Antimicrobial Susceptibility and Characterization of Outer Membrane Proteins of Aeromonas hydrophila Isolated in China

Aeromonas hydrophila isolates from clinical cases （n=43） were tested against 8 antimicrobial agents and typed by outer membrane protein （OMP） pattern by using sodium dodecyl sulfate gel electrophoresis. All isolates were resistant to ampicillin （MICs, ≥16 μg mL-1） and sulfamonomethoxine （MICs≥64 μg mLl）, but susceptible to norfloxacin （MICs,≤0.5 μg mL-1）. There was a high incidence of resistance to erythromycin （90.70%） and tylosin （93.02%）, while a low incidences of resistance to ciprofloxacin （2.33%）, enrofloxacin （2.33%） and florfenicol （4.65%）. Six different outer membrane protein patterns were found among 34 isolates by analyzing proteins in the range of 22 to 50 kDa, other than 9 isolates with their respective profiles. The strains with the similar OMP profiles had similar resistances. Compared with the other strains from the same OMP patterns, NB-1, A.Pun and MR-1 had lacked the proteins in the range of 30 to 45 kDa and their resistance to florfenicol substantially increased. It is speculated that the outer membrane protein changes might correlate with decreased susceptibility to florfenicol in the three strains. Some strains which showed completely identical OMP types had a little difference in their resistance to fluoroquinolones, indicating that there might be other factors that were involved in the antimicrobial resistance of A. hydrophila.     

嗜酸乳杆菌细胞壁肽聚糖的分离提取

分别采用超声波法、溶菌酶法、三氯乙酸法对嗜酸乳杆菌细胞壁肽聚糖进行分离提取.结果表明超声波法的最优组合为超声功率400 W,超声时间30 min,水浴温度40℃,肽聚糖得率10.2%;溶菌酶法的最优组合为溶菌酶添加量4 mg/mL,水浴温度55%,作用时间5 h,pH 7,肽聚糖得率10.0%;三氯乙酸法肽聚糖得率15.8%.通过多重比较,最终确定采用三氯乙酸法提取嗜酸乳杆菌细胞壁肽聚糖.     

新疆罗布泊嗜碱细菌的分离及其生理学特性的初步研究

从新疆罗布泊“大耳朵”地区的湖盆沉积物中分离得到151个细菌菌株。研究比较了不同培养基的分离效果,测定了嗜碱细菌生长的pH值范围,对不同碱性物质KOH、K2CO3、NaOH、Na2CO3的选择性和对NaCl、KCl的耐受性。结果表明,添加了罗布泊盐壳浸提物的培养基更有利于嗜碱细菌的富集培养和分离。分离菌株中专性嗜碱菌、兼性嗜碱菌和耐碱菌的比例分别为29.8%,39.7%和30.5%。54.3%的嗜碱菌菌株对4种碱性物质具有广泛的适应性,13.2%菌株对Na^＋有一定的依赖性,对含K^＋碱性物质敏感,只有1.9%的菌株对CO32-碱性物质敏感。77.1%嗜碱细菌可以耐受7%-15%的NaCl和10%-20%的KCl,具有较强的耐盐特性,其中是否存在嗜盐碱双极端因子的古菌,尚有待进一步研究确定。     

基于16S rDNA测序分析腹腔注射苦参碱的昆明小鼠肠道菌群结构

旨在通过16S rDNA测序技术分析腹腔注射苦参碱的昆明小鼠肠道菌群的结构。本研究将20只昆明小鼠随机分为2组,分别是苦参碱组(MT组)和阴性对照组(NC组),连续腹腔给药5 d,每天给药2次,收集各组粪便和各肠段组织,进行β多样性、Lefse及Metastats分析,qPCR检测差异菌种在各肠段的mRNA表达量,通过KEGG分析肠道菌群变化导致的代谢途径差异。稀释曲线结果显示,所测样本数据足以反映样品中物种多样性;β多样性分析结果显示,苦参碱可以调节肠道菌群的结构,Lefse及Metastats分析结果均显示,苦参碱显著增加了拟杆菌门(Bacteroidetes)、拟杆菌目(Bacteroidales)、Muribaculaceae、益生菌嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)的丰度,而显著减少了厚壁菌门(Firmicutes)、瘤胃菌科(Ruminococcaceae)和脱硫弧菌属(Desulfovibrio)的丰度。与Lefse及Metastats分析结果一致,qPCR结果显示苦参碱组小鼠粪便中嗜酸乳杆菌含量增加。同时,苦参碱可以增强嗜酸乳杆菌在各肠段的定植。通过KEGG分析发现,NC与MT组之间在聚糖的生物合成与代谢、运输与分解代谢等代谢途径存在显著差异。本研究结果表明,腹腔注射苦参碱可以显著改变昆明小鼠肠道菌群的结构,增加有益菌嗜酸乳杆菌在肠道中的定植,并造成了聚糖生物合成与代谢、运输与分解代谢等代谢途径的差异,为进一步揭示苦参碱发挥药效作用的机理奠定了基础。     

