宁夏六盘山区黄牛杂交改良群体GHR基因多态性分析（摘要）

[目的]对宁夏六盘山区黄牛杂交改良群体生长激素受体（GHR）基因的多态性进行分析,为宁夏黄牛杂交改良选育提供理论参考。[方法]采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性方法（PCR-RFLP）,对该群体70个个体的GHR基因多态性进行检测。[结果]扩增出338bp的目的片段,PCR产物被限制性内切酶AluI消化后表现出多态性,其中AA基因型频率为75.71%;BB基因型频率为24.29%。[结论]共检测到AA和BB2种基因型,六盘山区黄牛杂交改良群体GHR基因具有多态性。     

柱状黄杆菌对草鱼TLRs基因表达水平的影响

用柱状黄杆菌Flavobacterium columnare G4株感染草鱼Ctenopharyngodon idella,分别在感染1、4、7d后提取感染组和对照组草鱼鳃、脾脏、肝脏、肠道和头肾5种组织的总RNA,并采用半定量RT-PCR方法检测不同组织中Toll样受体3(TLR3)、Toll样受体7(TLR7)和Toll样受体22(TLR22)3个抗病毒免疫基因的表达变化.结果表明:注射柱状黄杆菌7d后,TLR3在草鱼鳃、肝脏、肠道和头肾4种组织中的表达显著上调(P＜0.05);注射柱状黄杆菌4d和7d后,TLR7和TLR22在5种组织中的表达均显著上调(P＜0.05);而注射柱状黄杆菌1d后,TLR22在鳃、脾脏和肝脏组织中的相对表达量就显著上调(P＜0.05).研究表明,TLR3、TLR7和TLR22基因在机体应对细菌感染的免疫反应过程中发挥着重要的作用.     

凡纳滨对虾Toll受体和溶菌酶mRNA组织表达的差异研究

采用荧光定量PCR技术,检测了凡纳滨对虾不同组织(血淋巴、鳃、肌肉和肝胰腺)中Toll受体和溶菌酶mRNA的相对表达量。结果表明:凡纳滨对虾Toll受体和溶菌酶mRNA在不同组织间的表达量存在显著差异。Toll受体mRNA在各组织中的相对表达水平由高到低顺序依次为血淋巴>鳃>肌肉>肝胰腺。溶菌酶mRNA表达水平则依次为血淋巴>鳃>肌肉>肝胰腺,但血淋巴和鳃之间无显著差异。溶菌酶mRNA和Toll mRNA表达量重复测定间的变异度在血淋巴和鳃组织间无显著差异。表明鳃和血淋巴是检测凡纳滨对虾Toll受体和溶菌酶mRNA的相对表达量的理想实验材料。研究亮点:Toll受体能够将异物入侵的信号从细胞外传递到细胞内并引起胞内信号级联反应产生各种免疫效益因子,因此其表达水平一定程度上可以反映对虾对病原入侵的灵敏性。溶菌酶活性是评判对虾免疫抗菌能力的重要指标。研究Toll受体和溶菌酶基因表达的组织差异性,可以为后续开展对虾营养免疫学研究中免疫相关基因检测时实验材料的选取提供理论基础。     

中华蜜蜂GnRH相关受体的基因克隆及表达研究

[目的]克隆中华蜜蜂(Apis cerana cerana)促性腺激素释放激素(gonadotrophin releasing hormone,GnRH)相关受体基因,对其进行表达研究。[方法]利用RT-PCR技术克隆了中华蜜蜂的GnRH相关受体基因的cDNA序列,并对其进行生物信息学分析和表达产物的原位杂交组织化学研究。[结果]序列分析显示,GnRH相关受体的cDNA序列全长1 177 bp,开放阅读框长1 050 bp,编码349个氨基酸残基。推导的氨基酸序列具有7个跨膜区;预测的分子量和等电点分别为40.6 kD和9.54。聚类分析显示该蛋白质与其他已知昆虫的GnRHRⅡ具有较近的亲缘关系。原位杂交显示GnRH相关受体基因在中华蜜蜂的脑、精巢、脂肪体以及肠道等组织均有表达。[结论]该研究结果表明GnRH相关受体为昆虫提供了生殖和新陈代谢之间的分子纽带,其在协调昆虫的生殖活动和环境状况的关系中执行了一定的功能。     

