改进型胶原诱导的小鼠关节炎动物模型的建立

为了克服胶原诱导的关节炎(CIA)模型的诸如造模时间长,发病率偏低,发病严重程度较低,动物个体间疾病严重程度差异大等缺点,本试验探索采用抗Ⅱ型胶原(CII)/CD3双特异抗体联合胶原免疫来建立一个改进型CIA模型。本试验首先通过化学连接方法制备了抗CII/CD3双特异抗体。体外研究发现,该双特异抗体较好地保持了与CII以及小鼠CD3分子的结合能力,并且能同时有效地结合CII和CD3分子。体内试验发现,在胶原诱导的基础上给予抗CII/CD3双特异抗体,早在胶原免疫后25 d左右小鼠即开始发病,发病率高达100%,关节炎指数评分可以达到并稳定在10分左右的水平,并且个体间炎症严重程度差异较小。该改进型模型相对于常规CIA模型具有明显优势。该模型的成功建立,为深入揭示类风湿关节炎的发病机制、筛选和评价类风湿关节炎治疗药物,提供了更适宜的动物模型。     

利用杆状病毒表达系统表达PRV/gE蛋白及间接免疫荧光抗体(IDF)检测方法的建立

为了建立高效灵敏的伪狂犬病病毒(PRV) gE蛋白的间接免疫荧光抗体诊断方法,本研究将PRV/HN/SMX/2012毒株gE蛋白的自身信号肽及胞外域片段克隆到pFastBacHT B载体上,构建重组质粒pFastBacHTB-gE,并转化至大肠杆菌DH10Bac感受态细胞中,经过3次蓝白斑筛选获得含有gE基因的重组杆粒rBacmid-gE。随后,将该杆粒转染至sf9昆虫细胞中,获得重组杆状病毒rAcMNPV-gE。经Western blot和间接免疫荧光实验(IFA)进行鉴定分析,发现重组gE蛋白在sf9细胞中表达。利用该sf9细胞建立检测血清中gE抗体的间接免疫荧光抗体(IDF)方法,通过反应条件的优化发现,将血清和羊抗猪FITC-IgG分别进行1∶40和1∶2 000稀释时所建立的方法能针对血清中gE抗体产生较强的特异性荧光;通过与商业化的ELISA检测gI/gE试剂盒(IDEXX)比较,所建立的检测方法与商业化试剂盒的总符合率为93.18%(164/176),阳性结果符合率93.75%(120/128),阴性结果符合率91.67%(44/48),2种方法存在很强的一致性(Kappa=0.832,CI=95%);-20℃条件下保存2个月的稳定性和重复性良好。     

猪YTHDF2蛋白原核表达及多克隆抗体的制备

YTH家族蛋白2(YTH domain-containing family protein,YTHDF2)作为一种m~6A修饰的结合蛋白,可对底物mRNA的剪接,翻译,降解等过程进行调控。本研究通过RT-PCR首次获得了猪YTHDF2编码基因序列,全长1 743 bp,编码580个氨基酸,基因进化树分析显示该基因在各物种间保守性较高。将猪YTHDF2编码基因克隆至原核表达载体pET-28a (+)中,重组质粒pET-28a (+)-YTHDF2在大肠杆菌BL-21菌株中进行原核表达,成功获得了大量带His标签的猪YTHDH2重组蛋白,大小约70 kD。以纯化的重组蛋白为抗原免疫新西兰大白兔制备猪YTHDF2多抗血清,ELISA结果表明制备的兔抗猪YTHDF2多抗血清效价为1:204 800,间接免疫荧光(IFA)和Western blot试验均表明该多克隆抗体具有良好的反应性和特异性。猪YTHDF2基因序列的获得及多克隆抗体的制备为进一步研究YTHDF2在猪mRNA m~6A甲基化过程中的生物学功能奠定了基础。     

猪源唾液酸黏附素受体的表达及其纳米抗体筛选

为制备特异性结合猪源Sn受体的纳米抗体分子，采用人工合成猪肺泡巨噬细胞Sn受体胞外区(Sn4D)基因序列，将其克隆至pET-30a载体中，并在大肠杆菌中诱导表达Sn4D蛋白；经Ni柱纯化的Sn4D蛋白作为靶标分子，在T7噬菌体展示的纳米抗体文库中进行3轮亲和筛选；然后从筛选产物中挑选单抗克隆噬菌体进行亲和力、特异性鉴定。结果显示，成功构建了pET-30a-Sn4D重组表达载体，并诱导表达出约50 ku的目标蛋白，Western-blot显示该蛋白具有良好的反应活性；经过3轮亲和筛选，投入产出比逐渐升高，并从筛选产物中鉴定出6株特异性结合Sn4D的纳米抗体分子。该纳米抗体分子的获得为今后进一步开展抗病毒活性的研究奠定了良好基础。     

动物疫病预防控制中动物疫病监测的必要性分析

通过对疫病的监测和预防控制,及时发现可以采取和改进的问题。对提高畜产品质量,保障市场供应安全稳定发挥着重要作用。因此,加强动物鼠疫的监测和预防具有重要的理论和现实意义。     

D群猪链球菌疫苗免疫条件优化的研究

<正>随着工厂化养猪业的发展,猪链球菌病已成为危害养猪业的重要疾病之一。这种病分布广泛,一年四季均可发生,侵害各种年龄的猪,可致猪脑膜炎、败血症、关节炎、支气管炎、淋巴结肿胀等,发病率和死亡率较高,给养殖户带来巨大的经济损失。不仅如此,该病还导致人感染,引起人的死亡,严重地威胁着人类的公共卫生安全。目前,对于猪链球菌病的预防和     

青藏高原蒙古羊衣原体和布鲁氏菌病的抗体检测与流行情况分析

为摸清青藏高原蒙古羊布鲁氏菌病和衣原体病在该地区感染现状，采用间接血凝试验和试管凝集试验，对乌图美仁乡和郭勒木德镇的538份羊血清进行了抗体检测和流行情况分析。检测结果：衣原体阳性35份，阳性率6．5％，布鲁氏菌病未检出阳性。说明青藏高原蒙古羊羊群中存在衣原体病原的感染情况，应引起高度重视。     

春冬季节种猪疾病防控

春冬两季是种猪感染性疾病的高发季节,如养殖者疏于防控管理,将很可能导致大规模的猪群发病问题,对养殖工作的经济效益产生严重影响。基于此,本文首先从传染性胃肠炎和流行性腹泻两个角度入手,阐述了春季常见的种猪疾病类型及其防控方法;其后,围绕圆环病毒病和传染性胸膜肺炎两个方面,分析了冬季常见的种猪疾病类型及其防控方法。