰大白兔制备抗血清,采用ELISA和Western blot对抗血清效价和特异性进行检测,当HC-Pro抗血清稀释比为1∶256 000时,ELISA显色后OD450读数仍高于0.6,表明所制备抗血清合格;Western blot结果显示,在感染SPLV-lotus植株样品中仍能检测到单一目的条带。这些结果表明,制备的抗血清效价合格且可用于SPLV-lotus的特异性检测。 相似文献
64.
叠朊(Dpl)是朊蛋白(PrP)的横向同源物,两者的功能密切相关。本研究旨在制备能够特异检测重组表达的或者动物组织中Dpl的抗血清,以用于研究Dpl的功能及其与PrP的关系。根据已克隆的汉族人、中国黄牛、甘肃土种羊的Dpl基因,将其Dpl成熟蛋白编码区分别定向克隆到表达载体pET-30a(4-)上,将重组表达载体转入E.coli BL21(DE3)pLys S,IPTG诱导表达。将表达并纯化的牛重组Dpl免疫4只青紫蓝兔,制备牛Dpl的抗血清,SDS—PAGE分析表明人、牛和羊的重组Dpl在E.coli中获得了高效表达。用Ni—NTA树脂亲和层析和胶洗脱法纯化了上述表达产物,ELISA和West—blot分析表明,制备的牛Dpl抗血清与重组人、牛和羊的Dpl以及牛和羊睾丸组织的Dpl发生了特异性反应,却不与重组人、牛和羊的PrP发生反应。上述结果表明制备的Dpl抗血清可以作为人、牛和羊Dpl的检测试剂和研究材料。 相似文献
65.
拟南芥Ran2小GTP结合蛋白抗血清的制备及其FITC荧光标记 总被引:1,自引:1,他引:0
将原核表达、纯化的Ran2蛋白对新西兰兔进行免疫制备抗血清,ELISA测定其效价为1∶51 200。免疫印迹分析表明,原核表达、纯化的Ran2和拟南芥可溶性蛋白杂交带均在26 ku处。FITC荧光标记抗体检测Ran2绿色杂交带主要出现在细胞分裂间期的核膜上。 相似文献
66.
67.
牛重组型生长激素抗独特型抗体的产生与鉴定 总被引:2,自引:0,他引:2
利用纯化的兔抗牛生长激素抗体IgG来免疫3只绵羊以制备抗独特型血清。间接ELISA法和琼脂糖双扩散法测定抗血清滴度分别达到或超过1:128000和1:64以上。之后用硫酸铵沉淀法和亲和层析法纯化抗独特型抗体。采用间接ELISA法来研究抗独特型抗体与第一抗体IgG成分特异性结合及生长激素与第一抗体中IgG结合的影响,结果显示出它不但能IgG成分特异性结合。而且能与生长激素竞争性结合第一抗体IgG成分 相似文献
68.
H-Y抗血清的制备及检测研究 总被引:1,自引:0,他引:1
选用8 ~12 周龄纯系的 B A L B/ C 母鼠, 用同日龄的 B A L B/ C 公鼠采取皮肤移植和脾细胞注射2 种方式免疫, 制备 H Y 抗血清, 经精子微量细胞毒性试验, 筛选抗血清。皮肤移植5 只小鼠中只有1 只产生较好的抗血清, 脾细胞注射的4 只小鼠都能产生较好的抗血清, 产生抗血清的小鼠占55 % 。抗血清与昆明鼠正常8cell 早期桑椹胚培养5 ~6 、18 和24 h 后, 退化率达433 % , 经 X2 检验差异不显著( P > 005) , 符合自然性比例。 相似文献
69.
猪链球菌2型人源分离株EF单克隆抗体的制备与鉴定 总被引:2,自引:1,他引:2
为了解猪链球菌2型(SS2)菌株毒力相关因子的致病机理,建立高效的免疫学检测方法,将SS2胞外因子(EF)抗原性强的区域通过基因克隆、原核表达,经亲和层析纯化的EF蛋白免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术将免疫细鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,建立了4株分泌抗EF蛋白单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞系2G1、5H7、3H4和1F2。间接ELISA测定杂交瘤细胞培养上清的效价为1∶128~1∶512,诱生腹水的抗体效价为1∶104~1∶105。4株McAb腹水的Western blot鉴定表明McAb能特异性的识别EF。以2G1单抗腹水与和EF多克隆抗血清建立的夹心ELISA可特异地检测EF。 相似文献
70.