猪TOLL样受体2基因在CHO-K1细胞中的表达

将含猪TLR2(猪Toll样受体2,pTLR2)基因的真核表达载体PcDNA3.1/CT-GFP-pTLR2,采用脂质体法转染到CHO-K1细胞,用G418持续筛选获得了阳性细胞克隆.阳性细胞克隆系经PCR和RT-PCR检测表明:pTLR2基因得到稳定整合并能成功地转录.荧光显微镜观察,转染细胞可见绿色荧光,表明获得了表达pTLR2的克隆细胞系.     

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 以小尾寒羊、同羊、内蒙细毛羊作受体，根据季节设计不同的同期发情处理方法，繁殖季节设计三个组，(Ⅰ)栓+PG组，(Ⅱ)栓组，(Ⅲ)PG组。非繁殖季节设计四个组(Ⅰ)栓+PG组，(Ⅱ)栓+PMSG组，(Ⅲ)栓组，(Ⅳ)PG+PMSG组。结果表明：(1)在繁殖季节，同一处理品种间同期发情率及受体利用率之间差异不显著。但非繁殖季节，同羊和内蒙细毛羊同期发情率和受体利用率很低。选用小尾寒羊作受体比较理想。(2)单独使用阴道海绵栓或与其它激素配合诱导母羊发情效果优于用PG组或PG+PMSG组，在非繁殖季节使用孕激素诱导     

细胞因子信号转导负调控蛋白-1的研究进展

细胞的生长、分化和成熟进程受到很多因素的影响,细胞因子作为一类重要的生物分子在其中发挥着重要的作用.目前认为:细胞因子是通过与相应的受体结合介导细胞外的信号向细胞内传导,发近其生物学活性.细胞因子的信号转导过程受到多种调节机制的影响.     

猪雌激素受体基因PvuⅡ酶切片段多态性与产仔性能的关系

研究了雌激素受体(ESR)基因对苏钟猪和二花脸猪繁殖性能的影响。记录 93头母猪 660多窝产仔数用以分析雌激素受体基因型对总产仔数、产活仔数的影响。结果表明,雌激素受体基因A和B等位基因的频率,苏钟猪分别为 0. 536 6和 0. 463 4,二花脸猪分别为 0. 307 7和 0. 692 3;二花脸猪各雌激素受体基因型间头胎总产仔数和产活仔数差异显著(P<0. 05);苏钟猪头胎总产仔数AA基因型与AB、BB基因型之间差异显著(P<0. 05);二花脸猪经产总产仔数和产活仔数AB基因型与BB基因型之间差异显著(P<0. 05)。     

人雌激素受体cDNA在酵母细胞中的表达

根据人全长雌激素受体cDNA序列,用RT—PCR方法使乳腺癌细胞MCF-7株扩增人雌激素受体基因(hER cDNA),通过pGEM—T／hER载体克隆到酵母表达载体中,并转化到酿酒酵母细胞中,用Western blot法和免疫组化法检测hER cDNA的表达。结果表明：hER cDNA在酵母细胞中成功表达,可用于建立环境雌激素的酵母细胞检测体系。     

快速筛选环境雌激素酵母细胞的试验研究

通过分子生物学技术将雌激素效应元件(ERE)基本序列插入β-半乳糖苷酶的Lac Z报告基因的上游．并将其置于重组酵母细胞雌激素受体(ER)的调控之下。结果表明：当环境雌激素作用于酵母细胞时,会使ER发生变构效应．与ERE结合使LacZ基因得以表达．其表达量与环境雌激素的污染程度具有剂量效应关系,通过检测β-半乳糖苷酶的活性,可反映环境雌激素的污染程度;与双酚A和苯甲酸雌二醇活性相比较,β-雌二醇活性最强,但双酚A活性明显高于苯甲酸雌二醇。