鸡缩胆囊素(CCK)在T4噬菌体表面的展示及免疫原性研究

采用T4噬菌体表面展示系统，将CCK-33肽四多串联体及八多串联体展示在T4噬菌体表面，并研究其免疫原性。将CCK四串联体和八串联体与SOC基因缺失的、依赖溶菌酶的噬菌体ФT4-Z1重组，获得重组噬菌体CT-4CCK和西T-8CCK。SDS-PAGE和Western Blot检测结果表明，CCK多串联体蛋白已经成功展示在T4噬菌体表面，其融合蛋白分子量约30ku和41ku，能够与CCK标准阳性血清发生特异性反应。以重组噬菌体为免疫原制备油佐剂疫苗主动免疫胡须肉鸡后，抗体浓度显著升高，肉鸡的体重、采食量都有所提高，而料肉比有所下降。结果说明，鸡CCK蛋白展示在T4噬菌体表面具有良好的免疫原性。     

毒害艾美耳球虫初次感染雏鸡免疫器官IL-2和淋巴细胞增殖功能变化

应用组织匀浆涂片和酸性α-醋酸萘酯酶（ANAE）染色及细胞培养技术和四甲基偶氮唑盐（MTT）测定法对毒害艾美耳球虫（eimeria necatrix，E．necatrix）初次感染雏鸡免疫器官的T细胞比例、白细胞介素-2（interleukin-2，IL-2）诱生活性、T细胞和B细胞对ConA或PMA的增殖功能的动态变化进行了较全面系统的研究。结果发现，E．necatrix初次感染雏鸡，其胸腺和脾脏T细胞比例分别于感染后7～21d和7～24d明显高于对照雏鸡；IL-2诱生活性分别于感染后16～18d和18～21d较对照雏鸡显著升高；T细胞对ConA的增殖反应分别在感染后14～16d和10～18d明显增加。法氏囊和脾脏B细胞对PMA的增殖反应分别于感染后14～24d和14～21d显著高于对照雏鸡。表明E．necatrix初次感染雏鸡免疫器官的IL-2调节及细胞免疫和体液免疫功能均明显提高。     

精子受精抗原-1(FA-1) mRNA在绵羊睾丸和附睾中的表达

本研究通过RT-PCR检测了该基因在绵羊睾丸和附睾中的表达情况。首先,提取绵羊睾丸组织、附睾头、体、尾部组织总RNA,以此为模板,反转录合成cDNA,自行设计引物,PCR扩增出462 bp的目的DNA。然后,将目的片断克隆入T载体,通过菌液PCR和重组质粒酶切,鉴定重组质粒中的目的DNA。再经序列分析鉴定目的片断。同时,以β-actin为内参照物,进行RT-PCR半定量分析,比较精子受精抗原(FA-1)在睾丸、附睾头、体、尾组织中的表达量。结果表明,FA-1在绵羊睾丸和附睾中均表达。     

奶牛附红细胞体和伊氏锥虫二重PCR诊断方法的建立

为建立奶牛附红细胞体和伊氏锥虫两种病原诊断方法并探索二者之间在奶牛感染中的关系,本研究针对两病原分别设计两对特异性引物,建立了奶牛附红细胞体和伊氏锥虫感染的二重PCR诊断方法,其扩增片段大小分别为415bp和237bp。敏感性试验和特异性试验表明,附红细胞体和伊氏锥虫的DNA的最低检测量为0.154pg和0.105pg;与猪肺炎支原体、大肠杆菌、葡萄球菌、鸡艾美耳球虫、牛双芽巴贝斯虫无交叉反应。35份临床血样检测结果为:奶牛附红细胞体阳性率22.89%,伊氏锥虫阳性率8.89%,其中共感染率为2.89%。临床试验表明,该方法可用于奶牛附红细胞体和伊氏锥虫的诊断,特别适用于早期诊断。     

Effect of protein kinase C signal pathway on resistin expression in 3T3-L1 adipocytes

AIM：To investigate the effect of protein kinase C on resistin expression in 3T3-L1 adipocytes.METHODS：The differentiated 3T3-L1 adipocytes were incubated with 50 nmol/L phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) or 5 μmol/L Ro-31-8220 for 24 h.Expression of resistin mRNA was detected by RT-PCR and expression of resistin protein was detected by Western blotting.RESULTS：Compared with control,PMA increased the expression of resistin mRNA and protein in 3T3-L1 adipocytes significantly (P<0.01),while Ro-31-8220 decreased the expression of resistin mRNA and protein in 3T3-L1 adipocytes obviously (P<0.01).CONCLUSION：Protein kinase C signal pathway may regulate resistin expression in 3T3-L1 adipocytes.     

