江西省种猪群伪狂犬病血清学横断面研究

为了解江西省种猪群伪狂犬病(PR)的流行情况,寻找狂犬病毒(PRV)感染的潜在风险因素,开展了本次横断面研究。按照估计流行率的抽样策略,随机抽取73个种猪场,根据猪场养殖规模将其分为3种类型,分别进行抽样,然后采用PRV g E-ELISA抗体检测试剂盒进行抗体检测。同时,根据73个种猪场的详细地址,描绘猪场的空间分布图,并对其开展问卷调查,对问卷中涉及的风险因素进行单因素分析,筛选出P0.2的变量,将其导入多因素Logistic回归模型,用倒推法选择变量,进行回归分析。结果发现:江西省种猪群PR的群流行率为28.63%(95%CI:18.26%~38.99%),个体流行率为9.37%(95%CI:8.98%~9.77%);PR阳性猪场多分布于江西省中部的上饶、抚州、鹰潭、宜春等县市;与PR感染相关的2个风险因素是场区周围3 km范围内是否有其他猪场(OR=4.766,P=0.020)和养殖场主是否愿意开展PR净化(OR=0.054,P=0.014)。依据研究结果,建议加强对养殖场主的培训与宣传,使其认识到PR净化的重要性,并掌握PR防控与净化的专业技术。     

基于苹果DNA的NFC苹果汁鉴伪方法的建立

[目的]通过分析比较不同品种苹果的NFC与FC果汁在DNA方面的差异,为NFC果汁的真伪鉴别和NFC果汁标准的建立提供科学方法和试验依据。[方法]在传统CTAB提取DNA方法的基础上加入纳米硅基磁珠（Si-OH@Fe₃O₄ NPs）以提高苹果汁DNA的提取浓度,开发实时定量PCR,以鉴别NFC苹果汁和掺假（AAJ）果汁。[结果]试验确定的磁珠提取DNA最佳条件是样品用量1 mL和颠倒混匀3 min,提取出的DNA浓度均在50～60 ng/mL;在NFC苹果汁中连续稀释DNA的RT-PCR扩增标准曲线是y=-2.095 9x+30.714 0,R²=0.998 5;不同程度掺假NFC苹果汁中DNA的RT-PCR扩增曲线为y=0.968 3x+28.591 0,相关性为R²=0.981 9。[结论]这种基于新的DNA提取方法的RT-PCR技术在NFC苹果鉴伪中有着良好的稳定性、可重复性、可靠性;试验建立的方法可为NFC果汁的鉴伪检验提供有用工具。     

表达H3N2亚型猪流感病毒HA基因重组伪狂犬病病毒的构建

将SV40启动子控制下的LacZ基因表达盒和CMV启动子控制下的H3N2亚型猪流感病毒（SIV H3N2）的HA基因插入到伪狂犬病病毒（PRV）通用转移载体pBdTK-Uni中，获得转移载体pLTK-HA。将该载体与PRV Bartha-K61株基因组DNA通过脂质体法共转染Vero细胞，经过10代蓝斑筛选、纯化和PCR鉴定获得了一株插入SIV HA基因的重组伪狂犬病病毒，命名为rPRV-HA。Western blotting和间接免疫荧光试验证实HA基因在重组病毒感染的细胞中获得了表达。用不同的细胞（PK-15、IBRS-2、Vero和鸡胚成纤维细胞）对该重组病毒与亲本病毒的增殖滴度和致细胞病变进行比较，未见显著差异，对第30代重组病毒的HA基因进行序列分析，表明该重组病毒遗传性状稳定。     

伪狂犬病毒PK/gG/GFP重组转移载体的构建和表达

在构建了含伪狂犬病毒(pseudorabies virus，PRV)湖北株部分PK基因和gG基因转移载体的基础上，利用平端连接的方法将绿色荧光蛋白(GFP)的基因表达盒插入到缺失的部分，并在下游引入了1个多克隆位点，构建了重组转移载体KGDF。用限制性内切酶鉴定重组转移载体KGDF。根据质粒EGFP-C1中的GFP基因序列设计1对引物鉴定GFP表达盒插入的正确性。用脂质体转染试剂盒将KGDF和PRVFIB的基因组或病毒共转染BHK-21细胞，在荧光显微镜下将出现病变的荧光斑挑出得到重组病毒。将重组病毒扩大培养后提取基因组鉴定重组病毒中的GFP基因，并通过挑取病变的荧光斑的方法纯化重组病毒。     

