谷氨酸脱酸酶亲和层析介质制备

将Sepharose 4B用环境氯丙烷活化，接丁二胺臂，再用环氧氯丙烷活化，与谷氨酸的N－2氨基偶联。在N，N－二环己碳化二亚胺催化下，以接臂的胶与谷氨酸的C－5和C－1羧基基团偶联。结果表明，谷氨酸N－2氨基偶联和C－1羧基偶联的亲和介质对小麦谷氨酸脱羧酶有部分亲和作用，洗脱下的酶活低，而谷氨酸C－5羧基基团偶联的层析介质对小麦谷氨酸脱羧酶有完全亲和作用，洗脱的酶活高。谷氨酸能从亲和材料上洗脱掉脱羧酶，但它抑制酶活，而同等浓度的4－氨基丁酸和谷氨酰胺梯度洗脱没有作用。     

谷氨酸脱羧酶亲和层析介质制备

将 Sepharose 4B用环氧氯丙烷活化 ,接丁二胺臂 ,再用环氧氯丙烷活化 ,与谷氨酸的 N- 2氨基偶联。在 N ,N-二环己碳化二亚胺催化下 ,以接臂的胶与谷氨酸的 C- 5和 C- 1羧基基团偶联。结果表明 ,谷氨酸 N- 2氨基偶联和 C- 1羧基偶联的亲和介质对小麦谷氨酸脱羧酶有部分亲和作用 ,洗脱下的酶活低 ,而谷氨酸 C- 5羧基基团偶联的层析介质对小麦谷氨酸脱羧酶有完全亲和作用 ,洗脱的酶活高。谷氨酸能从亲和材料上洗脱掉脱羧酶 ,但它抑制酶活 ,而同等浓度的 4-氨基丁酸和谷氨酰胺梯度洗脱没有作用     

粮食中DON-免疫亲和层析净化高效液相色谱法的回收率方法比较

用免疫亲和层析净化高效液相色谱法测定粮食中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇,且与GB/T 23503-2009《食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定免疫亲和层析净化高效液相色谱法》、Romer labs实验室推荐方法、实验室优化方法进行比较。本实验方法在前两种方法的基础上优化后,在0.5mg/kg~5mg/kg的加标水平下,回收率在90.3%~100.2%,RSD在1.2%~2.0%之间,最低检出限则为44μg/kg,定量限为146μg/kg,能够很好的满足实验室分析要求。     

单克隆抗体亲和层析法纯化人白细胞干扰素的研究

本文报道了一种单克隆抗体亲和层析纯化人白细胞干扰素的方法。采用本所研制的α－干扰素单克隆抗体亲和层析柱进行了人白细胞干扰素大规模纯化研究，结果表明，其活性回收率平均达１０６．９％，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ银染法鉴定，白细胞干扰素的大多数活性成分均被吸附和回收，所得的干扰素蛋白成分主要位于分子量１５，０００－２３，０００的干扰素生区域，产品的纯度大大提高；ＥＬＩＳＡ夹心法测定鼠源ＩｇＧ含量小于２０ｎｇ／剂     

N^6—（6—氨基己基）—5‘—磷酸腺苷的合成

由肌苷开始经五步合成出Ｎ＾６－（６－氨基己基）－５＇－磷酸腺苷。对６－氯－９β－Ｄ－呋喃核糖嘌呤的合成进行了改进。１，６－己二胺同６－氯－９－β－Ｄ－呋喃核糖嘌呤－５＇－磷酸发生取代反应，合成出Ｎ＾６－（６－氨基己基）－５＇－磷酸泉甙，基于核苷的总产率约７０％。     

饲料中伏马毒素的测定--免疫亲和柱-荧光光度法

利用免疫亲和层析-荧光光度法对饲料中的伏马毒素B2进行测定,测得其相关系数为0.9589,平均回收率为89.22%,各重复之间的变异系数均小于15%,阳性可用HPLC法进行确认,具有高效、快速、准确、安全等特点。     

应用一步亲和层析法纯化转基因山羊乳腺定位表达的组织型纤维蛋白溶酶原激活剂

对转基因山羊乳腺定位表达的羊奶中组织型纤维蛋白溶酶原激活剂 ( t PA)的分离纯化方法作了研究 ,摸索出一种简单可行的纯化方法。羊奶中 t PA先经冰乙酸和丙酮沉淀后 ,再通过 Benzamidin Sepharose 6B柱一步亲和层析 ,纯化倍数达 671 4.3倍 ,比活性 1 880 0 0 U/mg,活性回收率 2 6%。经 SDS-PAGE还原电泳分析 ,t PA纯度大于 95%,其中低分子双链蛋白占 90 %以上 ;Western-blotting检测证实 ,它和天然 t PA具有相同的抗原性 ;用纤维蛋白平板法检测 ,其比活性与天然 t PA相近 ,并且都可被 t PA单克隆抗体所抑制     

应用磁珠免疫亲和层析法从猪卵泡液中提纯抑制素

采集猪卵泡液 ,用 70 %饱和度硫酸铵溶液沉淀后 ,分别过SephadexG 2 0 0柱和SephadexG 10 0柱 ,最后用磁珠免疫亲和层析法进一步提纯 ,使抑制素纯度从 12 4 μg·mg-1升至 39 4 μg·mg-1。PAGE电泳分析证明 ,提纯物只出现一条相对分子质量为 32 0 0 0的带 ,SDS PAGE电泳分析发现有两条相对分子质量分别为 14 0 0 0～ 15 0 0 0和 170 0 0～ 180 0 0的带 ,即β、α亚基。     

瓜蒌纤溶酶的分离纯化及性质研究

利用亲和层析从瓜萎蛋白粗提液中分离纯化得到一纤溶酶,并对其部分酶学性质进行研究.结果表明,该酶表观分子量为66.0 kD;最适pH值为9.0;在4～40℃活性无明显变化,78℃以上完全失活;在以酪蛋白为底物的水解反应中,温度、酶底物比、pH值、反应时间4种因素对水解反应的影响力大小为:温度>酶底物比>反应时间>pH;Km值为1.89mg/mL,Vmax=555.56μmol/(L·min).     

家蚕丝素结晶区高度重复多肽[GAGAGA]_(16)和[GAGAGS]_(16)的融合蛋白优化表达

为了给深入研究家蚕丝素结晶区的典型肽段结构提供素材,对设计的GST-tag家蚕丝素结晶区典型多肽[GAGAGA]16和[GAGAGS]16的融合蛋白KGA、KGS进行了表达条件优化试验。结果表明,pGEX-KGA和pGEX-KGS表达载体能够有效表达家蚕丝素结晶区的2种典型多肽,KGA和KGS的最佳表达诱导剂IPTG的浓度分别为1.4mmol/L、1.0 mmol/L,诱导时间为5 h。在此优化条件下,KGA和KGS在大肠杆菌(E.coli)中的表达量分别达75 mg/L、110 mg/L。诱导起始时大肠杆菌的菌密度(OD600为0.4~3.0)对2种融合蛋白的表达效率没有显著影响。