猪源伪狂犬病病毒AH02LA株糖蛋白的基因序列测定与对比分析

为了分析猪源伪狂犬病病毒AH02LA株糖蛋白的基因序列特征,本研究设计了17对特异性引物,通过PCR扩增AH02LA株的11个糖蛋白基因并进行序列测定,然后将其与PRV变异株(TJ株与HeN1株)和PRV经典株(Bartha株与Kaplan株)作比对分析。结果:成功扩增了11个糖蛋白基因序列,序列比对发现,AH02LA株的gB、gD、gG、gK和gM基因与PRV变异株的同源性为100%,而与PRV经典株的同源性为98%~99%;AH02LA株的gC、gE和gI基因与PRV变异株的同源性为99%,而与经典株的同源性为95%~97%,而且AH02LA株的gB、gC、gD、gE、gI和gN基因的插入或缺失也与变异株完全一致。研究表明,AH02LA株的主要糖蛋白基因序列与变异株高度同源,该毒株是一株典型的变异株。     

1只秦岭地区野外捕获野猪重要猪源病毒的检测及PCV2分离株基因序列分析

病毒病是严重危害养猪业的重要疫病,秦岭山中存在大量野猪,其携带猪源病毒的情况尚不明确。本研究对1只从秦岭山中救治的野生仔猪携带的几种猪重要病毒进行了检测。分别采集了野猪的血液、口腔拭子、眼拭子、鼻拭子及肛门拭子样品,通过PCR或RT-PCR方法分别检测了猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒1型(PCV1)和2型(PCV2)核酸,对检测阳性的病毒进行了分离。克隆了PCV2分离株的全基因序列,进行了全基因序列分析。结果显示,在所有类型样品中均未检出CSFV、PRRSV和PPV核酸;在血液中均检测到PCV1、PCV2和PRV核酸;在肛门拭子和口腔拭子中检测到PCV2核酸,口腔拭子中还检测到PCV1核酸;眼拭子和鼻拭子中未检出目标病毒核酸。将血液处理后接种PK15细胞进行病毒分离,细胞盲传8代后,可观察到细胞出现CPE,收集细胞后通过PCR可以检测到PCV1、PCV2和PRV核酸阳性。PCV2分离株的全基因序列长度1 767bp,序列分析表明该分离株与从发现该野猪地区养猪场分离的9个PCV2分离株的全基因同源性在99.3%以上,与GenBank上登录的PCV2陕西株的全基因同源性为96.0%~99.6%,从全基因的同源性分析,可以推测该PCV2野猪分离株极有可能来自家养猪。本研究初步发现,秦岭地区的野猪携带有来自家猪的重要病毒,在该地区家猪传染性病毒病的防控中应考虑通过野猪携带和扩散病毒的问题。     

猪伪狂犬病的诊治

就猪伪狂犬病的病原体、发病特点、临床症状、剖检变化及防治方法进行了介绍。     

鸭鹅伪结核病的分析诊断和防治方案

伪结核病是由伪结核耶尔森菌引起的一种接触性传染病。其特征性病变为多个器官中形成类似结核病的干酪样结节。伪结核病广泛分布于世界各地,其易感动物以家兔、鼠等啮齿动物为主,哺乳动物和禽类也可感染。虽然鸭鹅伪结核病发生较少,但也有报道。北京某麻鸭养殖场曾暴发本病,发病率为22.70%,死亡率为13.60%。需要养殖者给予一定重视。本文从病原、流行病学、临床症状、病理变化、诊断和鉴别、预防措施和治疗方法等方面对鸭鹅伪结核病进行了介绍。     

利用杆状病毒表达系统表达PRV/gE蛋白及间接免疫荧光抗体(IDF)检测方法的建立

为了建立高效灵敏的伪狂犬病病毒(PRV) gE蛋白的间接免疫荧光抗体诊断方法,本研究将PRV/HN/SMX/2012毒株gE蛋白的自身信号肽及胞外域片段克隆到pFastBacHT B载体上,构建重组质粒pFastBacHTB-gE,并转化至大肠杆菌DH10Bac感受态细胞中,经过3次蓝白斑筛选获得含有gE基因的重组杆粒rBacmid-gE。随后,将该杆粒转染至sf9昆虫细胞中,获得重组杆状病毒rAcMNPV-gE。经Western blot和间接免疫荧光实验(IFA)进行鉴定分析,发现重组gE蛋白在sf9细胞中表达。利用该sf9细胞建立检测血清中gE抗体的间接免疫荧光抗体(IDF)方法,通过反应条件的优化发现,将血清和羊抗猪FITC-IgG分别进行1∶40和1∶2 000稀释时所建立的方法能针对血清中gE抗体产生较强的特异性荧光;通过与商业化的ELISA检测gI/gE试剂盒(IDEXX)比较,所建立的检测方法与商业化试剂盒的总符合率为93.18%(164/176),阳性结果符合率93.75%(120/128),阴性结果符合率91.67%(44/48),2种方法存在很强的一致性(Kappa=0.832,CI=95%);-20℃条件下保存2个月的稳定性和重复性良好。     

猪场伪狂犬病的扑灭措施

伪狂犬病毒是属于高度潜伏感染的病毒,而且这种潜伏感染随时都有可能被体内外和环境变化的应激因素刺激而引起疾病爆发。同时基因缺失弱毒疫苗注射带有野毒潜伏感染的动物时,由于活病毒有发生基因重组的可能性,加上种猪饲养的时间长。因此这种可能性和几率就会增大,而且国内外都有因注射弱毒疫苗而引起伪狂犬病暴发的例子。     

一例猪伪狂犬病的诊断与防治

伪狂犬病是由伪狂犬病毒引起家畜和多种野生动物的一种急性、热性传染病.本病对猪的危害最大.2016年5月份吴中区郭巷街道某猪场发现了猪伪狂病的病例,经过一定的防治措施获得了以下实验结果,为今后更好的预防此病提供一定的经验.     

猪伪狂犬病的综合防治

猪伪狂犬病是目前危害生猪养殖业最为严重的传染性疾病之一,给世界各地生猪养殖业均带来不小的经济损失.有调查证实:早在1974年,国内有猫感染此病报道,后期逐渐在猪、牛等家畜中流行发生.而到2010年之后,国内猪伪狂犬病病例报道有增多趋势.总而言之,猪场伪狂犬野毒阳性率高,野毒阳性种猪会终生带毒、不定期排毒,给猪场的安全生产带来隐患.在查阅相关文献资料的基础上,文章就猪伪狂犬病的综合防治做要点阐述,以供同仁参考和借鉴.     

利用CRISPR/Cas9技术构建PRVGD株gI和gE缺失毒株及其生物学特性研究

本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术对本实验室分离得到的PRV GD株的gI和gE基因进行基因敲除,经蚀斑纯化结合PCR鉴定的方法获得gI和gE基因缺失毒株,命名为PRV GD-delgI/gE。试验测定了该基因缺失病毒在PK-15细胞中培养的一步生长曲线及其对小鼠的致病力。试验结果表明,与亲本毒株PRV GD株相比,PRV GD-delgI/gE在PK-15细胞中的繁殖能力有轻微降低,对小鼠的毒力明显降低,且该基因缺失病毒遗传稳定,可作为新型PRV疫苗的候选毒株,并为针对变异毒株的控制和新型疫苗的研制奠定了一定的基础。