茶树咖啡碱合成酶CRISPR/Cas9基因组编辑载体的构建

CRISPR/Cas9技术是一门新兴的基因组定点编辑技术,具有操作简单、高效的优点,可轻松实现对目标基因的敲除、替换和定点突变等操作。该技术刚诞生,就受到了全球生命科学领域研究者的关注,不到3年的时间就已经成功应用于多种动、植物当中。然而CRISPR/Cas9技术在茶树中的应用面临载体构建问题,本文以茶树咖啡碱合成酶为例,联合采用常规PCR、Overlapping PCR和Golden Gate Cloning技术,构建了包含茶树咖啡碱合成酶双靶点的CRISPR/Cas9基因编辑载体,为CRISPR/Cas9介导的基因组编辑技术在茶树中的应用奠定了坚实基础。     

小麦面粉中赭曲霉毒素A的CdSe/ZnS荧光量子点免疫探针检测

构建一种基于荧光量子点免疫探针的小麦面粉中赭曲霉毒素A(OTA)的检测方法。以EDC为活化剂将CdSe/ZnS半导体荧光量子点与OTA单克隆抗体偶联,制备OTA检测探针并评价其检测性能。结果表明:制备的检测探针在3d保存期内具有良好的稳定性。当OTA质量浓度为0.1~0.9μg/L时,检测探针的荧光强度与OTA质量浓度呈线性关系,其相关系数为0.996 3,检出限为0.017 7μg/L。与国标法对照的结果说明,此方法具有可行性。小麦面粉中的加标回收试验结果显示,OTA的回收率为96.0%~102.7%,相对标准偏差不超过4.1%,说明准确性良好。可见,OTA的CdSe/ZnS荧光量子点免疫探针检测方法操作简单、准确度高、结果稳定,有望应用于小麦面粉中OTA的检测。     

超高效液相色谱串联质谱法对水产品中硝基呋喃代谢物的测定

建立了使用Waters UPLC Xevo TQ超高效液相色谱串联质谱仪检测水产品中4种硝基呋喃代谢物的分析方法。匀浆后的样品在酸性环境下水解,并用2-硝基苯甲醛衍生16h,经磷酸氢二钾提取,LMS固相萃取小柱净化后,在三重四极杆多反应监测模式下进行测定。方法采用同位素内标法定量,四种代谢物的检出限(LOD)均低于0.25μg·kg-1,线性范围在0.5μg·L~(-1)到10μg·L~(-1)间,相关系数大于0.99。在0.5、1.0和5μg·kg-1浓度下分别进行添加回收试验(n=5),回收率在75.2%~123.3%之间,相对标准偏差(RSD)小于9.4%。     

超高效液相色谱-质谱/质谱法同时测定蔬菜中7种磺胺的残留量

为建立超高效液相色谱-质谱/质谱法(UPLC-MS/MS)同时测定蔬菜中7种磺胺残留量的方法。样品用1%乙酸乙腈提取，以C18色谱柱分离待测物，采用多反应监测(MRM)离子扫描模式，外标法进行定量，线性良好，相关系数均大于0.999。结果显示：7种磺胺的检出限为0.000 4～0.000 6 mg/kg，样品添加回收率为67.5%～94.1%，相对标准偏差均少于5.3%(n＝6)。该方法简单快捷、定量准确，可满足多种蔬菜中7种磺胺的残留检测要求。     

Nitrous oxide emission from a transplanted rice field in alluvial soil as influenced by management of nitrogen fertiliser

We investigated nitrous oxide (N₂O) emission from an irrigated rice field over two years to evaluate the management of nitrogenous fertiliser and its effect on reducing emissions. Four forms of nitrogenous fertilisers: NPK at the recommended application rate, starch–urea matrix (SUM) + PK, neem‐coated urea + PK and urea alone (urea without coating) were used. Gas samples were collected from the field at weekly intervals with the static chamber technique. N₂O emissions from different treatments ranged from 11.58 to 215.81 N₂O‐N μg/m²/h, and seasonal N₂O emissions from 2.83 to 3.89 kg N₂O‐N/ha. Compared with other fertilisers, N₂O emissions were greatest after the application of the conventional NPK fertiliser. Moreover, SUM + PK reduced total N₂O emissions by 22.33% (P < 0.05) compared with NPK during the rice‐growing period (P < 0.05). The results indicate a strong correlation between N₂O emissions and soil organic carbon, nitrate, ammonium, above‐ and below‐ground plant biomass and photosynthesis (P < 0.05). The application of SUM + PK in rice fields is suitable as a means of reducing N₂O emissions without affecting grain production.     

