油料所两项科研成果荣获2004年度国家科技进步二等奖

近日，从国家科技奖励大会凯旋而归的中国农业科学院油料研究所研究员李云昌、李培武双双捧回了由国家领导人亲自颁发的烫金荣誉证书。他们分别主持完成的“高产优质抗(耐)病广适性油菜新品种中油杂2号的选育与应用”和“双低油菜芥酸硫甙定量速测技术及仪器的研制与应用”两项科研成果获得了2004年度国家科技进步奖二等奖。这也是油料研究所继2001年同期获得两项国家奖励后又一次登上了国家领奖台。     

辣椒CaDREB3基因的克隆和表达特性分析

从构建的辣椒c DNA文库中筛选阳性克隆,测序并获得辣椒CaDREB3基因,研究该基因的亚细胞定位、瞬时表达及组织表达特性,揭示CaDREB3的功能及其在植物抗逆过程中的分子机制。应用预测软件对其进行功能及生物信息学分析,利用q RT-PCR分析CaDREB3基因的瞬时表达及在不同组织中的表达特性,并以基因枪轰击洋葱表皮的方法,对CaDREB3基因进行亚细胞定位分析。结果表明,辣椒CaDREB3长度为1 997 bp,含有1071bp的完整的开放阅读框,编码357个氨基酸,含有ERF亚族的AP_2/ERF保守结构域,与西红柿(NP_001234707.1)、马铃薯(AET99101.1)及拟南芥(NP_177931.1)具有较高的氨基酸相似性,其中与西红柿的相似性最高,达83%。亚细胞定位表明该基因位于细胞核,瞬时表达表明CaDREB3可以和GCC-box结合,q RTPCR检测表明,CaDREB3基因的相对表达量在辣椒茎、叶和果实中表达量较高。实验明确了辣椒CaDREB3基因亚细胞定位信息和组织表达情况,为进一步研究其功能及分子机制提供依据。     

TaqMan-MGB荧光定量IC/TC-RT-PCR检测菜豆荚斑驳病毒

菜豆荚斑驳病毒(Bean pod mottle virus,BPMV)是我国重要的检疫性有害生物,BPMV传入的风险随大豆进境数量增多而加大。本文针对菜豆荚斑驳病毒,以大豆种子提取液为材料,分别建立了TaqMan-MGB荧光定量IC-RTPCR和TaqMan-MGB荧光定量TC-RT-PCR快速检测方法。根据GenBank公布的BPMV外壳蛋白基因序列,选择其保守区域,设计1对特异性引物和1条TaqMan-MGB探针,测定了TaqMan-MGB荧光定量IC-RT-PCR和TaqMan-MGB荧光定量TC-RT-PCR方法的特异性和灵敏度,并将TaqMan-MGB荧光定量IC-RT-PCR、TaqMan-MGB荧光定量TC-RTPCR、IC-RT-PCR和TC-RT-PCR 4种检测方法的灵敏度进行比较。结果表明:所建立的两种检测方法特异性良好;TCRT-PCR的灵敏度为10-1倍病毒提取液原液;IC-RT-PCR和TaqMan-MGB荧光定量TC-RT-PCR灵敏度相当,为10-3倍病毒提取液原液;TaqMan-MGB荧光定量IC-RT-PCR灵敏度最高,为10-5倍病毒提取液原液,是IC-RT-PCR和TaqMan-MGB荧光定量TC-RT-PCR检测方法的102倍,是TC-RT-PCR检测方法的104倍;两种检测方法均能较好应用于实际大豆样品的检测。本文所建立的TaqMan-MGB荧光定量IC/TC-RT-PCR检测方法利用抗原特异性或试管非特异性捕捉病毒粒子,无需提取RNA,为进境大豆种子上BPMV的检测提供了稳定、快速、简便的技术依据,其较高的灵敏度和特异性具有较好的应用价值。     

超级杂交中稻Y两优087的关键叶龄期及精确定量栽培技术

以迟熟超级杂交中稻Y两优087为材料,于2013—2015年在同一地点连续作中稻适时早播,通过对其叶龄和分蘖动态等进行系统的苗情观测,掌握了该品种与季节同步的有效分蘖临界叶龄期、高峰苗期、穗轴分化期、枝梗分化期、拔节期和颖花分化期、花粉母细胞形成与减数分裂期和抽穗结实期等8个关键叶龄期及其群体发育特征,介绍了其精确定量栽培技术。     

以omp基因为靶标的3 种检测方法对 柑橘黄龙病菌检测效果比较

为了比较以omp 基因为靶标的常规PCR、LAMP 检测方法（Loop-mediated isothermal amplification）和实 时荧光定量PCR 方法在实际检测中对柑橘黄龙病的检测效果,比较了3 种检测方法对柑橘黄龙病菌omp 基因检测 的灵敏度,并运用3 种检测方法对采自广东省田间11 个本地柑橘品种上疑似感染黄龙病的多个病样进行实际检 测。结果显示院3 种检测方法的灵敏度有所不同,依次为常规PCR相似文献   

