猪德尔塔冠状病毒荧光定量PCR检测方法的建立

根据GenBank登录的猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)毒株序列设计特异性引物,建立了检测PDCoV的实时荧光PCR方法。该方法在标准品浓度2.49×10~8~2.49×10~2 copies/μL范围内线性关系良好;特异性试验显示,其他几种常见猪病病毒未见典型扩增曲线;敏感性试验显示,最低检测下限为24.9 copies/μL;重复性试验显示,批内和批间变异系数小于3%。用该方法检测62份猪腹泻粪便样品,相比常规PCR方法,前者的检出率更高;两种方法检测1 168份进境活猪粪便拭子样品,结果均为阴性。结果表明,本研究所建立的方法适用于国内猪场的PDCoV的检测和进境活猪的监控检测,也可作为PDCoV的诊断及分子流行病学调查的技术手段。     

订奶粉,送金条,砸金蛋!澳华引领200位养殖大户、经销商向"钱"冲

"澳华,正异军突起!"2020年1月10日,由澳华集团主办的"湛江澳华2020年高效养殖技术论坛"在湛江海洋国际酒店召开,广东海洋大学水产学院教授杜国平、澳华集团西南大区总经理林书良、常务副总经理李德广、集团研发中心所长杨阳等嘉宾与领导,以及来自湛江对虾养殖核心区域的近200位养殖大户、经销商代表汇聚一堂。会议前夕,本刊记者特邀采访了澳华集团西南大区总经理林书良,就现阶段澳华在西南大区的发展情况以及今后的市场规划进行了详细阐述。     

价格战是一定的!2020年虾苗需求量预计减少10％～20％,苗价下调是趋势

长期看,将来的虾苗价格一定是下降的,随着国内种虾育种技术的突破和进步,种苗企业生产成本下降,那么价格一定是下降的。随着2020年的到来,2019年的对虾养殖,成败已成定局。如今,华南冬造虾陆续上市,江浙小棚正开始紧张忙碌,华北及内陆地区正养精蓄锐。虽然距离农历年还有几天,但对已经开始忙碌生产的虾苗企业来说,战备战已经打响。     

对虾冬季养殖的关键技术措施(下)

(1)水色发暗或浑浊等现象:这种情况多发生在冬棚淡水养殖区,中后期水中绿藻及蓝藻大量繁殖,水色多呈深绿色或暗绿色。如果蓝绿藻大量繁殖,池水过浓,可用漂白粉0.5～1克/米3杀除部分藻类,但用量一定要准确,以免藻类大量死亡影响虾池水质。由于水中有些藻类大量生长,必需微量元素缺乏,影响到其他藻类的正常繁殖生长,而出现藻类老化、死亡,或者某些     

前进中的中国虾苗业

早在几年前,国内的苗种企业就已经意识到亲虾严重依赖进口这个问题。近年来有关科研单位、一些龙头企业也已经开展了南美白对虾的家系选育工作,但效果似乎不大明显。粤海饲料集团董事长郑石轩在2010年第二届对虾产业论坛时的演讲中就特别指出,虽然现在很多国家级、省级良种场搞亲虾选育,但目前仅仅是停留在商品种苗层面。而作为企业而言,进行南美白对虾选育工作也要承担巨大的风险。能不能成功?要多久才能成功?     

2013年珠三角冬棚虾养殖浅谈

回首2012，目睹2013，对于南美白对虾养殖从业者来说，风风雨雨一路走来，真可谓一家欢喜九家愁。EMS早期死亡偷死综合症、白便肠炎、蓝藻大爆发………这一系列的打击让人无所适从。但养殖再差，也没有阻止养殖者前进的步伐。     

屠宰企业非洲猪瘟PCR自检中常见问题与对策

生猪屠宰企业是非洲猪瘟疫情防控的重要环节,是切断非洲猪瘟传播途径的重要环节,也是保证屠宰企业出厂肉品质量安全主要关卡。目前,我县屠宰企业在开展非洲猪瘟PCR检测过程中,也陆续出现了一些问题,本文对这些问题进行了分析和总结,并提出自己相应对策,供参考。     

牛产气荚膜梭菌荧光定量PCR检测方法的建立及应用

为建立特异性强、灵敏度高、重复性好的产气荚膜梭菌荧光定量PCR检测方法，本试验根据产气荚膜梭菌的plc基因保守序列设计合成特异性引物探针，摸索其最佳反应条件，进行灵敏性、特异性、重复性以及临床样本验证。结果表明：建立的方法具有较好的灵敏性、特异性及重复性，最低检出限度为8.26×10¹拷贝/μL，在8.26×10³～8.26×10⁸拷贝/μL的范围内具有良好的线性关系，同时不与其他致病菌发生交叉反应，组间及组内的变异系数均小于4%，应用比方法在采集的300份临床样品中检出24份阳性样品，与常规细菌分离鉴定方法结果符合率为94.12%。说明试验成功建立了牛产气荚膜梭菌荧光定量PCR检测方法，这将为牛产气荚膜梭菌的快速诊断提供技术支持。     

猪SENP1基因克隆、生物信息学分析与表达研究

试验旨在对猪SUMO特异性蛋白酶1(sentrin-specific protease 1,SENP1)基因CDS区进行克隆和生物信息学分析,并探讨SENP1基因在乙脑病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)感染PK15细胞后的表达情况。根据GenBank中公布的猪SENP1基因预测序列(登录号:XM_013997974.2)设计特异性引物,通过RT-PCR和T/A克隆技术对猪SENP1基因CDS区序列进行克隆测序,并进行生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR分析猪SENP1基因在JEV感染PK15细胞不同时间点(0、12、24、36、48 h)的表达情况。结果显示,猪SENP1基因CDS序列全长2 034 bp,共编码677个氨基酸。序列比对和系统进化树分析结果表明,猪SENP1蛋白序列和山羊、犬、人、牛的相似性分别为94.8%、94.2%、93.9%和93.8%,说明在这些物种中SENP1的保守性较强;猪与犬的SENP1分子亲缘关系较近。生物信息学分析结果显示,猪SENP1蛋白相对分子质量为76 825.76,等电点为8.53,体外半衰期为30 h,不稳定系数为53.59,总平均亲水指数为－0.622。SENP1蛋白不含信号肽序列,无跨膜结构域。二级结构分析结果显示,SENP1蛋白中α-螺旋、无规则卷曲、延伸链和β-转角分别占31.31%、46.68%、16.25%和5.76%。三级结构分析结果显示,猪SENP1蛋白中存在8个α-螺旋区和7个β-转角区。实时荧光定量PCR结果显示,猪SENP1基因在JEV感染的PK15细胞中呈现上调表达趋势,其中在感染后48 h SENP1基因表达量显著高于对照组(P<0.05)。本试验结果为后续深入研究SENP1基因功能提供了参考。     

长链寡核苷酸生物合成方法的研究

化学合成长链寡核苷酸面临许多困难，研究通过对长链寡核苷酸生物合成方法的研究，成功合成并纯化了长链寡核苷酸，其长度达到146nt，并且其序列没有错误。生物合成的基本方法是：首先用一对PCR引物扩增DNA模板，