中药对细菌耐药质粒消除作用的研究概况与展望

目前．细菌耐药性问题已经成为全球关注的一个热点。由于耐药性是细菌在有药物存在的不良生存环境下产生的本能生理反应,是适应环境、维持生命所必需的特性。因而不管研制什么样的新一代药物都不可能完全避免细菌耐药性的产生。国外研究表明．某些天然植物药物具有良好的抗菌活性．并且与合成抗菌药物联合应用时．可以增强抗菌药物的抗菌活性．还可以抑制或者消除细菌的耐药性。     

重组TroponinⅠ分离纯化工艺的建立

美国波士顿儿童医院科学家在研究抗癌新方法及寻找新血管生长抑制剂的过程中,从无血管且具有抗癌作用的软骨提取物中分离纯化到TroponinⅠ,并证明TroponinⅠ能够抑制血管内皮细胞生长和血管形成,阻断新血管生长及抑制实体瘤的生长与转移,其生物活性比目前已进入临床试验的所有的同类血管形成抑制剂包括endostatin和angiostatin要强10～100倍,是一种极具研究和开发价值的新型抗肿瘤药物。我们在构建重组表达质粒pET22b（＋）-TnⅠ的基础上,拟建立了TroponinⅠ的纯化工艺方案,这为明确它的临床药理学性质及开发出其临床药用价值奠定了基础。     

伪狂犬病病毒Fa株gp63（gI） 基因核苷酸序列测定及分析

对我国最早分离的伪犬病病毒（pseudorabies virus,PRV)Fa株糖蛋白gp63(gI)基因核苷酸序列及的氨基酸序列作了测定与分析，完整的gp63(gI)结构基因从起始密码子ATG到终止密码子TGA共有1050个核苷酸残基，编码由439个氨基酸残基构成的多肽链，4种核苷酸残基的构成比分别为：G35．9％，11.33%,T11.81%,C40.95%,G C含量达76．85％，PRV Fa株gp63基因核苷酸序列与Nice株的相比，两者同源性达98．13％，仅存在3个核苷酸残基的缺失变异，氨基酸推导序列分析表明，糖蛋白gp63具有典型膜蛋白特征，与Nice株相比，同源性为97．42％，gp63基因起始密码子由3个连续的ATG组成，ATG上游区域内无启动子调控区序列。     

鸡痘病毒282E_4株TK基因重组载体质粒的构建

应用已克隆的鸡痘病毒（ＦＰＶ）２８２Ｅ＿４株基因组ＴＫ基因，在ＮｃｏⅠ部位引入痘苗病毒Ｐ７．５启动子和Ｐ１１启动子控制下的大肠杆菌ＬａｃＺ基因，经酶切鉴定，成功地构建了用于ＦＰＶ重组的载体质粒。与亲本毒株在鸡胚成纤维细胞内共转染，产生了表达ＬａｃＺ基因的重组鸡痘病毒。经传代筛选、纯化，重组病毒较稳定。实验结果表明，以ＴＫ基因构建的重组载体质粒可用于外源基因的重组表达研究。     

内蒙古白绒山羊Hairless基因实时荧光定量PCR标准质粒和标准曲线的构建

根据GenBank中绵羊、牛的Hairless和β-actin基因编码区保守序列,设计特异性引物,提取皮肤组织总RNA,经反转录RT-PCR扩增,产物回收纯化后与pGM-T载体连接,转化大肠杆菌感受态细胞Top10,质粒提取后经酶切、PCR和测序鉴定,获得阳性Hairless、β-actin重组质粒;将阳性重组质粒按103～107拷贝/反应梯度稀释作为模板,进行实时荧光定量PCR,系统软件自动生成标准曲线及回归方程。结果显示,产物熔解曲线峰值单一,说明引物特异性高,且无引物二聚体;Hairless和β-actin基因标准曲线相关系数分别为r2=0.998、r2=0.999,说明线性关系好。重复性试验结果显示,所构建的重组质粒9次同条件扩增Ct值具有良好的重现性,且变异率小于6%（107拷贝/反应除外）,说明标准曲线重复性好。试验成功构建了目的基因Hairless、内参基因β-actin的标准质粒和标准曲线,为实时荧光定量PCR检测绒山羊Hairless基因的mRNA表达水平奠定基础。     

Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因的克隆表达及纯化

鸭病毒性肝炎(Duck virus hepatitis,DVH)是雏鸭的一种传播迅速、高度致死、以肝脏肿大和出血为主要特征的病毒性疾病,主要侵害4周龄以内的雏鸭。目前,认为本病包括3种类型,Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型,分别由Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型鸭肝炎病毒(DHV)引起,其中Ⅰ型和Ⅲ型属于小RNA病毒科,Ⅱ型属于星状病毒科。三者在抗原上互不交叉,但引起的症状与病变很相似。Ⅰ型鸭肝炎病毒呈世界性分布,严重危害养鸭业的发展,其VP1蛋白是最容易发生变异的蛋白,位于病毒衣壳的表面,是小RNA病毒中的     

传染性喉气管炎病毒gB基因的主要免疫原片段在大肠杆菌中的表达

利用DNASIS等软件分析传染性喉气管炎病毒（ILTV）WG株的gB蛋白抗原性，筛选出一段抗原性较强的片段，该片段位于邸蛋白的403位至686位氨基酸残基之间。设计引物，引入双酶切位点EcoR Ⅰ，Sal Ⅰ，将目的片段t-gB插入原核表达载体pET30a（＋），得到重组表达质粒pET—tgB并转化到大肠杆菌BL21中，经IPTG诱导后，表达分子量为37ku的融合蛋白His—tgB，表达量占菌体蛋白的40．6％。Westemblot分析表明，His-tgB具有免疫反应性。重组蛋白免疫兔之后可以产生针对ILTVgB的特异性抗体。     

大肠杆菌耐药基因定位及耐药质粒消除

对采集的9株野生型大肠杆菌在药敏试验的基础上,进行了耐药基因定位。结果表明,4个菌株的氨苄青霉素耐药基因位于质粒上,不同畜群来源菌株之间耐氨苄青霉素质粒存在差异。用中草药艾叶的乙醇提取物和蒸馏提取物对大肠杆菌庆大霉素耐药性及耐药质粒进行了消除试验,结果艾叶乙醇提取物的消除率最高可达69.4%。     

猪生产中GRF基因质粒的应用研究进展

随着分子生物学的发展,将生长激素释放因子(GRF)基因质粒注入到动物体内,并改变动物机体的生长机能和营养调控已成为现代营养学研究的热点。本文主要从pGRF的来源、作用特点、作用机理及在猪生产中的应用等方面进行了概述。