普通杏品种SSR遗传多样性分析

利用来自杏、桃和扁桃的25对SSR多态性引物对66个普通杏品种进行了PCR扩增及变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,共检测出284个等位位点,每对引物的等位位点数在3～17之间,平均为11．36。通过NTSYS软件计算得到的Dice相似性系数为0．083～0．987,平均值为0．370,     

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌转铁结合蛋白2基因克隆、序列分析及表达

参照猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniac)血清5型菌株序列ZA6774设计1对特异性引物，用PCR方法扩增转铁结合蛋白2(Tbp2)基因，得到1条1624bp的片段，然后克隆到pMD18-T载体中，经测序比较，与参考序列的核苷酸同源性达99．8％，从T-载体中切下目的片段后，定向克隆到pET32a( )中，转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)，经诱导后，SDS-PAGE电泳，Tbp2高效表达，Western-blotting鉴定呈阳性。     

静宁鸡和固原鸡品种划分的分子遗传基础

甘肃静宁鸡和宁夏固原鸡具有相似的形成历史，被合并为静原鸡收录在中国家禽品种志。当地对此持有不同的看法，认为这两个品种不应合并为一个品种，而应为两个不同的品种。研究利用26个微卫星标记对两群体进行分析，计算两群体中各标记的等位基因数、有效等位基因数、杂合度以及群体间的Nei氏遗传距离、遗传相似系数和分化系数。结果表明，静宁鸡中各标记的观察等位基因数目为1～16，平均为5．962，平均有效等位基因数目为3．254；固原鸡中各标记的观察等位基因数目为1～14，平均为5．615，平均有效等位基因数目为3．222。静宁鸡中各标记观察杂合度为0～0．839，平均为0．558；固原鸡中各标记观察杂合度为0～0．867，平均为0．515。静宁鸡和固原鸡间的遗传距离为0．0876，遗传相似系数为0．9161。说明两群体具有相似的血缘、相似的遗传基础，中国家禽品种志将这两个品种合并为一个品种是有一定道理的。研究为解决类似的品种定名争执提供了新的方法。     

玉米中转基因成分筛查策略

根据商业化转基因玉米外源基因元件信息,构建玉米转基因检测分子特征矩阵,并根据元件信息建立转基因玉米的筛查检测策略。结果表明:利用CaMV35S启动子、NOS终止子2个元件的组合,可完成对现有转基因玉米转化事件的筛查检测,检测灵敏度可达到1g/kg。该筛查方法可对玉米中的转基因成分进行快速、高灵敏度的筛查。     

利用内标为基础的RT-PCR技术检测草莓皱缩病毒(SCV)和草莓镶脉病毒(SVBV)

[目的]通过对反应条件和参数的摸索与优化,建立多重RT-PCR检测方法,实现2种病毒的同时高效快速检测。[方法]通过CTAB法与试剂盒提取RNA,以优质的总RNA为模板,进行梯度PCR,结合扩增内标的检测体系,建立多重RT-PCR检测方法。[结果]建立了优化的SCV和SVBV的多重RT-PCR检测体系,可以对草莓田间植株进行快速稳定的病毒检测。[结论]该研究为草莓病毒检测提供一种方便、高效的分子生物学方法,为草莓无病毒苗的实际生产提供技术支撑。     

贵州省猪源沙门氏菌Ⅰ类整合子与耐药基因盒研究

为了调查规模养殖场沙门氏菌中Ⅰ类整合子的流行情况,采用聚合酶链式反应检测了从贵州省规模养猪场分离的57株沙门氏菌中Ⅰ类整合子的携带率以及整合子中耐药基因盒的种类;采用微量肉汤稀释法测定了57株沙门氏菌对12种抗菌药物的敏感性;并应用χ2检验检测Ⅰ类整合子阳性菌株与阴性菌株耐药性的相关性。结果显示,57株沙门氏菌中Ⅰ类整合子检出率为40.4%(23/57);耐药基因盒检出率为31.6%(18/57);整合子中携带可分别介导对氨基糖苷类和磺胺类药物耐药的aad A2、aad A5、aad A22、aad A23b、dfr A1、dfr A12和dfr A17基因;57株沙门氏菌对12种抗菌药物的耐药率不同,Ⅰ类整合子与多重耐药之间有明显的相关性。     