猪伪结核耶新氏杆菌病

1993～ 1998年 ,我们在猪屠宰加工厂和一些饲养单位的检验和检疫中 ,发现猪有猪伪结核病变 ,并从有病变的脾脏和肠系膜淋巴结等器官分离到细菌 ,经东北农业大学鉴定属于耶新氏杆菌属中的伪结核耶新氏杆菌。所分离的菌株经抗原型鉴定属于 4个不同菌体抗原型。从 4个不同抗原型中     

伪狂犬病诊断方法研究进展

伪狂犬病是由伪狂犬病病毒 (Pr V)感染多种家畜、野生动物而发生的急性传染病 ,临床上主要表现为发热、奇痒 (猪除外 )、繁殖障碍和脑脊髓炎 ,对畜牧业特别是养猪业危害极其严重[1,2 ] 。为正确认识和有效防制该病 ,研究人员在诊断上进行了深入研究 ,建立了许多诊断方法 ,现综述如下。1　动物实验将脑、扁桃体、流产胎儿等病料制成 1 0倍组织悬液 ,接种实验动物 (常用家兔 )观察其临床症状以确认。有时也用 1～ 4周龄小鼠作辅助诊断。这是古典而可靠的方法。2　病毒分离鉴定拭子或组织病料接种原代细胞或细胞系分离病毒 ,进一步以电镜等方…     

表达犬瘟热H基因重组伪狂犬病毒的构建及生物学特性研究

[目的]构建表达犬瘟热Onderstepoort株H蛋白的重组伪狂犬病毒,并研究其生物学特性。[方法]通过RT-PCR方法获得Onderstepoort株H基因,插入pcDNA3.1（＋）建立好完整的真核细胞表达盒并将此表达盒亚克隆到转移载体p8AA上。在此基础上再将报告基因LacZ的表达盒插入转移载体,命名为p8AAZH。将p8AAZH与伪狂犬病毒（PRV）Bartha-K61株基因组共转染至BHK-21细胞中进行基因重组包装出毒,待细胞病变后收集病毒液。通过蓝色蚀斑筛选、PCR、电镜观察以及Westernblot,筛选纯化重组病毒并鉴定目的基因的表达。同时在BHK-21细胞上测定重组病毒的生长曲线。[结果]获得了表达H蛋白的重组伪狂犬病毒,重组病毒与亲本Bartha-K61株的生长曲线、病变特征相一致。[结论]成功构建了表达犬瘟热Onderstepoort株H蛋白的重组伪狂犬病毒,H基因的插入不影响重组病毒的增殖特性,为犬瘟热活病毒载体疫苗的研制与开发打下基础。     

荧光定量PCR检测洪湖碘泡虫寄生异育银鲫组织器官的偏好

为了阐明洪湖碘泡虫(Myxobolus honghuensis)在隐性感染异育银鲫(Carassius auratus gibelio, Bloch)不同组织器官中的分布情况, 本研究采集曾发生过喉孢子虫病养殖池塘的 2 龄健康异育银鲫的鳃(丝)、伪鳃、中肾、头肾、 肌肉、脾脏、肝脏、卵巢、血液等 9 个组织器官, 采用荧光定量 PCR 检测分析了不同组织器官的感染率和相对感染强度。结果显示, 所采集的 30 尾异育银鲫都没有明显临床症状, 但鱼体的洪湖碘泡虫感染率为 100%, 均为隐性感染个体; 各组织器官间的感染率存在较大差异, 除肌肉未检出外, 感染率从高到低依次为: 伪鳃(100.0%)、卵巢 (83.3%)、鳃(73.3%)、脾脏(70.0%)、中肾(36.7%)、头肾(23.3%)、肝脏(10.0%)、血液(6.7%)、肌肉(0)。不同组织器官的相对感染强度由高到低依次为: 伪鳃(14.4349±70.0529)、卵巢(0.9556±1.5627)、脾脏(0.3644±0.7854)、鳃 (0.3339±0.2682)、头肾(0.2722±0.3761)、中肾(0.0379±0.1055)、肝脏(0.0019±0.0022)、血液(0.0012±0.0011)。研究表明, 洪湖碘泡虫可系统感染异育银鲫多个组织器官, 其中, 伪鳃感染率和感染强度最高, 可以作为该病早期检测和疫病监测的首选组织器官。     

伪狂犬病毒囊膜糖蛋白gC的研究进展

伪狂犬病毒（pseudorabies virus,PRV）感染能够引起猪的大面积死亡,给养猪业造成巨大损失,减毒活疫苗和灭活疫苗被广泛使用于猪的伪狂犬病防治。PRV的囊膜糖蛋白gC基因（gC）是病毒增殖所非必需的基因,但是缺失gC基因的PRV不能有效地黏附靶细胞表面。通过综述PRV的囊膜糖蛋白gC的结构和功能,以及gC蛋白在疫苗研制中的应用,为伪狂犬病的防控提供依据。