一个新的水稻逆境响应基因OsMsr1的表达与克隆

为深入了解植物的逆境反应机理和发现新的水稻耐逆基因, 采用Affymetrix水稻表达芯片(含51 279个转录本)分析了超级稻两优培九母本培矮64S不同生长发育时期、不同组织器官全基因组在低温、干旱、高温逆境胁迫下的表达水平, 筛选出众多表达水平显著升高与降低的基因。OsMsr1 (Oryza sativa L. multiple stresses responsive gene 1, GenBank登录号为EU284112) 是其中一个受高温、低温与干旱诱导、在各生长发育时期与组织器官均显著上调的基因, 用实时定量PCR方法对其表达水平进行了进一步的分析, 所得结果与基因芯片结果基本吻合, 因此, 此基因为一多逆境响应基因。用RT-PCR方法扩增获得了包含其完整ORF (open reading frame)的cDNA克隆。根据其ORF序列进行预测, 此基因编码一个包含89个氨基酸残基的小分子蛋白, 分子量约为10 kD, pI约为5。搜索有关数据库, 在水稻、玉米、小麦与拟南芥中找到有高相似性的基因, 但功能未知, 也未发现相同与类似的已知功能的基因保守结构域。对其可能的启动子序列分析, 发现5个与逆境反应有关的顺式作用元件。因此, 我们认为该基因为一新的水稻耐逆候选基因, 进一步的研究正在进行。     

朗德鹅肌肉生成抑制因子基因（MSTN）的克隆及其表达量与日粮能量、血清IGF-I和GH的关系

 【目的】采用反转录－聚合酶链反应（RT-PCR）技术,克隆朗德鹅肌肉生成抑制因子基因（MSTN）,研究MSTN基因表达和日粮能量及其部分血清激素含量的相互关系,了解MSTN的功能,为水禽分子营养和分子育种提供基础资料。【方法】从朗德鹅（Anser anser）的腿肌中抽提总RNA,用两步法RT-PCR扩增出MSTN基因的cDNA编码序列,以pGEM-T Vector为载体,将该片段克隆到大肠杆菌（Escherichia coli）中。通过筛选阳性克隆,双酶切鉴定后测序;以MSTN基因的克隆为基础,以β-actin为内标,构建优化的半定量RT-PCR方法,研究高中低（A:13.38MJ•kg-1、B:12.13MJ•kg-1、C:10.87MJ•kg-1）3种不同能量对朗德鹅21日龄和70日龄2个时期,肌肉组织MSTN基因表达的差异;同时用放免法测定21、70日龄的血清GH和IGF-I浓度。【结果】克隆朗德鹅MSTN基因cDNA的部分序列,其片段大小为1 128bp,编码375个氨基酸组成的多肽,与已发表的鸡、鸭、鹅的MSTN 核苷酸相似性分别为94%、94%、99%;氨基酸的相似性分别为98%、97%、98%;21日龄时,朗德鹅公鹅、母鹅MSTN表达量差异不显著;70日龄时朗德鹅公鹅MSTN的表达量情况为能量A＞C＞B,朗德鹅母鹅MSTN的表达量情况为C＞B＞A;对于朗德鹅21～70日龄阶段的生长,MSTN基因的表达量和血清IGF-I的变化基本一致;与血清GH含量之间并不存在很大关联,GH和能量的高低呈正相关。【结论】日粮能量对21日龄后朗德鹅MSTN基因的表达有影响,且MSTN基因表达量和血清IGF-I具有相关性,和血清GH无较大相关性。     

荧光定量PCR方法检测禽白血病病毒的研究

根据禽白血病病毒各亚群pol基因序列相对保守的特点,在其保守区内设计了1对引物,进行RT-PCR反应,扩增产物为214 bp,将该产物连接T载体作为Real-time PCR反应的标准品,利用SYBR Green I染料进行Real-time PCR反应,建立了标准曲线,并进行反应灵敏性、特异性和重复性试验。试验结果表明：标准曲线线性关系R值均为0.999以上,检测极限约为8.21E＋01拷贝数质粒DNA,比RT-PCR灵敏100倍以上;特异性分析表明只有禽白血病病毒能检测到特异性的熔解度峰值;批内和批间重复性试验的变异系数均小于5%;用已建立的方法对人工感染SPF鸡的不同组织进行3次重复检测,病毒RNA的检出率为100%。以上结果表明：该方法稳定可靠,为禽白血病的早期诊断建立了特异、灵敏和快捷的方法。     