中华鳖致病性嗜水气单胞菌的分离鉴定及药敏试验

对江西省进贤县某中华鳖养殖场送检的2只患病中华鳖进行细菌分离,且对分离的细菌进行培养特性观察、生化特性鉴定、毒力因子检测、毒力基因PCR检测、实验动物攻毒及体外药敏试验。结果表明,从2只中华鳖肝脏分离到3株菌,均为革兰阴性短杆菌,其中体型稍大中华鳖2株,体型稍小中华鳖1株;经过实验动物感染试验得出3株菌都为强毒力致病菌;通过生化鉴定、毒力因子及PCR检测确定为嗜水气单胞菌;体外药敏试验结果显示,3株菌对头孢曲松都高度敏感,对利福平、甲氧苄啶、氨苄青霉素都不敏感。     

加丽素红在动物养殖业中的应用研究

随着现代家禽和水产动物饲养管理技术的不断提高,动物的生长速度成倍提高,饲养周期明显缩短,导致动物产品中色素自然沉积量下降,达不到其健康和自然生长条件下的色泽。而家禽皮肤、脚胫、蛋黄及水产动物体表和肌肉组织的色泽极大地影响了消费者的购买欲望,为了满足消费者对动物     

茶园害虫天敌资源调查研究

开发利用自然天敌资源,是发展害虫生态控制和综合防治的重要基础工作。近年来作者对安徽茶区天敌资源进行了调查研究,结果如下:(一)茶园天敌资源丰富,且对害虫有一定控制能力初步查明安徽茶园害虫天敌,多达300余种,包括多种捕食性和寄生性昆虫、蜘蛛、捕食螨和食虫鸟类,以及多种昆虫病毒、白僵菌、虫草和蚜霉等。许多天敌昆虫明显表现与害虫的发生有同步现象和制约效应。如异色瓢虫(Leisaxyridis)、大灰食蚜蝇(Syrphus corollae)等     

基于SCoT分子标记的黄河鲤抗嗜水气单胞菌不同群体遗传多样性分析

【目的】基于SCoT分子标记探讨黄河鲤遗传多样性与其抗嗜水气单胞菌能力的关系,为黄河鲤的抗病育种提供理论依据。【方法】通过腹腔注射对300尾黄河鲤进行人工感染嗜水气单胞菌,按死亡顺序分为最先死亡群体（FP）、最后死亡群体（LP）和存活群体（SP）,每个群体选取30尾。从80条SCoT引物中筛选出多态性好、重复性高、条带清晰的引物,对3个黄河鲤群体进行多态性扩增,采用PopGene32和Arlequin 3.5计算3个群体的等位基因数（Na）、有效等位基因数（Ne）、Nei’s基因多样性指数（H）及Shannon’s信息指数（I）等遗传参数,基于Nei’s遗传距离（Ds）利用MEGA 7.0中的非加权组平均法（UPGMA）构建系统发育进化树,并以Structure 2.3进行群体间的遗传结构分析。【结果】黄河鲤感染嗜水气单胞菌的死亡率为40.0%。从80条SCoT引物中筛选出18条扩增条带清晰、多态性好的引物,从3个黄河鲤群体中共扩增出103条条带,其中多态性条带97条,占94.17%。3个黄河鲤群体的Na范围为1.7961~1.8155,Ne范围为1.3828~1.4029,H范围为0.2258~0.2467,I范围为0.3453~0.3804;群体间的遗传分化指数（Gst）为0.0972,即90.28%的遗传多样性分布在群体内部。3个黄河鲤群体的遗传分化指数（Fst）为0.1299,属于轻度遗传分化;群体间的Ds分布在0.0248~0.0835,其中FP群体与SP群体的遗传距离最大。基于Ds的UPGMA聚类分析结果显示,FP群体和LP群体聚为一支,SP群体单独聚为一支;遗传结构分析结果表明,3个黄河鲤群体可分为2个亚群［抗病群体（SP）和易感群体（FP和LP）］。可见,通过黄河鲤死亡时间划分的群体与通过聚类分析及遗传结构分析得出的群体基本一致。【结论】黄河鲤抗嗜水气单胞菌的能力随着群体遗传多样性的增大而增强。因此,在黄河鲤抗病品种（系）选育过程中应保证足够的群体数量,在提高生长、营养等经济性状的同时保证一定的基因杂合度。     

