PCV2感染性分子克隆的制备及体内外感染性试验

将猪圆环病毒2型（Type2 porcine circovirus，PCV2）JXL株cDNA插入到载体pMD18-T中，获得的pMDT-PCV转染猪肾细胞PK15细胞系，盲传4代后，利用PCV2阳性猪血清进行间接免疫荧光抗体试验（IFA），能检测到特异性荧光。将pMDT-PCV质粒DNA腹股沟淋巴结注射40日龄仔猪2头，分别接种2、3次，接种剂量500μg／次，首次注射35d心脏放血致死。在体内感染性试验期间，动物未出现明显临床症状。试验结束，病理切片结果显示，不同淋巴组织中分别存在淋巴细胞缺失或增多的现象；肾小球、扁桃体、空肠淋巴结和股前淋巴结等冰冻组织切片中存在大量PCV2病毒抗原；血清中PCV2特异性的ELISA抗体效价迭1：2560，IFA效价为1：1280；通过聚合酶链式反应（PCR）可以分别从体外感染PK15细胞和体内感染动物及同圈饲养的空白对照猪的淋巴组织中扩增到病毒特异性基因片段。本研究证明含有单拷贝PCV2的重组质粒pMDT—PCV在体内、外均具有感染性，能衍生出病毒，并产生符合自然感染PCV2的大体病变和组织病理学变化，并激发较强的体液免癌应答。     

大鼠BDNF基因真核表达载体的构建

从23日龄大鼠脑组织中抽提总RNA,应用RT-PCR技术扩增脑源性神经营养因子(BDNF)基因片段,将此片段克隆入T载体,酶切反应鉴定。然后双酶切BDNF-T载体和空质粒pEGFP(N1),将所获目的片段和线性空载体用T4 DNA连接酶连接,构建真核表达载体pEGFP(N1)-BDNF,并进行酶切反应鉴定及DNA测序。序列测定的结果与GenBank比较,所克隆的BDNF基因从起始密码子ATG到终止密码子TAG全长共750 bp序列完全相同。结果表明成功构建真核表达载体pEGFP(N1)-BDNF,为进一步研究BDNF基因表达,神经系统疾病治疗和生物制药奠定基础。     

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)诊断DNA微阵列的构建

为构建猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）诊断DNA微阵列，应用RT—PCR从猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）C14—2分离株和欧洲型弱毒疫苗株VP046扩增并克隆获得戋洲型重组质粒C14P9（基因号：AY775132）、PRRS—PS9（基因号：AY775134）、Ulb（基因号：AY775135）、Y11（基因号：AY775133）、Y12（基因号：AY775136）和欧洲型基因重组质粒E6和E8。PCR法制备的靶基因和探针纯化后，质量浓度分别为300～600mg／L和200-400mg／L。芯片杂交动力学研究表明，杂堑信号强度随靶基因和探针浓度的增加而增强，最佳靶基因质量浓度为200mg／L，探针适宜范围为3～3000μg／L，系统灵敏性为3μg／L。靶基因杂交特异性研究表明，除个别靶基因在某一温度下存在交叉反应和杂交信号弱外，大多数靶基因在40～56℃下杂交信号强。采用AY775133、AY775134、E6和E8靶基因构建PRRS诊断DNA微阵列在40℃下预杂交1h、48℃湿盒避光杂交6h后经洗涤和扫读分析，杂交信号强、斑点明显、特异性高，按SNR≥1．5为标准能够区分PRRSV蔓洲型和欧洲型。应用PRRS诊断DNA微阵列检测了AMERVAC-PRRS、PRRSV弱毒疫苗、C14—2株、SCU株和临床样本，能正确区分PRRSV基因型。研究结果表明构建的PRRS诊断DNA微阵列可用于PRRS临床诊断和基因分型。     

