低氧诱导因子-1α对牦牛肾小管上皮细胞上皮-间质转化的影响

本研究旨在探讨低氧诱导因子-1α（HIF-1α）对牦牛肾小管上皮细胞上皮-间质转化（EMT）的影响。首先对牦牛肾小管上皮细胞进行培养鉴定,并选取第三代细胞对其分别进行药物处理（DMOG组）和不做药物处理（对照组）,检测EMT相关基因在mRNA和蛋白水平的表达变化,并观察细胞形态变化。结果表明：使用Ⅰ+Ⅱ型胶原酶可以更好地获得肾小管上皮细胞;免疫荧光结果细胞CK18表达呈阳性,Vimentin和CD31呈阴性表达;qRT-PCR和Western blot结果表明,DMOG组中的HIF-1α,TGF-β1,α-SMA在mRNA和蛋白水平均较对照组有极显著增加（P<0.01）,而E-cadherin的表达显著降低（P<0.05）;经药物干预后,细胞形态由铺路石样转变为长梭形,经鉴定长梭形细胞为间质细胞。本研究成功建立了牦牛肾小管上皮细胞的分离培养体系,并发现HIF-1α表达上调可以促进牦牛肾小管上皮细胞上皮-间质转化。     

The expression of hypoxia-inducible factor-1 alpha in primary reproductive organs of the female yak (Bos grunniens) at different reproductive stages

The yak (Bos grunniens) is the most important livestock animal in high-altitude regions owing to its prominent adaptability to cold conditions, nutritional deficiencies and hypoxia. The reproductive organs exhibit different histological appearances and physiological processes at different reproductive stages. Hypoxia-inducible factor-1 alpha (HIF-1α) is the regulatory subunit of HIF-1 that crucially regulates the response to hypoxia in mammalian organisms. The goal of our study was to investigate the expression and distribution of HIF-1α in the primary yak reproductive organs at different reproductive stages. Samples of the ovary, oviduct and uterus of 15 adult female yaks were collected and used in the experiment. The expression and localization of HIF-1α proteins and mRNA were investigated using quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR), Western blot (WB) and immunohistochemistry (IHC). The results indicated that the expression of HIF-1α protein in the ovary was higher during the luteal phase than during the follicular phase and gestation period (p < .05). In the oviduct, HIF-1α protein was also more highly expressed during the luteal phase than during the follicular phase and gestation period (p < .01). However, in the uterus, the HIF-1α protein had stronger expression during the gestation period than during the follicular phase (p < .01) and luteal phase (p < .05). The expression of HIF-1α mRNA was similar to that of its protein. Immunohistochemical analysis revealed intense immunostaining of HIF-1α proteins in the follicular granulosa cells, granular luteal cells, villous epithelial cells of the oviduct, endometrial glandular epithelium and luminal epithelium, foetal villous trophoblast, and epithelia of caruncular crypts. This study showed that the expression of HIF-1α in the ovary, oviduct and uterus varies according to the stage of the reproductive cycle. This implies that HIF-1α plays an important role in regulating the stage-specific physiological function of yak reproductive organs under hypoxic environments.     

干扰素α对小鼠Tfh细胞分化的调控作用

通过体外试验观察干扰素-α(IFN-α)对滤泡辅助性T细胞(Tfh)分化及功能的影响。无菌分离小鼠脾细胞,磁珠分选CD4^+T细胞,加入抗CD3单克隆抗体、抗CD28单克隆抗体,重组IL-21、IL-6进行刺激,同时加入重组IFN-α(设不加IFN-α的阴性对照)进行培养,分别在培养后的1、3、5d,流式细胞术检测Tfh细胞(CD4^+CXCR5^+)和CD4^+CXCR5^+PD-1^+细胞的比例;ELISA检测细胞上清中Tfh细胞功能性细胞因子IL-4、IL-21的水平;real-time PCR检测培养3d后Tfh细胞相关转录因子STAT1、Bcl-6以及细胞因子IL-21mRNA的表达水平。结果表明,与阴性组相比,IFN-α能明显促进Tfh细胞的分化及Tfh细胞中PD-1的表达(P<0.05),能提高Tfh细胞功能性细胞因子IL-4、IL-21的分泌水平(P<0.05);IFN-α能正向调控Tfh细胞相关转录因子STAT1、Bcl-6以及细胞因子IL-21mRNA的表达水平(P<0.05)。说明IFN-α可通过正向调控STAT1、Bcl-6的表达,促进Tfh细胞的分化和细胞因子的分泌。     