Tth DNA聚合酶基因的分段PCR克隆及其表达载体构建

利用计算机软件对取自ＧｅｎＢａｎｋ的嗜热栖热菌ＴｈｅｒｍｕｓｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓＨＢ－８的ＤＮＡ聚合酶基因（Ｔｔｈ）进行分析,并设计了两组引物进行ＰＣＲ,分段克隆该基因。将两个ＰＣＲ产物同时连接到另一个克隆载体上,使之成为完整基因,最后将完整基因克隆到表达载体上,构建了Ｔｔｈ基因的表达质粒,使之适合在以大肠杆菌为寄主的细胞中进行表达。     

大丽轮枝菌弱致病力菌株Vd171对棉花黄萎病的诱导免疫作用及机制

【目的】明确大丽轮枝菌（Verticillium dahliae）弱致病力菌株Vd171对棉花黄萎病的诱导免疫效果及作用机制, 为探索棉花黄萎病生物防治新途径提供依据。【方法】以大丽轮枝菌弱致病力菌株Vd171为研究对象,温室苗期评估不同接种方法、接种时期、接种次数及接种体类型的诱导免疫效果;不同接种方法包括蘸根、灌根、茎部针刺、叶面喷雾和浸种,均采用Vd171分生孢子悬浮液（1×10⁷个分生孢子/mL）,蘸根、灌根和叶面喷雾为每钵10 mL,茎部针刺为每株0.2 mL,浸种时间为12 h;不同接种时期试验设置接种棉花黄萎病菌强致病力菌株Vd080前2、4、6、8 d及之后的1、2、4 d接种Vd171共7个处理;接种次数试验设置接种Vd080前接种Vd171 一次和两次;接种体类型采用Vd171的分生孢子悬浮液和查氏培养滤液。采用水培方法培育棉苗,先接种Vd171,4 d后接种Vd080GFP,不同时间取根组织,振荡冲洗Vd080GFP分生孢子,显微镜下计数,测定弱致病力菌株免疫后病原菌在棉苗根部的定殖量;接种Vd080GFP后第7天,PDA平板上分离棉苗下胚轴切段,检测病原菌在植株体内的扩展速度。取接种Vd171后不同时段的棉苗,采用qPCR方法检测植株内防御相关酶基因4CL、CHI、POD、PPO和PAL的表达量;测定POD、PPO、PAL和CHI的活性变化。将棉苗茎部做切片,用间苯三酚染色,显微镜下观察茎部维管束木质化情况;将棉苗叶片用DAB染色,观察叶片活性氧爆发情况。【结果】在接种大丽轮枝菌强致病力菌株Vd080前4 d接种Vd171,棉株的免疫效果最好,防治效果达到89.4%;几种接种方法相比较,以蘸根防治效果最好,为70.0%,其次是叶面喷雾,为54.3%,浸种和灌根分别为45.0%和39.0%,而针刺效果最差,为2.2%;接种Vd171一次和两次对棉株均具有较好的免疫效果,其防治效果分别为85.6%和81.4%;先接种分生孢子、培养滤液对棉株均具有较好的免疫效果,其防治效果分别为85.6%和81.1%;先接种Vd171能阻止Vd080在棉花根部的定殖和在植株体内的扩展;Vd171能显著诱导棉苗防御相关基因PAL、4CL和CHI的表达,其中,GhPAL、Gh4CL和GhCHI变化最大,分别为对照处理的2.2、8.5和2.6倍,均显著或极显著高于对照;经Vd171诱导的棉苗下胚轴中PPO、PAL、POD和CHI酶活性均极显著高于对照,分别较对照提高31.9%、131.0%、57.1%和102.1%,子叶中PAL、CHI和POD酶活性也显著高于对照,分别较对照提高22.1%、39.6%和7.1%,PPO酶活性与对照无显著差异;先接种Vd171诱导了细胞木质化和活性氧的爆发。【结论】大丽轮枝菌弱致病力菌株Vd171可以有效地诱导棉花对黄萎病产生抗性,在棉花黄萎病防治上具有较好的应用前景。