清水江鲤生物学特性及人工驯养技术研究

为探究清水江鲤(Cyprinus carpio)种质资源现状,基于分子标记和形态指标对其进行分析。研究发现清水江鲤群体呈现较高遗传多态性水平,12个微卫星位点的等位基因数(N_a)、有效等位基因数(N_e)、表观杂合度(H_o)、期望杂合度(H_e)和多态性信息含量(PIC)均值分别为10、8.37、0.54、0.86和0.84。遗传结构分析结果推测实验个体来源于3个理论种群,并将来源概率>70%的个体分成3个区组,进行遗传变异分析。基于微卫星标记的遗传分析,发现区组间达到中等水平的遗传分化(F_ST>0.05,P<0.01);区组间Nei’s遗传距离为0.473~0.546,区组间个体遗传结构相对独立。基于形态学指标,研究发现个体间存在较大形态差异,体质量的变异系数最大(38.0%);区组间在背鳍硬棘数、侧线鳞数、侧线上鳞数和尾柄长/体长等性状间存在显著差异(P<0.05);此外,基于形态学数据的欧式距离与Nei’s遗传距离的聚类结果相符。结果表明,清水江鲤群体表现出较高的遗传多样性水平,且群体内存在显著遗传分化。     

清水江鲤基于微卫星标记和形态指标的遗传分析

利用12个微卫星标记对鲤(Cyprinus carpio)的4个野生群体 [清水江鲤、太湖鲤、黄河鲤(C.carpio haematopterus)和黑龙江鲤(C.carpio amurensis)] 和2个选育群体 [福瑞鲤(C.carpio var. FFRC)和松浦镜鲤(C. carpio var. specularis 'Song-pu')] 共208尾个体进行遗传分析。结果显示,12个位点共检测到341个等位基因,平均等位基因数为28.67,其中1个位点(HLJ1127)检测到正向选择压力;选育群体的遗传多样性参数普遍低于野生群体,其中松浦镜鲤群体的各项参数均值最低(N_a=6.82,H_o=0.54,PIC=0.50),清水江鲤群体的各项参数均值最高(N_a=21.25,H_o=0.80,PIC=0.91);分子方差分析显示,整体遗传变异主要来自群体内,但群体间呈极显著遗传分化(P<0.01);基于群体Nei's遗传距离的UPGMA聚类树和PCoA分析表明,鲤4个野生群体间遗传距离较近,而与2个人工选育群体间遗传距离较远;基于个体遗传结构及PCoA分析显示部分野生个体遗传结构比较混杂,而选育个体的遗传结构则相对单一。研究表明,中国鲤野生资源具有较高的遗传多态性,而人工选育群体维持着较纯的遗传种质。     

濒危植物沉水樟ISSR-PCR反应体系的建立与优化

为从分子水平上探讨濒危物种沉水樟种质资源的保护机制,以其基因组DNA为模版,开展ISSR-PCR反应体系的研究,对各反应因子水平、引物退火温度和循环参数进行优化,确定适于沉水樟ISSR-PCR反应的最佳体系：20μL反应体系中各反应物的最适含量为模板75ng、引物04μmol/L、dNTP 200μmol/L、Taq酶1.25U、Mg2+ 1.5mmol/L;扩增程序为：94℃预变性7min;94 ℃变性30s,530~580 ℃退火45s,72 ℃延伸90s,45个循环;72℃延伸7min,4 ℃保存。     

天水市规模化鸡场禽白血病流行病学调查

为了解甘肃省天水市鸡场禽白血病的流行情况,笔者采用实时荧光PCR方法对2020—2021年采集的24家规模化鸡场的480份鸡泄殖腔拭子进行病原学检测。结果显示,在24家规模化鸡场中,18家鸡场呈阳性,阳性率占73.33%;在480份样品中,203份样品呈阳性,阳性率达42.29%。不同用途的鸡对禽白血病具有不同的感染率,在360份蛋鸡样品中,138份为阳性,阳性率为38.33%;在120份肉鸡样品中,65份为阳性,阳性率达54.17%。结果表明,天水市规模化鸡场普遍流行禽白血病病毒,同时肉鸡的感染率高于蛋鸡的。