不同乳制品中α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和乳铁蛋白的测定

建立高效液相色谱-串联质谱法测定牛乳和婴幼儿配方乳粉中α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和乳铁蛋白含量的方法。样品中加入超纯水溶解,经过二硫苏糖醇和碘代乙酰胺溶液反应打开二硫键并保护巯基后,加入胰蛋白酶溶液进行酶解,反应结束后用乙腈水溶液定容,离心,移取上清液待测,外标法定量。结果表明：α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和乳铁蛋白标准曲线在0～100 μg/mL范围内线性良好,相关系数均大于0.995;α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和乳铁蛋白在生乳中的平均加标回收率为93.5%～117.1%,相对标准偏差为1.4%～6.7%。该方法前处理操作简便,分析速度快,灵敏度高,可用于牛乳和乳粉中α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和乳铁蛋白含量测定。     

利用食蚊鱼目标基因转录水平评价四会市 邓村河雌/雄激素物质污染现状

利用西部食蚊鱼(Gambusia affinis)的雌/雄激素受体(ER α/ARα)基因和卵黄蛋白原(VTGα)基因的转录水平为生物学指标,对广东省四会市邓村河的雌/雄激素物质污染现状进行评价.结果显示,与未受造纸废水污染的对照点REF相比,受造纸废水污染位点A、B、C中雌性食蚊鱼臀鳍中的雄激素受体ARα mRNA转录水平均比对照点显著升高(P＜0.05),雄性食蚊鱼臀鳍的雌激素受体ERα转录水平不明显(P＞0.05).造纸废水暴露位点A、B、C中雄性食蚊鱼肝脏中的VTG受体VTGα mRNA转录水平均比对照点显著升高(P＜0.05).结果表明,生活在受造纸废水污染的邓村河中的食蚊鱼受雌/雄激素物质干扰明显,且受雄激素物质污染更严重.鱼类肝脏VTGα基因和臀鳍ARα基因转录水平可适合作为监测水体环境雌/雄激素物质的生物标志物.     

a溶血素纳米孔的研究进展和应用

近年来,随着各学科的交叉融汇,以膜蛋白纳米孔为基础元件的纳米通道单分子检测技术显现出诱人的前景,尤其是以a-溶血素纳米孔为核心元件的检测器件在单分子分析、单分子化学反应研究和DNA测序等方面具有独特的价值而受到重视。本文结合本课题组的研究内容,对以a-溶血素纳米孔为代表的膜蛋白单分子检测的研究进展、功能化制备及组装机理进行了总结,主要概述了膜蛋白作为单分子传感器件在基因测序方面的应用发展状况、可能存在问题以及未来发展前景。     

硅钨酸负载介孔分子筛SBA-15的制备及催化性能研究

[目的]探讨负载型介孔分子筛SiW12/SBA-15的制备及催化性能。[方法]采用水热合成法,以P123为模板剂制备介孔材料SBA-15,由硅钨酸浸渍进一步合成介孔催化剂SiW12/SBA-15。通过IR、TG、SEM和TEM进行表征,并且将负载型介孔分子筛SiW12/SBA-15用于催化α-蒎烯的环氧化反应。研究硅钨酸负载量、催化剂加入量、过氧乙酸与原料摩尔比及SBA-15的焙烧温度对环氧化产物得率的影响。[结果]将硅钨酸负载到SBA-15上并未破坏介孔分子筛的结构,硅钨酸仍保持着Keggin的基本结构。在550℃下焙烧SBA-15,负载量为30%,催化剂用量为2%,CH3COOOH与α-蒎烯的摩尔比为1.2∶1时,α-蒎烯的转化率为99.4%,产物2,3-环氧蒎烷的得率为90.45%。[结论]通过负载法能够制备负载型介孔分子筛SiW12/SBA-15。该催化剂对α-蒎烯的环氧化反应有良好的催化效果。     

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒非结构蛋白nsp1α的表达及活性检测

为获得具有活性的猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)非结构蛋白1α(nsp1α),以BJ-4PRRSV nsp1α真核表达质粒pc DNA3.1-nsp1α为模板扩增nsp1α,克隆到原核表达载体p ET-28a,1 mmol/L异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导含有重组质粒的大肠杆菌BL21(DE3)。SDS–PAGE结果显示,nsp1α以包涵体形式高效表达,重组蛋白大小约为20 ku;Western blot结果显示,表达的重组蛋白能与小鼠抗His标签单克隆抗体反应;包涵体蛋白复性后,ELISA方法检测结果显示,重组蛋白能与1∶6 400稀释的PRRSV阳性血清反应。表明成功表达了nsp1α蛋白,且表达的重组蛋白具有较好的免疫学活性。     

α-酮戊二酸对低水氮下冬小麦产量相关性状的影响

[目的]为建立冬小麦抗逆应变的化学调控技术。[方法]以周麦22为材料,在大田条件下研究了外源喷施α-酮戊二酸对低水氮条件下小麦产量形成相关性状的影响。[结果]外源α-酮戊二酸增加了低水氮条件下冬小麦叶片SPAD值、全氮含量及氮素转运率,千粒重、产量及氮肥偏生产力明显提高。[结论]外源喷施α-酮戊二酸是一种改善低水氮胁迫下小麦生长的有效手段。