紫科1号红豆杉栽培技术研究

以中科院选育的优良无性系紫科1号红豆杉为试材,设置密度、底肥各3个水平共9个交叉组合,3次重复,在4种海拔进行栽培试验。结果表明:紫科1号红豆杉最适宜的栽培条件为海拔784 m左右、底肥0.5 kg/株左右(复合肥)。该条件下紫科1号红豆杉第1年高生长量可达40 cm以上,分枝达8个以上,冠幅可达14 cm。因此,推荐种植密度为25 000株/hm2(50 cm×80 cm)。     

黑杨派南方型无性系高生长与气候条件的斜率关联度分析

用灰色系统理论的斜率关联度分析法，求得影响黑杨派南方型无性系高生长的主要气候因子依次为：降水量、极低温、极高温、蒸发量、日照时数、积温、年均温（或相至湿度）、相以湿度（或年均温）、无霜期。     

Identification of differentially expressed genes associated with bud dormancy release in tree peony （Paeonia suffruticosa） by suppression subtractive hybridization

A subtractive cDNA library was developed to study genes associated with bud dormancy release in tree peonies.In order to identify genes that are highly expressed in buds released from dormancy,588 clones were examined by differential screening.Of these,185 clones were selected to be sequenced.A total of 37 unique sequences were obtained of which only 31 sequences have matches in the NCBI database or the Arabidopsis thaliana protein database.Semi-quantitative RT-PCR was used to confirm further the expression...     

福建柏抗盐无性系初步选择研究

对福建柏1年生无性苗木用100 mmol.L-1NaCl进行胁迫处理,在处理60 d后对苗木的叶绿素、脯氨酸、可溶性糖、丙二醛等指标进行测定,结果表明:参试的福建柏无性材料间叶绿素含量、可溶性糖含量、丙二醛含量、脯氨酸含量等指标存在明显差异,且受遗传力制约,这些指标可作为抗盐无性系选育的依据;盐胁迫下309、327、328、381-2无性系的叶绿素、脯氨酸、可溶性糖含量分别比总体平均值增加了6.8%～57.1%、11.7%～17.3%、0.7%～14.5%,丙二醛含量减少了17.8%～56.8%。说明这4个无性系有相对较高的抗盐性,初步筛选出309、327、328、381-2抗盐无性系。     

油桐无性系生产力判别评级与预测研究

根据选自福建、浙江等５个油桐主产省（区）７６个油桐优良单株无性系在金华试验点的生长表现，按照其中已测定含油率、产果量和其它性状的６５个油桐无性系样本，建立了生产力评级的Ｆｉｓｈｅｒ判别模型，该模型对分属Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ４个产油量水平的各无性系的回判正判率分别达到了１００％、１００％、８２％、１００％。进而应用该模型预测了未进行气干果含油率测定的其它１１个无性的生产力等级。据此，从７６个无性系中筛选出４４、４８、５４、５６号４个高产优良无性系。     

柑橘衰退病毒柚类分离物CP基因的克隆及原核表达分析

以来自湖北省的HB柚柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)分离物(CTV-HB1)为材料,利用RT-PCR技术对其CP基因进行克隆,序列分析结果表明:CTV-HB1与典型茎陷点分离物SY568和NUagA的核苷酸和推定氨基酸的序列相似性均在97%以上,而与CTV速衰分离物T36和弱毒分离物T385和T30的核苷酸和氨基酸序列相似性较低,均在95%以下。将CP基因片段连接到表达载体,转化大肠杆菌后诱导重组蛋白的表达。SDS-PAGE和Westen-blot分析结果表明,经IPTG诱导后产生了预期大小的重组蛋白,该蛋白可与CTV-L5提纯病毒制备的多克隆抗体发生特异性免疫反应。     

油茶子代林群体产量性状的研究

通过对油茶无性系及其半同胞子代、自交子代和杂交子代4种不同群体的产量结构、产量频率分布、产量构成等产量性状进行系统深入的研究,探索4种群体及其优良林分的结实特性和产量规律,为油茶杂交子代,优良家系和无性系等良种的生产应用和栽培技术、以及进一步开展杂交和选择育种研究积累了必要的技术和理论知识．