斑点叉尾鲴嗜麦芽寡养单胞菌的分离鉴定及系统发育分析

从发生在四川、重庆等省市的斑点叉尾妇急性流行性传染病病鱼的肝脏、肾脏内分离到1株高致病性菌株（CCF00024），人工感染健康鱼表现出与自然痛鱼相同的症状，并从中分离获得同种细菌，证实其为斑点叉尾鲴急性流行性传染病的病原菌。形态、生理生化检测表明，该菌为非发酵型直杆菌，严格需氧，革兰氏阴性，极生多鞭毛，对除麦芽糖和甘露糖以外的多种糖类不利用产酸，氧化酶阴性，DNA酶、蛋白酶、脲酶、赖氨酸脱羧酶阳性，MR、VP阴性。在以该菌16SrDNA序列（GenBank登录号AY970826）和GenBank及RDP数据库内同源性较高的细菌16SrDNA序列构建的系统发育树中，分离菌CCF00024与嗜麦芽寡养单胞菌（Stenotrophomonasmaltophilia）聚在一簇，特剐是与5．maltophiliaM5—1的同源性最高，序列相似性达99．6％，结合形态和生理生化特点将其鉴定为嗜麦芽寡养单胞菌（Stenotrophomonasmaltophilia）。药敏试验结果表明，对磺胺甲口恶唑、磺胺异口恶唑、阿齐霉素、洛美沙星高度敏感，而对新霉素、卡那霉素、氨苄青霉素、头孢唑啉、先锋霉素V和链霉素不敏感。     

鸽新城疫病毒分离鉴定及动物感染试验

从发病商品肉鸽组织中分离到3株新城疫病毒,对其基因序列和感染力进行测定和分析。用RT-PCR对3株病毒F基因进行了扩增,测序,3株新城疫病毒的F基因同源性比较及进化分析结果表明,3株病毒均属于Ⅵb亚型,且与2011年比利时分离株亲缘关系较近,F蛋白裂解位点符合强毒特征;肉鸽攻毒试验进一步证实了3株新城疫病毒的高致病性,肉鸽感染新城疫病毒后通过呼吸道及消化道途径排毒,具有高度接触传染性。试验结果证明了鸽感染新城疫病毒后的排毒时间及方式,为鸽新城疫的及早发现与防控提供了依据。     

新城疫病毒疫苗株F蛋白裂解位点改造对诱导HepG2细胞发生自噬的影响

新城疫病毒(NDV)通过启动不依赖p53的内源性凋亡通路特异性诱导肿瘤细胞凋亡.最新研究表明NDV可以引起U251肿瘤细胞发生自噬,并在后期导致细胞凋亡,但其机理尚不清楚.本研究通过反向遗传操作技术对NDV Clone30疫苗株F蛋白的碱性裂解位点进行突变,将F蛋白的裂解位点由弱毒株的GGRQGR ↓ L突变为强毒株的GRRQRR ↓ F基序,并成功拯救出突变改造病毒rC30-FmF.分别将Clone30野生型病毒株rC30-wt与rC30-FmF感染HepG2肝癌细胞,通过透射电镜检测细胞超微结构显示,rC30-FmF感染4h后细胞内出现大量自噬小体及自噬溶酶体.通过westem blot检测自噬标志蛋白LC-3 Ⅱ表明,rC30-FmF感染4h后LC3Ⅱ表达量显著上调,与rC30-wt对照组相比差异极显著(p＜0.01).研究表明,rC30-FmF可以在感染早期增加HepG2细胞自噬程度.从而初步证明F蛋白的裂解位点在诱导HepG2细胞自噬过程中具有关键作用.     