咖啡碱研究进展

本文概括了咖啡碱的生物来源、化学结构,并介绍了咖啡碱现有的分离提取与定量检测方法。     

不同气体组分中臭氧浓度衰减速率初探

在(20±0.5)℃条件下,将设定的6种不同气体组分中通入一定量的臭氧,用磺-碘化钾吸收、硫代硫酸钠滴定法测定臭氧浓度的变化,并确定衰减速率.结果表明,在N2和4.4%CO2 95.6%N2中,臭氧浓度的衰减速率显著低于供试的其他4种气体组分(3.5%O2 99.5%N2:60%O2 94.0%N2;3.1%O2 4.4%CO2 92.5%N2;大气中的空气)中的衰减速率.     

利用不同实时定量PCR方法分析相对基因表达差异

利用实时荧光定量PCR方法分析目标基因转录本之间的表达差异,目前常用的分析实验数据的有绝对定量和相对定量方法。为了克服绝对定量方法的繁琐和简化相对定量的分析方法,分别利用2^-ΔΔCT、2^-ΔCT和标准曲线法对水稻OsRDB1基因在不同化学试剂和激素处理下的表达差异进行了分析,发现2^-ΔΔCT必须引入标准的看家基因作为参考,计算方法繁琐,计算结果受扩增效率影响;而利用2^-ΔCT和标准曲线法计算方便,节省定量PCR试剂,但其结果易受到RNA浓度测量准确率的影响,其中标准曲线法引入斜率消除扩增效率的影响,最能测得实际的原始拷贝数差异。     

水分亏缺条件下玉米根系TIP1-1基因的表达

以一组具有不同抗旱性状的玉米遗传材料杂交种户单4号(抗旱)及其父本803（不抗旱）,母本天四（抗旱）为供试材料,以微管蛋白基因为内参基因,水通道蛋白基因TIP1-1为检测基因,在PEG-6000模拟水分亏缺条件下,采用半定量逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）体系检测TIP1-1基因在玉米根系中的表达情况。在正常     

植烟土壤中枯萎病菌和黑胫病菌的快速检测方法

[目的]枯萎病和烟草黑胫病是植烟土壤中最为常见的主要土传病害,为害严重,建立植烟土壤中两种病原菌尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)和烟草疫霉菌(Phytophthora parasitica var.nicotianae)快速检测方法,为烟草种植过程中病害流行与治理提供技术支持,保障烟草行业的稳定生产....     

茶氨酸的衍生化及毛细管电泳定量技术

采用胶束电动力学毛细管电泳技术定量茶氨酸,以2,4-二硝基氟苯为衍生化试剂,建立茶氨酸定量的新方法。运行缓冲液为pH9.8的0.03βmol/L四硼酸钠缓冲液体系,分离电压为28kV,分离温度为17℃,在360βnm下进行检测。研究了不同pH、反应时间、反应温度、缓冲液浓度对衍生化反应的影响,确立了衍生化反应的最佳条件。证实了4℃和25℃环境下衍生化产物可以稳定保存5天。测定了茶氨酸衍生化方法的性能指标：线性范围为0.2~5βmmol/L（r²=0.993）,最低检测限为0.05βmmol/L。     

木材磨削加工方式的合理选用

木材加工工艺中 ,磨削加工 (又称砂光 )的功能和作用一是进行精确的几何尺寸校准加工 ,使基材厚度误差减小到最小限度 ;二是对木制品表面进行修整加工 ,以获得平整光洁的装饰面和最佳的装饰效果。前者一般采用定厚磨削加工方式 ,后者采用定量磨削加工方式。根据被加工对象和加工工艺的最终质量要求不同 ,磨削加工又分为 :基材尺寸精确校准、基材表面修整和装饰表面修整三种形式。其中基材尺寸精确校准加工要使用硬接触辊式强力定厚磨削加工方式 ;表面修整加工需使用整体压垫式的定量磨削加工方式 ;在有特殊要求的表面修整加工时 ,如对存在厚…