原子吸收光谱法检测大蒜制品中微量元素锗

[目的]研究不同大蒜制品中锗元素含量的差别。[方法]采用马弗炉灰化样品,火焰原子吸收光谱法测定以金乡紫皮蒜为原料加工而成的黑蒜、蒜蓉辣酱、脱水蒜片、蒜粉、糖醋蒜5种制品中锗的含量。[结果]试验表明,黑蒜中锗含量为1.384 mg/g,蒜蓉辣酱中锗含量为0.784 mg/g,脱水蒜片中锗含量为0.913 mg/g,蒜粉中锗含量为0.956 mg/g,糖醋蒜中锗含量为0.827 mg/g。5种蒜制品中均含有锗元素,其含量由多到少依次为黑蒜、蒜粉、脱水蒜片、糖醋蒜、蒜蓉辣酱。[结论]研究可为大蒜及大蒜制品的开发利用提供参考依据。     

绵羊卵泡发育过程中关键信号通路研究进展

卵泡从原始卵泡发育为成熟卵泡，直至排卵、黄体发育等过程都受到精密的调控，产生大量的优势卵泡是绵羊产多羔及实现快速扩繁的关键因素。研究发现，相关信号通路和转录因子通过影响绵羊卵泡中卵母细胞、颗粒细胞的生长，进而调控卵泡的发育成熟，对这些信号通路进行深入了解，有助于探索卵泡发育的调控机制，早日实现绵羊高效繁育。Notch是卵泡发育过程中发挥重要作用的高度保守信号通路，PI3K/AKT/mTOR信号通路各成员都是广泛存在于细胞内的信号转导分子，在卵泡发育早期发挥了主要作用，还有间隙连接（gap junction，GJ）和跨带突触（transzonal projections，TZPs）等物理连接方式，在细胞间的交流通讯起到重要作用。作者详细介绍了Notch信号通路、PI3K/AKT/mTOR信号通路、间隙连接及跨带突触的结构功能在绵羊卵泡发育中的调控作用，为进一步探明绵羊卵泡发育的调控机制提供参考。     

持续被动运动通过抑制软骨细胞NO合成下调MMP-1和MMP-13表达

目的：观察持续被动运动（CPM）和补充一氧化氮（NO）供体——硝酸甘油（NG）对兔骨关节炎（OA）模型中软骨基质金属蛋白酶-1（MMP-1）和MMP-13表达以及NO含量的影响，探讨CPM下调MMPs的可能机制。方法：30只3~4月龄雄性新西兰大白兔，其中6只进行假手术作为正常对照组（NC组），另外24只建立膝关节OA模型，术后随机分为4组，即OA对照组（OA组）、OA硝酸甘油给药组（NG组）、OA持续被动运动组（CPM组）、OA持续被动运动+硝酸甘油给药组（CPM+NG组），每组各6只。NC组和OA组不作处理，NG组给予NG软膏膝关节局部涂抹，CMP组在CPM训练仪上进行膝关节持续被动运动，CMP+NG组即在运动干预的同时给予NG局部涂抹。4周后取各组软骨组织，硝酸还原酶法测定NO含量，HE染色观察软骨形态学变化并进行Mankin''s评分，实时荧光定量PCR（RQ-PCR）检测MMP-1和MMP-13 mRNA水平，免疫组织化学法测定MMP-1和MMP-13蛋白表达量。结果：NO含量、Mankin''s评分以及MMP-1和MMP-13 mRNA和蛋白水平在OA组明显高于NC组（P<0.01），NG组高于OA组（P<0.01），CPM组低于OA组和NG组（P<0.01），CPM+NG组低于NG组（P<0.01），但高于CPM组（P<0.01）。结论：CPM通过抑制软骨细胞NO合成下调MMP-1和MMP-13表达，进而对软骨细胞起保护作用。     

基于工作过程CAD/CAM工程技术应用课程教学改革实践

针对CAD/CAM工程技术应用的课程体系、理论课程教学内容、教学方法和实验课程教学进行了改革,成功地建立了CAD/CAM工程技术应用课程体系,取得了良好的教学效果。     

非奇异H-矩阵的判定

运用矩阵分析方法,讨论了非奇异H-矩阵的判定问题,得到两个非奇异H-矩阵新的判定准则,并以数值例子说明判定方法的有效性.