兔出血症-巴氏杆菌病蜂胶二联灭活苗保存期试验

研制兔出血症-巴氏杆菌病蜂胶二联灭活苗2批,分别在4-8℃和室温条件下保存6个月、12个月后进行免疫保护试验。结果显示：蜂胶二联苗在4～8℃和室温条件下保存6个月、12个月,对兔出血症的保护率均为100％;4～8℃保存6个月对巴氏杆菌病的保护率为100％,保存12个月对巴氏杆菌病的保护率为90％;室温保存6个月对巴氏杆菌病的保护率80％,保存12个月对巴氏杆菌病的保护率为70％。据此可以确定蜂胶二联苗的保存期为4～8℃一年或室温半年。     

鹿流行性出血病病毒高通量液相芯片检测方法的建立

为建立可检测鹿流行性出血病病毒(EHDV)的液相芯片快速检测技术,用DNAStar软件对GenBank中EHDV的VP7基因进行序列分析,设计EHDV特异性探针并用生物素标记,与荧光编码微球偶联后与病毒VP7基因的PCR产物杂交反应,用液相芯片检测仪(Liquichip200)检测荧光信号建立了EHDV快速高通量液相芯片检测方法。检测结果显示,该法具有较好的特异性,不与其他虫媒病病毒反应;检测灵敏度为100个TCID50。建立了快速检测EHDV的液相芯片技术,为进一步搭建EHDV快速高通量检测平台奠定了基础。     

西宁地区猪细小病毒病的血清学调查

应用血球凝集抑制试验对青海省西宁地区的某规模化猪场的96份血清样品进行细小病毒病的血清学调查.结果：检出阳性头数8份，阳性率为83％(8／96)     

河南省动物疫病监测预警体系建设的现状及建议

为了有效的防控动物疫病,提高动物疫病的综合防控能力,针对新形势下的动物疫病流行特点,河南省建立了动物疫病监测预警体系。论文介绍了河南省动物疫病监测预警体系的组成部分和监测网络,以及各个监测主体的具体职责。通过对河南省动物疫病监测预警体系现状的分析,指出了此体系中存在的主要问题和不足,并对体系的完善提出了几点建议。     

新城疫病毒融合蛋白单克隆抗体的研制

以纯化的新城疫病毒(NDV)R8E9免疫BALB／C小鼠，最后1次免疫后3d取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2／0)融合。以纯化的NDV和表达NDV融合蛋白(F)的重组鸡痘病毒(rFPV)分别建立了间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫荧光(IIF)方法，并用于单抗筛选的第一、二检测系统。经反复筛选并3次亚克隆后共获得7株针对F蛋白的单克隆抗体，它们的生物学特性和在不同反应系统中的敏感性各有不同。用这7株单抗对国内外不同时期分离的：NDV毒株进行排谱发现，单抗几乎可以与所有毒株反应，表明所得的单抗都是针对NDVF蛋白的抗原保守区。     

鹿口蹄疫抗体间接ELISA检测方法的建立

以纯化的口蹄疫病毒作为包被抗原,建立了检测鹿口蹄疫抗体的间接酶联免疫吸附测定（ELISA）。最佳反应条件是：抗原包被质量浓度为40μg/mL,血清稀释度为1：100,检测的灵敏度为1：400。     

广西山羊蓝舌病血清学调查及流行区域分布的影响因素分析

为了解广西地区山羊蓝舌病(BT)流行现状,本研究采用免疫扩散试验对采自广西11个地区的3 646份山羊血清进行BT血清学调查,结果表明,广西地区山羊群普遍存在BT感染,并且血清阳性率存在地域性差异,阳性率为6.3%～45.1%,平均阳性率为20.5%。对不同生长阶段山羊的血清阳性率进行统计,结果显示成年羊的阳性率高于羔羊,分别为22.1%和17.4%,这可能与成年羊接触媒介昆虫的机会较多有关。对BT流行区域分布与地理位置和气候等自然因素之间的相关性分析表明,广西山羊BT血清阳性率与地理位置有一定相关性,与年平均气温显著相关,与年平均降雨量无显著相关性,由此可见,地理位置和气温是BT流行病学的影响因素。