高温条件下复合抗应激剂对肉鸡的影响

本文研究了高温条件下复合抗应激剂对肉鸡的影响。结果表明：经历３２ ℃一周的５ ～８ 周龄肉鸡采食量、增重、饲料转化率均显著下降（Ｐ＜ ０ ．０１） ，饮服复合抗应激剂显著改善增重和饲料转化率（Ｐ＜ ０ ．０１） ， 采食量未见明显改变，饲料转化率达到常温水平。３２ ℃１６ 小时血浆皮质酮、Ｔ３ 显著下降（Ｐ＜ ０ ．０１） 、Ｔ４ 显著升高（Ｐ＜ ０ ．０１） ；３２ ℃１２０ 小时血浆皮质酮、Ｔ３ 升高并超出常温组（Ｐ＜ ０ ．０５） 、Ｔ４ 较１６ 小时下降但仍高出常温组（Ｐ＜ ０ ．０５） 。饮服复合抗应激剂时血浆皮质酮、Ｔ３ 、Ｔ４ 显现相同变化规律，但这种变化得到显著缓解     

网状内皮组织增殖病病毒感染SPF雏鸡外周血液T,B淋巴细胞数量变化

应用ＳＰＡ菌体花环法检测网状内皮组织增殖病病毒（ＲＥＶ）感染ＳＰＦ雏鸡外周血液Ｔ、Ｂ淋巴细胞数量动态变化。结果发现，１日龄ＳＰＦ雏鸡感染ＲＥＶ后７～４９ｄ外周血液Ｔ淋巴细胞数量，１４～４９ｄＢ淋巴细胞数量均明显低于对照组。表明感染ＲＥＶ的ＳＰＦ雏鸡外周血液的细胞免疫和体液免疫水平均下降。     

人工感染猪流行性腹泻病毒仔猪外周血SmIg+B细胞及T细胞的动态观察

本实验对猪流行性腹泻病毒(PEDV)—J毒株细胞培养毒接种的6头仔猪和3头健康仔猪外周血SmIg~+B细胞及T淋巴细胞的数量作了检测。T细胞用总E玫瑰花(Et)及活化E玫瑰花(Ea)试验作检测,SmIg~+B细胞用荧光素标记的葡萄球菌A蛋白(FITC—SPA)菌体法鉴定。结果:接种后,SmIg~+B细胞百分率显著上升,于第23天时达峰值(29.19±3.45),明显高于对照猪(P<0.05),Et玫瑰花百分率虽略有上升,但与接种前相比无统计学差异(P>0.05),而Ea玫瑰花百分率则显著低于接种前水平(P<0.01)。以上结果表明,PEDV—J毒株细胞培养毒可刺激仔猪B细胞明显增多。由此认为,B淋巴细胞积极参与PED的免疫反应过程,体液免疫是PED猪的主要免疫反应。     

甲状腺激素对乌骨鸡蛋白质沉积影响的研究

选用640只雪峰鸟骨鸡，分别饲喂添加不同水平（0．1，0．3，0．5mg／kg）的甲状腺激素（T3）；5～8周龄分成2个组，一组停止添加T，，另一组继续添加T3，以研究甲状腺激素（T3）对雪峰乌鸡蛋白质沉积是否具有后续作用。结果表明：（1）甲状腺激素在2周龄以前可显著（P〈0．01）提高鸟骨鸡的蛋白质沉积；适合量为0．1mg／kg；（2）在乌骨鸡后期日粮中继续添加T3，则乌骨鸡的生长和蛋白质沉积被抑制；后期日粮中停止添加T3后，T3对乌骨鸡蛋白质沉积的抑制作用被解除，生长得到恢复。     

基于转录组数据分析环形泰勒虫对诱导宿主细胞转化相关基因的影响

本试验主要通过研究布帕伐醌(BW720)处理前后,环形泰勒虫转化牛单核细胞(TaNM Ⅰ)转录组数据的变化情况,为进一步研究环形泰勒虫诱导宿主细胞转化的分子机制奠定基础。以环形泰勒虫感染的牛单核细胞为试验材料,设置对照组(二甲基亚砜,DMSO)和试验组(BW720),利用Illumina HiSeq4000测序平台进行高通量测序,将测序得到的原始数据(Raw reads)与GenBank和Rfam数据库进行比对过滤,通过质控获得最终数据(Clean read)。利用Venn分析软件筛选出DMSO组和BW720组中差异表达明显的基因,进行功能注释(GO)以及信号通路(KEGG)分析。随机选择10个基因,利用荧光定量PCR (qPCR)检测基因在不同处理条件下细胞中的表达量。在验证测序结果的准确性后,选出差异表达明显的基因,分析其在TaNM Ⅰ细胞的凋亡、增殖等信号通路方面的作用。结果显示：BW720组和DMSO组中分别得到6 854 019 704和6 627 265 854条Raw reads,过滤、质控后分别得到22 925 606和22 171 427条Clean reads。BW720组和DMSO组中筛选出差异表达明显的基因共计4 054个(P＜0.05),其中,2 146个基因显著上调,1 908个基因显著下调;进一步筛选出共同差异表达的基因367个,其中,显著上调的196个,显著下调的171个。同时,qPCR验证随机选择10个基因的表达趋势与转录组测序结果一致,表明测序结果可靠。然后对差异表达基因进行GO功能注释,筛选到与细胞增殖相关的20个生物学过程、15个细胞组分以及11个分子功能条目。KEGG富集分析结果显示,在Top20的信号通路中筛选出与环形泰勒虫转化细胞有关的一些信号通路,如：癌症信号通路、PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路等。对这些信号通路进一步分析发现：PI3KR3、FOXO1、IL23A、FZD3、AKT、MMP9等基因在环形泰勒虫转化细胞的研究中也有相关文献的报道。本研究表明,在TaNM Ⅰ细胞中DAPK1、FZD3、FOXO3、PI3KR3等可能在感染细胞无限增殖的过程中发挥作用,为后续研究TaNM Ⅰ细胞无限增殖机制奠定了基础。