水稻氮肥精确定量试验

不同的土壤类型和土壤肥力,水稻的生长情况不同,其潜力也存在差异,通过试验可以得出,处理1的吸氮量为11.75g/亩,处理2的吸氮量为10.12kg/亩,即土壤供氮量为10.12kg/亩,当季氮肥利用率为25.3%,处理1的水稻产量比处理2的产量高108.6kg/亩,增产比为18.2%,说明氮肥对水稻的产量及产量性状有促进作用。     

荧光定量PCR检测猪链球菌2型主要毒力因子方法的建立

[目的]建立荧光定量PCR检测猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2,SS2)、溶菌酶释放蛋白(Muramidase-released protein,MRP)和胞外因子(Extracellular protein factor,EF)3种主要毒力因子的方法。[方法]根据cps2j、mrp和ef基因的基因序列,分别设计并合成3对引物及相应的Taqman探针,其中cps2j和mrp的5'端标记FAM荧光发射基团,ef的5'端标记HEX荧光发射基团,3种基因的3'端都标记BHQ1淬灭荧光基团。通过优化反应体系和程序,建立了一种基于Taqman探针法的荧光定量PCR方法检测上述3种主要毒力因子,其中cps2j单独检测,mrp与ef的实行双重荧光PCR方法检测。[结果]cps2j、mrp和ef的最低检测限分别为12、51和51 CFU,灵敏度很高;与其他病原菌无交叉反应,重复性及特异性均较好;此外,整个检测过程在60 min内即可完成。[结论]该试验所建立的双重荧光定量PCR方法的敏感性、重复性及特异性均较好,可用于同时快速检测猪链球菌2型3种主要毒力因子。     

神经生长因子mRNA在鹅等级前卵泡中的表达

采用相对荧光定量PCR(RT-PCR)相对标准曲线方法,对籽鹅和卡洛斯鹅不同产蛋时期初级卵泡、小白卵泡、中白卵泡和大白卵泡中神经生长因子(NGF)mRNA的表达量进行研究,同时检测血液中促卵泡素(FSH)的含量,并与NGFmRNA表达量进行相关性分析。结果表明:产蛋高峰期,籽鹅初级卵泡中NGF mRNA表达量极显著高于其他卵泡(P0.01),卡洛斯鹅初级卵泡中NGF mRNA表达量显著高于中白卵泡(P0.05),其余卵泡间差异不显著。产蛋末期,籽鹅初级卵泡中NGF mRNA表达量极显著高于中白卵泡和小白卵泡(P0.01),大白卵泡NGF mRNA表达量极显著高于中白卵泡(P0.01),卡洛斯鹅初级卵泡NGF mRNA表达量极显著高于中白卵泡和小白卵泡(P0.01),大白卵泡极显著高于其他卵泡(P0.01)。2种鹅产蛋高峰期血液中FSH表达水平高于产蛋末期(P0.05);籽鹅和卡洛斯鹅的小白卵泡NGF mRNA表达量与血液中FSH的表达水平呈显著正相关(P0.05),在大白卵泡中两者呈负相关,其他卵泡呈正相关。     

食品中金黄色葡萄球菌定量检测方法比较研究

[目的]探求一种适应食品微生物实验室检验要求的快速准确的方法.[方法]比较研究Baird-Parker平板法、MPN法、科玛嘉金黄色葡萄球菌显色培养基法和PettifilmTM测试片法这4种定量方法对金黄色葡萄球菌的选择性、灵敏度和在食品中的应用.[结果]试验显示,4种方法检测金黄色葡萄球菌选择性良好;MPN法、显色培养基法和纸片法灵敏度比Baird-Parker平板法稍高;4种方法应用在食品检测中,金黄色葡萄球菌检出率无显著差异.因此可选择显色培养基和PetrifilmTM测试纸片法作为日常检验的辅助手段,以提高检测灵敏度、缩短检验周期.[结论]研究可为食品检测方法的研究及应用积累一定的经验,为今后金黄色葡萄球菌的检测工作提供一定参考.     

激光诱导击穿光谱分析新鲜桔叶重金属元素铬

为使激光诱导击穿光谱技术(LIBS)能实际应用于环境污染相关的领域,选择新鲜桔叶片样品作初步实验研究。该实验用纳秒级Nd:YAG激光器(波长:1 064 nm)为光源,在实验室自然大气环境下诱导新鲜桔叶片产生等离子体,研究了延时时间和激光能量对新鲜桔叶片中铬元素激光诱导击穿光谱特性的影响,综合评价其信背比和信号强度得到了相应的最佳检测条件:最佳延时1.6μs,最佳激光能量120 mJ。建立了Cr元素的定标曲线,并且定量分析了在最佳实验条件下样品中铬元素浓度。结果表明Cr元素浓度在50～800μg/mL范围内,Cr元素含量和光谱相对强度之间有较好的线性关系。实验也表明LIBS技术是一种快速检测新鲜植物叶片中重金属元素含量的有效工具。