双芽巴贝斯虫TaqMan实时荧光PCR检测方法的建立

根据双芽巴贝斯虫(Babesia bigemina)18SrRNA基因的保守序列,设计特异性引物和TaqMan探针,建立了检测双芽巴贝斯虫的实时荧光PCR方法。该方法灵敏度高,最小检出量为1.1×101 copies/μL的标准质粒,比常规PCR灵敏1 000倍;重复性好,组内和组间重复性试验的变异系数分别为0.21%¹.14%和0.31%1.14%和0.31%¹.50%,均小于2%;特异性强,对牛常见的其他两种血液原虫和健康血液无交叉反应。用建立的实时荧光PCR和常规PCR分别对30份临床样品进行检测,实时荧光PCR和常规PCR的检出率分别为30%和16.7%。结果表明,本研究建立的荧光TaqMan实时荧光PCR方法可以灵敏、准确、快速检测双芽巴贝斯虫感染,将为蜱传牛梨形虫病的流行病学调查和防制提供新的方法。     

农杆菌介导香菇URA3基因RNAi体系构建

选择香菇(Lentinula edodes)内源乳清酸核苷-5'-单磷酸脱羧酶基因(URA3)为沉默靶基因,以其功能结构保守区域451～884 bp处的反向互补序列为干扰片段,将pCAMBIA1390改造为发卡结构载体HpV、GPiE改造为双启动子载体DpV-2.采用农杆菌介导转化法侵染小米粒培养基培养的香菇菌丝,通过...     

猪CACNA1S基因的多态性与胴体及肉质性状的相关分析

以金华猪（40头）、皮特兰猪（30头）及其杂交产生的金皮F2代资源猪群（126头）为材料,对钙离子通道主亚基α1的编码基因（CACNA1S）第44外显子A187G突变、第37内含子A37G突变、T179C突变作PCR—RFLP检测（内切酶依次为Cfr42Ⅰ、XbaⅠ、Eco72Ⅰ）,分析其对胴体及肉质性状的遗传效应。结果表明：酶切位点Eeo72J的AA基因型对眼肌面积和肉色（L）存在极显著影响（P〈0．01）,BB基因型对后腿肌肉重存在极显著影响（P〈0．01）和大腿pH存在显著影响（0．01〈P〈0．05）;位点Xba Ⅰ对背膘厚（中）存在显著影响（0．01〈P〈0．05）,但AA、AB、BB基因型间效应差异不显著（P〉0．05）;位点Cfr 42Ⅰ仅在金华、皮特兰纯种猪群中存在多态性,而在屠宰猪群金皮F2代则表现为BB单态型。     

崇阳县猪伪狂犬病毒感染调查

为了解湖北省崇阳县猪伪狂犬病毒的感染状况,应用PCR技术对来自崇阳县不同规模7个种猪场的126份公猪精液进行了猪伪狂犬病毒(PRV)的检测,阳性率为0;同时采取了这7个已使用猪伪狂犬病病毒g E基因缺失疫苗免疫血清420份,采用了猪伪狂犬病基因缺失鉴别ELISA方法进行了血清学抗体监测,结果检出猪伪狂犬g E抗体阳性10份,阳性率为2.37%。结果表明,崇阳县猪群中存在猪伪狂犬病野毒感染,但感染率较低,不同猪场感染差异大。     

4种鸡源致病性沙门氏菌多重PCR检测方法的建立及应用

建立一种多重PCR方法,同时检测肠炎、鼠伤寒、鸡白痢/鸡伤寒沙门氏菌。针对沙门氏菌属特异性invA基因、肠炎沙门氏菌特异性Sdf I序列、鼠伤寒沙门氏菌特异性STM4497基因、鸡白痢/鸡伤寒沙门氏菌flhB基因设计引物,对引物浓度和反应条件进行优化,并对多重PCR特异性和灵敏度进行评估。利用建立的多重PCR方法调查河北地区蛋种鸡生产链中沙门氏菌流行现状。研究建立的多重PCR方法可快速、特异性鉴别肠炎、鼠伤寒、鸡白痢/鸡伤寒沙门氏菌,最低检出限为100 CFU细菌和0.5 ng基因组DNA。沙门氏菌流行病学调查显示,肠炎沙门氏菌是河北地区蛋种鸡生产链中沙门氏菌主要流行血清型。成功建立鉴别肠炎、鼠伤寒、鸡白痢/鸡伤寒沙门氏菌的多重PCR方法,对沙门氏菌流行病学调查及临床快速诊断具有重要意义。     

漓江水陆交错带土壤粒径分形维数与水力性质

分析漓江水陆交错带土壤粒径分形维数与水力性质,为漓江流域水陆交错带土壤迁移、沉积和土壤水文循环模拟提供参考依据。以漓江5个典型水陆交错带样地为研究对象,测定土壤基本物理性质和水力参数,计算土壤粒径分形维数,基于相关分析、冗余分析和逐步回归分析探讨分形维数与水力性质的关系。结果表明,漓江水陆交错带土壤粒径主要集中在0～400μm,土壤质地偏细,黏粒含量较高;土壤粒径分布范围中体积分数占比大的颗粒占主导地位,土壤粒径主要分布在密集区域,但粒径分布稀疏区的土壤颗粒对环境因子更敏感;单重分形维数（D）、信息维（D(1)）、关联维（D(2)）、信息维/容量维（D(1)/D(0)）、谱宽（Δα）与饱和含水量、田间持水量、总孔隙度、VG模型和BC模型拟合的饱和含水量参数（VG-θs、BC-θs）呈显著负相关,与土壤容重呈显著正相关;D、D(1)、D(2)、D(1)/D(0)与土壤砂粒含量呈极显著负相关,与土壤颗粒比表面积、黏粒含量、粉粒含量呈极显著正相关;土壤基本物理性质可解释分形维数95.84%的变异,砂粒含量和总孔隙度是影响D值变化的主要因素,砂粒含量是影响D(1)、D(2)、D(1)/D(0)...     

猪病诊断和防治中PCR技术的应用研究

生猪规模化、集约化养殖发展背景下,猪病呈现出高发趋势,轻则影响生猪健康生长发育,重则导致死亡,因此积极做好猪病诊治工作尤为重要.猪病诊断与防治中,PCR技术发挥着重要作用,能够显著提升猪病诊治效率与准确性,为猪病防治工作的开展提供便利与帮助.基于此,本文首先概述了PCR技术;其次分析了猪病诊断与防治中PCR技术的具体应...     

一株基因Ⅶ型新城疫病毒的分离及分子鉴定

从一起新城疫暴发的病例中分离出1株新城疫病毒（NDV），命名为铜山分离株（TS）。运用RT-PCR技术，克隆了该分离株F基因的重要功能片段（约0.5kb)，并进行了序列测定。序列分析表明，TS分离株在F蛋白裂解位点的氨基酸顺序为^112-R-R-Q-K-R-F^117，与NDV强毒株特征相符，且具有101外的K（赖氨酸）和121处V（缬氨酸）2个特征性氨基酸，与基因Ⅶ型NDV的特性完全相符。